GB5750-2001生活饮用水检验规范（2001年修订版）.pdf

'Daoister书库生活饮用水检验规范GB5750-85修订版卫生部2001.635ሚ௚ᕎၵ35.1ອලૢၵࣚ35.1.1范围本规范规定了生活饮用水及其水源水中细菌总数的测定方法本规范适用于测定生活饮用水及其水源水中的细菌总数35.1.2原理细菌总数是指水样在一定条件下培养后(培养基成分培养温度和时间pH需氧性质等)所得lmL水样所含菌落的总数按本规范规定所得结果只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数35.1.3培养基与试剂35.1.3.1营养琼脂35.1.3.1.1成分:A蛋白胨10gB牛肉膏3gC氯化钠5gD琼脂1020gE蒸馏水1000mL35.1.3.1.2制法将上述成分混合后加热溶解调整pH为7.47.6分装于玻璃容器中(如用国产含杂质较多的琼脂时应先过滤)经121灭菌20min储存于冷暗处备用35.1.4仪器35.1.4.1高压蒸汽灭菌器35.1.4.2干热灭菌箱35.1.4.3培养箱36135.1.4.4电炉35.1.4.5天平35.1.4.6冰箱35.1.4.7放大镜或菌落计数器35.1.4.8pH计或精密pH试纸35.1.4.9灭菌试管平皿(直径9cm)刻度吸管采样瓶等35.1.5检验步骤35.1.5.1生活饮用水35.1.5.1.1以无菌操作方法用灭菌吸管吸取lmL充分混匀的水样注入灭菌平皿中倾注约15mL已融化并冷却到45左右的营养琼脂培养基并立即旋摇平皿使水样与培养基充分混匀每次检验时应做一平行接种同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照35.1.5.1.2待冷却凝固后翻转平皿使底面向上置于361培养箱内培养24h进行菌落计数即为水样lmL中的细菌总数35.1.5.2水源水35.1.5.2.1以无菌操作方法吸取lmL充分混匀的水样注入盛有9mL灭菌生理盐水的 Daoister书库生活饮用水检验规范GB5750-85修订版卫生部2001.6试管中混匀成1:10稀释液35.1.5.2.2吸取1:10的稀释液lmL注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中混匀成1:100稀释液按同法依次稀释成1:10001:10000稀释液等备用如此递增稀释一次必须更换一支1mL灭菌吸管35.1.5.2.3用灭菌吸管取23个适宜稀释度的水样lmL分别注人灭菌平皿内以下操作同生活饮用水的检验步骤35.1.6菌落计数及报告方法作平皿菌落计数时可用眼睛直接观察必要时用放大镜检查以防遗漏在记下各平皿的菌落数后应求出同稀释度的平均菌落数供下一步计算时应用在求同稀释度的平均数时若其中一个平皿有较大片状菌落生长时则不宜采用而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数若片状菌落不到平皿的一半而其余一半中菌落数分布又很均匀则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数然后再求该稀释度的平均菌落数35.1.7不同稀释度的选择及报告方法35.1.7.1首先选择平均菌落数在30300之间者进行计算若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时则将该菌落数乘以稀释倍数报告之(见实例1)35.1.7.2若有两个稀释度其生长的菌落数均在30300之间则视二者之比值来决定若其比值小于2应报告两者的平均数(如实例2)若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数(如实例3)若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数(见实例4)35.1.7.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见实例5)35.1.7.4若所有稀释度的平均菌落数均小于30则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见实例6)35.1.7.5若所有稀释度的平均茵落数均不在30300之间则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见实例7)35.1.7.6若所有稀释度的均无菌落生长则以1乘以稀释倍数报告之35.1.7.7菌落计数的报告:菌落数在100以内时按实有数报告大于100时采用二位有效数字在二位有效数字后面的数值以四舍五入方法计算为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示(见表35-1报告方式栏)表35-1稀释度选择及菌落总数报告方式不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌落总数报告方式实例123101010菌落数之比(CFU/mL)(CFU/mL)411365164201640016000或1.610422760295461.63775038000或3.810432890271602.22710027000或2.71034150308215001500或1.51055多不可计1650513513000510000或5.1102627115270270或2.71047多不可计305123050031000或3.110800016 Daoister书库生活饮用水检验规范GB5750-85修订版卫生部2001.6表36-2用5管10mL5管1mL5管0.1mL时阳性及阴性结果不同组合的MPN其中阳性管数其中阳性管数5个管每5个管每5个管每MPN5个管每5个管每5个管每MPN管10mL管1mL管0.1mL管10mL管1mL管0.1mL000<2421260012430270102431330204440341002500231014501311104502431116510331206511462005512632017520492107521702119522942209530792301253110930085321403011153318031011540130311145411723201454222032117543200330175443504001355024040117551350410175525404112155392041226554160042022555>1600 Daoister书库生活饮用水检验规范GB5750-85修订版卫生部2001.636.2ളැࣚ36.2.1范围本规范规定了生活饮用水及其水源水中大肠菌群的滤膜测定方法本规范适用于生活饮用水和低浊度的水源水中总大肠菌群数的测定36.2.2原理用孔径为0.45m的微孔滤膜过滤水样细菌被截留在滤膜上将滤膜贴在选择性培养基上经培养后计数生长在滤膜上的典型大肠菌群菌落数36.2.3培养基与试剂36.2.3.1品红亚硫酸钠培养基36.2.3.1.1成份A蛋白胨10gB酵母浸膏5gC牛肉膏5gD乳糖10gE琼脂1520gF磷酸氢二钾3.5gG无水亚硫酸钠5gH碱性品红乙醇溶液(50g/L)20mLI蒸馏水1000mL36.2.3.1.2储备培养基的制备先将琼脂加到500mL蒸馏水中煮沸溶解于另500mL蒸馏水中加入磷酸氢二钾蛋白胨酵母浸膏和牛肉膏加热溶解倒人已溶解的琼脂补足蒸馏水至1000mL混匀后调pH为7.27.4再加入乳糖分装115高压灭菌20min储存于冷暗处备用36.2.3.1.3平皿培养基的配制将上法制备的储备培养基加热融化用灭菌吸管按比例吸取一定量的碱性晶红乙醇溶液(36.2.3.1.1.H)置于灭菌空试管中再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一灭菌试管中加灭菌水少许使其溶解后置沸水浴中煮沸10min以灭菌用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色退成淡粉色为止将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加到已融化的储备培养基内并充分混匀(防止产生气泡)立即将此种培养基15mL倾人已灭菌的空平皿内待冷却凝固后置冰箱内备用此种已制成的培养基于冰箱内保存不宜超过二周如培养基已由淡粉色变成深红色则不能再用36.2.3.2乳糖蛋白胨培养液同36.1.336.2.4仪器36.2.4.1滤器36.2.4.2滤膜孔径0.450.65m直径根据滤器规格目前常用的有3.5cm和4.7cm两种36.2.4.3抽滤设备36.2.4.4无齿镊子36.2.4.5其他仪器同36.1.436.2.5检验步骤36.2.5.1准备工作 Daoister书库生活饮用水检验规范GB5750-85修订版卫生部2001.636.2.5.1.1滤膜灭菌将滤膜放人烧杯中加入蒸馏水置于沸水浴中煮沸灭菌三次每次15min前两次煮沸后需更换水洗涤23次以除去残留溶剂36.2.5.1.2滤器灭菌用点燃的酒精棉球火焰灭菌也可用121高压灭菌20min36.2.5.2过滤水样用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分将粗糙面向上贴放在已灭菌的滤床上固定好滤器将100mL水样(如水样含菌数较多可减少过滤水样量或将水样稀释)注入滤器中打开滤器阀门在-0.5大气压下抽滤36.2.5.3培养水样滤完后再抽气约5s关上滤器阀门取下滤器用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分移放在品红亚硫酸钠培养基(36.2.3.1)上滤膜截留细菌面向上滤膜应与培养基完全贴紧两者间不得留有气泡然后将平皿倒置放入37恒温箱内培养2224h36.2.6观察结果36.2.6.1挑出符合下列特征菌落进行革兰氏染色镜检紫红色具有金属光泽的菌落深红色不带或略带金属光泽的菌落淡红色中心色较深的菌落36.2.6.1.1凡革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌再接种乳糖蛋白胨培养液于37培养24h有产酸产气者则判定为总大肠菌群阳性36.2.6.1.2计算滤膜上生长的总大肠菌群数以每100mL水样中的总大肠菌群数报告之(CFU/100mL)数出的总大肠菌群菌落数×100总大肠菌群菌落数()CFU100mL=…………()36−1过滤的水样体积()mL Daoister书库生活饮用水检验规范GB5750-85修订版卫生部2001.637ऒ߿ݐ௚཮37.1ࢰ৒ࣔୋࣚ37.1.1范围本规范规定了生活饮用水及其水源水中粪大肠菌群的多管发酵测定方法本规范适用于生活饮用水及其水源水中粪大肠菌群的测定37.1.2原理用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开在44.5仍能生长的大肠菌群称为粪大肠菌群37.1.3培养基与试剂37.1.3.1EC培养基37.1.3.1.1成分A胰蛋白胨20gB乳糖5gC3号胆盐或混合胆盐1.5gD磷酸氢二钾4gE磷酸二氢钾1.5gF氯化钠5gG蒸馏水1000mL37.1.3.1.2制法将上述成分溶解于蒸馏水中分装到带有倒管的试管中115高压灭菌20min最终pH为6.90.237.1.3.2伊红美蓝琼脂(同36.1.3.3)37.1.4仪器37.1.4.1恒温水浴:44.50.2或隔水式恒温培养箱37.1.4.2其他同总大肠菌多管发酵法(36.1.4.136.1.4.9)37.1.5检验步骤37.1.5.1自总大肠菌乳糖发酵试验中的阳性管(产酸产气)中取1滴转种于EC培养基中置44.5水浴箱内(水浴箱的水面应高于试管中培养基液面)培养242h如所有管均不产气则可报告为阴性如有产气者则转种于伊红美兰琼脂平板上置44.5培养1824h凡平板上有典型菌落者则证实为粪大肠菌群阳性37.1.5.2如检测未经氯化消毒的水且只想检测粪大肠菌群时或调查水源水的粪大肠菌群污染时可用直接多管粪大肠菌群方法即在第一步乳糖发酵试验时按36.1.5.1接种放在44.50.5水浴中培养以下步骤同37.1.5.137.1.5.3结果报告根据证实为粪大肠菌群的阳性管数查MPN检索表报告每100mL水样中粪大肠菌群的MPN值37.2ളැࣚ37.2.1范围 Daoister书库生活饮用水检验规范GB5750-85修订版卫生部2001.6本规范规定了生活饮用水及其水源水中粪大肠菌群的滤膜测定方法本规范适用于生活饮用水及其水源水中粪大肠菌群数的测定37.2.2原理将水样通过孔径为0.45m的滤膜过滤细菌被阻留在膜上将滤膜贴在MFC培养基上44.5培养后计数典型菌落37.2.3培养基与试剂37.2.3.1MFC培养基37.2.3.1.1成分A胰胨10gB多胨5gC酵母浸膏3gD氯化钠5gE乳糖12.5gF胆盐3号(BilesaltNo.3)或混合胆盐1.5gG琼脂15gH苯胺蓝0.2gI蒸馏水1000mL37.2.3.1.2制法在1000mL蒸馏水中先加入玫红酸(10g/L)的氢氧化钠溶液[c(NaOH)=0.2mol/L]10mL混匀后取500mL加入琼脂煮沸溶解于另外500mL蒸馏水中加入除苯胺蓝以外的其他试剂加热溶解倒人已溶解的琼脂混匀调pH为7.4加入苯胺蓝煮沸迅速离开热源待冷却至60左右制成平板不可高压灭菌制好的培养基应存放于210不超过96h本培养基也可不加琼脂制成液体培养基使用时加2mL于灭菌吸收垫上再将滤膜置于培养垫上培养37.2.3.2EC培养基(见37.1.3.1)37.2.4仪器37.2.4.1隔水式恒温培养箱或恒温水浴37.2.4.2塑料培养皿:60mm15mm或50mm12mm37.2.4.3其他仪器同总大肠菌群滤膜法(36.2.4)37.2.5分析步骤37.2.5.1准备工作(同36.2.5.1或36.2.5.1.2)37.2.5.2过滤水样(同36.2.5.2)37.2.5.3培养:水样滤完后再抽气约5s关上滤器阀门取下滤器用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分移放在MFC培养基上滤膜截留细菌面向上滤膜应与培养基完全贴紧两者间不得留有气泡然后将平皿倒置放入44.5隔水式培养箱内培养2224h如使用恒温水浴则需用塑料平皿将皿盖紧或用防水胶带贴封每个平皿将培养皿成叠封入塑料袋内浸到44.5恒温水浴里培养242h粪大肠菌群在此培养基上菌落为蓝色非粪性大肠菌群菌落为灰色至奶油色37.2.5.4对可疑菌落转种EC培养基44.5培养242h如产气则证实为粪大肠菌群37.2.5.5计数被证实的粪大肠菌落数计算每100mL水中的粪大肠菌密度所计得的粪大肠菌菌落数×100粪大肠菌菌落数()CFU100mL=…………()37−1过滤的水样体积()mL'