紫外分光光度法测定荷叶总黄酮含量

'万方数据第32卷第2期2008年4月南昌大学学报(理科版)JournalofNanehangUniversity(NaturalScience)V01．32No．2Apr．2008文章编号：1006—0464(2008)02—0148—03紫外分光光度法测定荷叶总黄酮含量邓胜国1，邓泽元n，范亚苇(南昌大学食品科学教育部重点实验室，江西南昌330047)摘要：芦丁为标准品，采用紫外分光光度法测定荷叶总黄酮的含量。实验结果表明：芦丁的线性范围为10一50斗g／mL，回归方程为A=32．357×C一0．0064，相关系数R=0．9998，平均加样回收率为99．5％，相对标准偏差为1．72％。此法操作简便，准确可靠，可作为荷叶类保健食品的质量评价方法之一。关键词：荷叶；黄酮；芦丁；紫外分光光度法中图分类号：0657．32文献标识码：A荷叶属睡莲科植物(NelumboNuxiferaGaerth)的叶片，分布于我国大部地区(湖南、湖北、浙江、江苏等)。《本草纲目》载“荷叶服之，令人瘦劣。”近年来，随着人们对荷叶保健功能及药理作用的深入研究，发现荷叶类黄酮是非常有效的活性成分。它具有解暑清热、生发清阳、散瘀止血等功效，已成为研究、利用的热点¨一J。目前大都采用硝酸铝(氯化铝)比色法来测定荷叶类黄酮的含量，但该法的测定易受杂质干扰，定量测定误差大"‘6J。而采用紫外分光光度法测定黄酮，则迅速简便，不消耗样品且灵敏度高、重现性好。故本实验采用紫外分光光度法测定荷叶中类黄酮的含量，为合理开发利用荷叶资源提供理论依据和检测手段。1材料与仪器1．1实验材料及试剂荷叶(江西瑞金产)，芦丁标准品(色谱纯)，AB一8大孔吸附树脂(南开大学化工厂)，乙醇(AR)，其他试剂均为分析纯。1．2主要仪器及设备手提式高速中药粉碎机(温岭市大德中药机械有限公司)，旋转蒸发仪(巩义市英峪予华仪器厂)，HH—S型恒温水浴锅(巩义市英峪予华仪器厂)，HL一2型恒流泵(上海青浦沪西仪器厂)，BSZ一自动部分收集器(上海青浦沪西仪器厂)sP一1910UVPC双光束紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)，索氏提取装置等。2实验方法2．1荷叶类黄酮的提取将已经烘干的荷叶粉碎，加入正己烷，80℃索氏抽提6h至回流液无色，除去脂肪后的荷叶粉放人通风橱中风干，待用。称取一定量的荷叶粉，与一定浓度的乙醇(95％，V／V)}昆合、搅拌均匀，恒温水浴浸提后真空抽滤，滤渣再用相同浓度的乙醇第二次提取，过滤，合并滤液。提取液经浓缩后，上AB一8树脂柱，分别用蒸馏水和70％的乙醇(v／V)洗脱，醇洗部分经浓缩定容至一定的体积，4℃冷藏待用。2．2荷叶黄酮含量的测定2．2．1最大吸收波长的确定分别取100txL的收集液及芦丁标准液，加入2．9mL70％的乙醇，用SP--1910UVPC双光束紫外可见分光光度计于190—400nm下扫描其吸收曲线，比较两扫描曲线，确定荷叶的最大吸收波长为360nm。2．2．2芦丁标准曲线的制备精确称取芦丁标准品5mg，70％乙醇超声波溶解，于50mL容量瓶中定容。分别取0．1mg·mL卅的芦丁溶液0．0，1．0，2．0，3．0，4．0，5．0mL到6个10mL容量瓶中，用70％乙醇定容。取4毫升不同浓度的芦丁溶液，提取的溶剂为空白对照，在波长360nm处分别测其吸光度，绘制芦丁标准曲线。2．2．3黄酮含量的测定取一定量的收集液，按上述同样处理后，与360nm下测定吸光度，根据回归方程计算出收集液中荷叶黄酮的浓度并计算出荷叶收稿日期：2007—03—15基金项目：江西省教育厅重点资助项目(20030058)作者简介：邓胜国(1970一)，男，博士生．·通讯作者：邓泽元(1963一)，男，博士生导师，教授．E—mail：dengzy@ncu．edu 万方数据第2期邓胜国等：紫外分光光度法测定荷叶总黄酮含量黄酮的含量。3重现性实验按制备芦丁标准曲线的方法，取4mL浓度为30斗g／mL的标准品溶液4份，在360am波长处，测定吸光度值。4加样回收率试验准确取0．5mL浓度为2．866mg·mL。的收集液4份，依次加入一定量的芦丁标准品，按上述操作方法进行，采用UV法测定吸光度，算出总黄酮的含量，并计算出加样回收率。5结果与分析5．1最大吸收波长的确定2．82．4吨2．01．6O．8200250300350400A／nm2UU250300350400A／nm图2荷叶类黄酮的紫外扫描图由于黄酮类化合物在190～400nm的区域内存在两个主要的紫外吸收带，即峰带I(300—400)nm和峰带II(220～280)am。由图1及图2可知，在波长为258am，360nm处芦丁和荷叶类黄酮的吸收峰吻合很好，但考虑到许多物质(溶剂等许多非黄酮类物质)在258rim左右均有吸收，杂质干扰大，故选择360am作为测定波长。5．2荷叶总黄酮的含量以芦丁标准液的浓度(C)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，绘制的标准曲线如图3，用最小二1吨Oc芦丁标准藏(mg·mL一‘)图3芦丁标准品吸光度一浓度标准曲线乘法进行线性回归，回归方程为：A=32．357×C一0．0064，相关系数R=0．9998。将收集液的吸光度测定值代入芦丁回归方程，经过计算得出荷叶总黄酮的含量约为2．79％。由于荷叶黄酮粗提物所含杂质(脂溶性色素等)较多，会影响测定结果的准确性，因此必须通过AB一8树脂柱将其分离纯化后再进行含量测定。5．3重现性实验表1芦丁标准品重现性实验结果从表中可看出，用UV法测定芦丁含量，标准偏差和相对标准偏差均较小，实验结果重现性好，所得数据准确。5．4加样回收率试验霉喜篓罐。瓮警兹攀21．4331．2002．61598．531．433O．9002．31397．899．51．72结果表明，采用UV法测定收集液中的类黄酮含量的加样回收率较高，为99．5％；相对标准偏差为1．72％，较小；因此该方法准确度较高。6结论以芦丁为标准品，检测波长为360nm，采用紫外分光光度法测得荷叶中总黄酮含量约2．79％，实验数据重现性好，加样回收率高，相对偏差小。故该方法可作为荷叶类保健食品的质量评价方法之一。参考文献：[1]杜力军，孙虹，李敏，等．荷叶大豆及其合剂调脂活性部位的研究[J]．中草药，2000，7：526—528．[2]纪丽莲．荷叶中抑菌成分的提取及其抑菌活性的研究[J]．食品科学，1998，8：64—66．[3]许腊英，刘云苟．荷叶降血脂的开发研究[J]．湖北中医杂志，1996．4：42—43． 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