紫外可见分光光度法测定水产品中孔雀石绿含量

'万方数据2009年第5期总第94期《福建师范大学福清分校学报》JOURNALOFFUQINGBRANCHOFFUJIANNORMALUNIVERSITYSumNo．94紫外可见分光光度法测定水产品中孔雀石绿含量林谦，林炜，叶瑞洪(福建师范大学福清分校生物与化学工程系，福建福清350300)摘要：用乙腈溶解孔雀石绿固体，采用紫外分光光度法检测水产品中孔雀石绿的含量。实验证明孔雀石绿的最佳吸收波长为619nm，该方法的线性范围为0．08—70VLg／mL，线性系数R为0．9993，最低检出限为O．0200V,g／mL,,在0．1、1．0、10．OwdmL3个浓度水平加标回收率为93．6％一99．O％。相对标准偏差为0．09％。0．43％(n=3)。连续测定3个浓度水平的吸光度11次，测得RSD为0．17％．,-0．35％(n=11)。本实验还考察了缓冲液的种类、pH值、用量、以及各种常规干扰离子等条件对测定孔雀石绿的影响，优化了检测过程。关键词：孔雀石绿；测定；紫外可见分光光度法中图分类号：x56文献标识码：A文章编号：1008—3421(2009)05-0060-05孔雀石绿I-c为HZ。N2]是一种带有金属光泽的绿色结晶体属三苯甲烷类染料，又名碱性绿、严基块绿、孔雀绿，既是工业性染料，又是一种杀真菌剂。自上世纪30年代以来，许多国家曾经采用孔雀石绿杀灭鱼类体内外寄生虫和鱼卵中的霉菌，对鱼类水霉病、原虫病等的控制非常有效，而且操作方便，价格低廉。但研究发现：孔雀石绿是一种高毒素物质，其化学官能团三苯甲烷是一种致癌物质，并有高残留的作用，能在鱼体内长时间残留，通过食物链对哺乳动物和人类产生致畸、致癌、致突变等作用，同时含孔雀石绿的养殖废水排放会污染水环境。为了有效地监控禁用药物孔雀石绿的使用，某些国家还规定了严格的检出限【n。为预防孔雀石绿造成的严重影响，采用何种方法能够快速、简便、准确地检测水产品中的孔雀石绿含量已经迫在眉睫，更是当前学术界研究讨论的热点问题。目前，高效液相色谱法[2-5J、高效液相色谱一串联质谱法[6-91、共振瑞利散射法110l等孔雀石绿的检测方法都在不断地改进完善，但仍有一些难以解决的问题，如成本过高、检出限高、操作复杂等。在高效液相色谱法中，仍选用紫外检测器来测定孔雀石绿的吸光度【ll】。因此，本实验采用通过紫外分光光度计测出乙腈溶解孔雀石绿固体的溶液的吸光度，求其含量的方法，方法简便快速，准确度较高，成本较低，有望广泛应用。1材料与样品处理1．1材料1．1．1仪器PHS-25型数显酸度计：上海虹益仪器仪表有限公司；BS224S型电子天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司；721E型紫外分光光度计：上海光谱仪器有限公司。1．1．2药品与试剂孔雀石绿标准样品(中国上海标本模型厂)；冰醋酸(天津市北联精细化学品开发有限公司)；乙酸铵(蚌埠电化试剂厂)；二甘醇(上海成海化学工业有限公司)；盐酸羟胺(福州大学光催化所)；收稿日期：2009--04-25作者简介：林谦(1970-)，女，福建莆田人，实验师。 万方数据第5期林谦，林炜，叶瑞洪：紫外可见分光光度法测定水产品中孔雀石绿含量61对甲苯磺酸(成都市科龙化工试剂厂)；乙腈(上海成海化学工业有限公司)，以上试剂均为分析纯。鱼样品(福清检验检疫局提供)。1．1．3标准溶液的配制孔雀石绿标准溶液：准确称取孔雀石绿0．0109，用乙腈溶解，定容于100ml容量瓶中，配制成10-49／ml的标准溶液，再用蒸馏水稀释成相应浓度的孔雀石绿溶液。1．1．4混合提取液的配制准确称取盐酸羟胺6．79，对甲苯磺酸0．429，乙酸铵0．249，于250mL蒸馏水中溶解，并用冰醋酸调节pH至3．0，备用嘲。1．2样品处理1．2．1提取与净化称取处理好的样品约409置于500mL烧杯中，加混合提取溶液60mL，匀浆5min，将样品转移到250mL容量瓶中，用30mL乙腈分3次洗涤烧杯，洗涤液合并到容量瓶中，向容量瓶中加入209中性氧化铝吸附样品中油脂，将容量瓶振荡约lO分钟后，转移样品至4支50mL离心管中，以4000vtnin离心10分钟，将离心管中上清液移入1000mL分液漏斗中，向离心管内加入30ml乙腈，振摇离心管，使样品与乙腈充分混合，如上所述再次离心，合并上清液至分液漏斗中，向分液漏斗中加入100mL蒸馏水，50mL二氯甲烷，另加5mL二甘醇用于消除乳化，剧烈振摇分液漏斗，静置分层，用容量瓶收集下层液体后，再往分液漏斗中加入50mL二氯甲烷，振摇，静置，待其分层后收集下层液体于同一容量瓶中，将收集液在50。C下减压旋转蒸发至近干，取下蒸发瓶，用乙腈洗涤蒸发瓶，定容到2mL，即得样品溶液。1．2．2样品测定室温下在不同的底液下将标准溶液于lcm的玻璃比色皿中进样，以相应空白溶液作参比，在619nm的波长范围内测定其吸光度。提取的样品溶液，再加入2．5raLpH值为3．0的柠檬酸钠缓冲溶液，其后在619am的波长范围内测定其吸光度。2结果与讨论2．1最佳检测波长的选择利用紫外分光光度计在波长500～700nm范围内分别扫描浓度为10—69／mE和10—59／mL的孔雀石绿标准溶液，最大吸收峰为619nm，故确定619nm为最佳测定波长。2．2孔雀石绿含量的最佳检测条件选择2．2．1最佳pH的选择以Imol／L冰乙酸10mL为底液，用0．1moFL氢氧化钠溶液和酸度计调节，分别配制pH值为2．0、2．5、3．0、3．5、4．0、5．0、6．0、7．0、8．0、9．0的缓冲液，并分别吸取2mL各缓冲液加入8瓶已配制好的10—69／mE的孔雀石绿溶液中，并测定其吸光度。测定结果见图1。从图1可见，缓冲溶液的pH值为3．O时，吸光度最大，因此确定检测孔雀石绿的最佳pH值为3．0。2．2．2最佳缓冲溶液的选择配制磷酸钠、柠檬酸钠、醋酸钠三图1溶液的pH对吸光度的影响 万方数据福建师范大学福清分校学报2009年9月种缓冲溶液，其PH都为3．0，分别吸取2mL各缓冲溶液加入3瓶已配制好的10-69／mL的孔雀石绿溶液中，并测定其吸光度。其结果见表1。表1不同缓冲溶液对吸光度的影响从表l可见，加入柠檬酸钠缓冲液时，吸光度最大，确定柠檬酸钠为最佳缓冲液。2．2．3缓冲溶液最佳用量的选择配制100raLpH值为3．O的柠檬酸钠缓冲溶液和8瓶50mLl0—69／mL的孔雀石绿标准溶液，分别加入0．5、l、1．5、2．0、2．5、3．0、3．5、4．0mL的上述缓冲液，并测定其吸光度。结果见图2。由图2可知，加入2．5mL柠檬酸钠缓冲液后，其吸光度最大，故缓冲液的最佳加入量为25mLo2．3标准曲线和实验的重复性020202C00．"980156《O"“0102O．1∞图2缓冲溶液用量对吸光度的影响配制孔雀石绿标准工作系列0．0800—70．0pg／mL，在上述最佳检测条件下，测定其吸光度，以孔雀石绿标准溶液的浓度为横坐标，以与其相对应的吸光度为横坐标，计算线形回归方程，得到方程为Y--0．0015x+0．0952，相关线性系数R--0．9993，计算出方法检出限为0．0200弘g／mL,摩尔吸光系数8=1．825xloI。配制低、中、高3种浓度的孔雀石绿标准溶液，均连续测定其吸光度11次，求得其相对标准偏差分别为0．23％、0．17％、0．35％，结果见表2。表2测定不同溶液浓度的相对标准偏差测定精密度(测定低浓度8*1049／mL孔雀石绿溶液，以水为空白)编号l23456789101l吸光度0．028O．0300．0340．030o．028O．030o．034O．034o．034O．0300．032RSD0．23％测定精密度(测定中浓度2*10。SgtmL孔雀石绿溶液，以水为空白)编号l234567891011吸光度0．3780．3800．382O-380．3780．3760．378o．3760．3780．380RSD0．17％测定精密度(测定高浓度7*10-Sg／mL孔雀石绿溶液，以6*10-Sg／mL孔雀石绿溶液为空白)编号123456789101l吸光度1．1021．0981．1001．1041．1021．1001．0961．0921．098RSD0．35％ 万方数据第5期林谦，林炜，叶瑞洪：紫外可见分光光度法测定水产品中孔雀石绿含量632．4干扰实验实验研究了水产品中常见离子对孔雀石绿测定的影响，样品中1000倍的NOr、800倍的Ca2+、700倍的K+、600倍的Na+以及500倍的Mg“共存离子对测定不产生干扰。此外，任何倍数的Cl对孔雀石绿测定均无影响。2．5样品测定及孔雀石绿加标回收实验对福清检验检疫局提供的鱼样品进行分析，测出该鱼样品中的孔雀石绿含量为5．5}Lg／kg，超出国家标准嘲，结果与检验检疫局测定相符。回收率实验：分别测定了高、中、低三个浓度的回收率，测定其结果如表3所示：表3高、中、低三个浓度的回收率的测定原始浓度加标浓度原始浓度加标浓度原始浓度加标浓度高浓度中浓度低浓度1辜1049／mL1+1049／mL1车lO-69／mLl‘lO‘g／mL1"lO-Tg／mLl*lO-79／mL吸光度①1．6483．236吸光度①0．198O．392吸光度①o．0420．082吸光度②1．6523．246吸光度②0．1980-394吸光度②0．0400．078吸光度③1．6463．238吸光度③0．1960．392吸光度③0．0420．080平均1．6493．240平均O．1970．393平均O．04l0．080RSD0．25％O．43％RSDO．09％0．09％RSD0．09％O．16％回收率96．5％回收率99．O％回收率93．5％3结论用乙腈溶解孔雀石绿固体，采用紫外分光光度法检测水产品中孔雀石绿的含量。实验测定的最佳吸收波长为619rim，方法的线性范围为0．08—701上g／mL，线性系数R为0．9993，最低检出限为O．02p,g／mL。在0．100、1．00、10．O斗g／mL3个浓度水平加标回收率为93．5％-99．O％，相对标准偏差为0．09％一o．43％(n=3)；连续测定3个浓度水平的吸光度11次，测得RSD为O．17％一0．35％(n=11)。可用于常规分析水产品中孔雀石绿的含量。参考文献：【l】桂英爱，王洪军，刘春林，刘中，丁勇．孔雀石绿及其代谢产物在水产动物体内的残留、危害及检测研究进展田．大连水产学院学报，2007，22(4)：293—298．【2】李连庆，张素青，李春青．高效液相色谱(High-rmrformanceliquidchromaography)测定水产品中孔雀石绿及其代谢物的残留量的检测方法叨．现代渔业信息，2007，22(4)：24—25、30．【3】任秀莲，魏琦峰，曲径，徐成刚．反相高效液相色谱法测定水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物叨．化学分析计量，2006．15(4)：32—34．【4】叶四化，陆超华，谢海平，李娜．高效液相色谱双波长法同时测定水产品中孔雀石绿和隐性孔雀石绿叨．分析科学学报，2007。23(1)：69-72．阎中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会发布．水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定一高效液相色谱荧光检测法[S】．中国标准出版社，2006．【6】丁涛，徐锦忠，吴斌，陈惠兰，沈崇钰，刘飞．高效液相色谱一串联质谱ffinniganTSQQuantum)测定鳗鱼中孔雀石绿、隐性孔雀石绿残留量们．现代科学仪器，2006，27-29．【7】刘海新，张农，钱卓真．水产品中孔雀石绿检测方法研究进展叨．福建水产，2007(1)：41--45．【8】吴学立，吴永宁，赵云峰，袁宗辉．液相色谱一线性离子阱质谱法检测草鱼中孔雀石绿结晶紫及其代谢产物阴．中国食品卫生杂志，2007，19(3)：209砣14． 万方数据福建师范大学福清分校学报2009年9月【9】刘桂华，姜杰，谢建滨，张红宇，刘红河，仲岳桐，张慧敏．同位素内标稀释高效液相色谱一质谱法测定鱼体中的孔雀石绿及其代谢物们．现代预防医学，2006，33(1)：124—126．【10】范翔，吕昌银，刘运美，何爱桃，贺元文，宁玲．共振瑞利散射法测定孔雀石绿田．分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报，2007，35(8)：1207—1210．【11】黄宝美，王秀峰，陈红．紫外可见分光光度法测定孔雀石绿的残留量叨．绵阳师范学院学报，2007，26(8)：52—54．【12】张彤晴，杨洪生，林海，王静，周刚，李强．高效液相色谱法测定养殖水体孔雀石绿和无色孔雀石绿fJ】．水产学报．2007，31(5)：700-703．【13]GB／T19857-2005(水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》国家标准[s】．DetectionoftheContentsofMalachiteGreeninAquaticProductswithUltravioletVisibleSpectrophotometry、LINQian，LINWei，YERuihong(FuqingBmnchofFujianNormalUniversity,Cuqing350300)Abstract：ThisResearchistouseacetonitriletodissolvetheMalachiteGreensolidandthendetecttheContentsofMalachiteGreeninAquaticProductswithUltravioletVisibleSpeetrophotometry．TheexperimentprovesthattheoptimalabsorbancywavelengthofMalachiteGreenis619rim，thelinearrangeofthemethodis0．08-70弘g／mL,thelinearcoefficientis0．9993andthelowestdetectionlimitisO．0200pLg／mLTheaveragerecoveriesattheconcentrationlevelsofO．1，1．0，10．O弘g／mLare93．6％一99．0％，therelativesmndarddeviationis0．09％-0．43％(n=3)．Theabsorbancyofthethreelevelsissuccessivelydeterminedfor1timesandtheresultisRSD0．17％--0．35％(n=11)．Inaddition，theexperimenthasalsoinvestigatedtheinfluenceofthetypes，pHvaluesanddosageofthebuffersolutions，andvariousconventionalinterferenceionsonthedetectionoftheMalachiteGreen．whichhasoptimizedthedeterminationprocess．Keywords：MalachiteGreen，Determination，Ultravioletvisiblespectrophotometry(责任编辑：张沛) 紫外可见分光光度法测定水产品中孔雀石绿含量作者：林谦，林炜，叶瑞洪，LINQian，LINWei，YERuihong作者单位：福建师范大学福清分校生物与化学工程系,福建福清,350300刊名：福建师大福清分校学报英文刊名：JOURNALOFFUQINGBRANCHOFFUJIANNORMALUNIVERSITY年，卷(期)：2009(5)参考文献(13条)1.桂英爱.王洪军.刘春林.刘中丁勇孔雀石绿及其代谢产物在水产动物体内的残留、危害及检测研究进展[期刊论文]-大连水产学院学报2007(04)2.李连庆.张素青.李春青高效液相色谱(High-performanceliquidchromaography)测定水产品中孔雀石绿及其代谢物的残留量的检测方法[期刊论文]-现代渔业信息2007(04)3.任秀莲.魏琦峰.曲径.徐成刚反相高效液相色谱法测定水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物[期刊论文]-化学分析计量2006(04)4.叶四化.陆超华.谢海平.李娜高效液相色谱双波长法同时测定水产品中孔雀石绿和隐性孔雀石绿[期刊论文]-分析科学学报2007(01)5.中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.中国国家标准化管理委员会水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定-高效液相色谱荧光检测法20066.丁涛.徐锦忠.吴斌.陈惠兰沈崇钰刘飞高效液相色谱-串联质谱(FinnganTSQQuantum)测定鳗鱼中孔雀石绿、隐性孔雀石绿残留量20067.刘海新.张农.钱卓真水产品中孔雀石绿检测方法研究进展[期刊论文]-福建水产2007(01)8.吴学立.吴永宁.赵云峰.袁宗辉液相色谱-线性离子阱质谱法检测草鱼中孔雀石绿结晶紫及其代谢产物[期刊论文]-中国食品卫生杂志2007(03)9.刘桂华.姜杰.谢建滨.张红宇,刘红河,仲岳桐,张慧敏同位素内标稀释高效液相色谱-质谱法测定鱼体中的孔雀石绿及其代谢物[期刊论文]-现代预防医学2006(01)10.范翔.吕昌银.刘运美.何爱桃贺元文宁玲共振瑞利散射法测定孔雀石绿[期刊论文]-分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报2007(08)11.黄宝美.王秀峰.陈红紫外可见分光光度法测定孔雀石绿的残留量[期刊论文]-绵阳师范学院学报2007(08)12.张彤晴.杨洪生.林海.王静,周刚,李强高效液相色谱法测定养殖水体孔雀石绿和无色孔雀石绿[期刊论文]-水产学报2007(05)13.GB/T19857-2005.《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》国家标准本文读者也读过(10条)1.黄宝美.王秀峰.陈红.HUANGBao-mei.WANGXiu-feng.CHENGHong紫外可见分光光度法测定孔雀石绿的残留量[期刊论文]-绵阳师范学院学报2007,26(8)2.朱伟杰.侯瑜琼.Wei-jieZHU.Yu-qiongHOU孔雀石绿对小鼠睾丸超微结构的影响[期刊论文]-生殖与避孕2008,28(2)3.苏建明.雷红宇.宁玲忠.邓友田.莫福军.潘晓雪孔雀石绿对小鼠血液生化指标的影响[期刊论文]-湖南畜牧兽医2009(2)4.李卫丽水产品中孔雀石绿及其代谢物的提取方法之比较[期刊论文]-黑龙江畜牧兽医2008(9)5.郑军献.胡轶娟.梁卫青.浦锦宝.魏克民紫外可见分光光度法测定三叶青中总黄酮的含量[期刊论文]-中国中医 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