分光光度法测定茯苓中多糖总糖含量

'分光光度法测定茯苓中多糖总糖含量更新日期：2011-09-20丰朝霞　张鸿摘　要：为测定茯苓提取液中的多糖、总糖含量，以苯酚-硫酸法，制得有色的糖醛衍生物，用分光光度法进行含量测定，在波长490nm处测定吸收度，得回归方程A=-0.128+0.1098X，γ=0.9990，线性关系好；回收实验，平均回收率为99.5%。n=5。方法简便易行，稳定，快捷，重现性好。关键词：茯苓；多糖；总糖；含量测定分类号：R284.2　文献标识码：A文章编号：1008-0805(2000)02-0109-01▲　　茯苓中医用于治疗水肿尿少、脾虚食少、心神不安，失眠等症状，具有健脾宁心，利水渗湿等功效。主要含有β-茯苓聚糖(β-Puchyman)即茯苓多糖、茯苓糖〔Pachymose(C10H24O14)〕、三萜类化合物茯苓酸(Tumulasieacid)、松苓酸(Pmicoicacid)，此外尚含有组氨酸、胆碱、葡萄糖等其他成分［1，2，3］，其主要药理活性成分，具有抗肿瘤，提高免疫功能的作用。　　《中国药典》1995年版Ⅰ部等有关资料，均未对茯苓多糖进行定量检验。为了确定茯苓总糖、多糖的含量，本实验利用苯酚-硫酸法制得的醛糖衍生物，采用分光光度法对茯苓多糖进行含量测定。1　仪器和试药1.1　仪器：TU-1221型分光光度计(北京应用仪器厂)，80-1离心机(上海手术机械厂)。1.2　试药：茯苓(由湖北省药材公司购得)，苯酚、乙醇、硫酸均为AR级。1.3　苯酚试剂的配制：称取苯酚4g，加水100ml使溶解，至棕色瓶中，得浓度为4%苯酚试液。2　实验方法2.1　粗糖的提取：精密称取本品细粉5g，置圆底烧瓶内，加水100ml，回流提取2h，乘热过滤，重复提取2次，用少量水洗渣，滤过与上液合并，浓缩，转移至100ml容量瓶内，加水稀释至刻度，即得。2.2　供试液的制备2.2.1　多糖：照2.1项下操作，取上稀释液2ml置离心器中，加80%乙醇10ml离心，2500r/min，30min后取出倾去上清液，将沉淀移至50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取上液1ml加1ml水于具塞试管中，加4%苯酚1.0ml，混匀，迅速加入浓H2SO47.0ml，摇匀，于40℃水浴中保温30min后移至冰水浴中，放置30min后取出。2.2.2　总糖：按2.1项下操作，取稀释液3.0ml至100ml容量瓶中，加水至刻度。精密量取该溶液2ml置具塞试管中，自加4%苯酚1.0ml起依次操作。2.3　测定条件的选择2.3.1　测定波长的选择：按2.2.1方法操作。对照液为：取2ml水于具塞试管中，自加4%苯酚起，依法操作，从440～510mm处进行吸收度测定，结果见表1。表1　最大吸收度的选择 波长λ/nm吸收度A样品波长λ/nm吸收度A样品5100.1704700.3275000.3204600.2424900.4384500.1864800.4174400.115　　在490nm处测得有最大吸收，故选择490nm为测定波长。2.3.2　标准曲线的测定：精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖60mg，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度(每1ml中含无水葡萄糖0.6mg)。精密吸取该溶液0.0，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml分别置50ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密吸取上述各浓度的标准溶液2ml，于具塞试管中。照2.2.1项下自加苯酚起依次操作，以第1份为空白，在490nm处测定吸收度，见表2。表2　标准曲线的测定结果浓度C/μg.ml-1吸收度A对照品浓度C/μg.ml-1吸收度A对照品20.480.091081.920.423240.960.2218102.400.529061.440.3313122.880.6529　　回归方程A=-0.0128+0.1098X，γ=0.9990　　实验表明无水葡萄糖在20.48～122.88μg之间符合Beer定律，呈良好的线性关系。2.3.3　稳定性实验：取2.3.1方法操作，每隔40min测定吸收度，结果表明，供试液在3h内显色稳定，见表3。表3　稳定性实验　　　n=5时间T/min对照品吸收度A对供试品吸收度A供RSD(%)00.33460.2218　 400.33540.2217　800.33460.22310.491200.32760.2203　1600.33100.2207　3　回收率实验　　精密称取已知供试样品5份，每份3g，分别加入无水葡萄糖对照品，回流提取，照上述测定法测定，结果见表4。表4　回收实验结果取样量m/g相当葡萄糖量m/mg加入对照品量m/mg测得量m/mg回收率(%)平均回收率(%)3.331827.79991.232(0.6×2)29.0693103.0　3.068525.6036　26.9018105.4　2.900124.1984　25.374095.498.32.389720.7012　21.914398.5　2.384420.6553　21.826295.0　4　样品测定　　多糖照2.2，总糖照2.2.2同法操作，在490nm处测定吸收度，结果见表5。表5　样品测定结果　　n=5样号总糖/g.g-1多糖(%)12.060.3921.400.6330.830.3041.870.4951.150.33　　根据5批样品测定结果，规定本品含总糖按无水葡萄糖(C6H12O6)计，不得少于0.8%，含多糖按无水葡萄糖(C6H12O6)计，不得少于0.25%。 5　讨论5.1　多糖、总糖的测定方法较多［4，5］，本实验采用水提醇沉法，提取茯苓的总糖、多糖在浓H2SO4作用下，水解成单糖并迅速脱水成糖醛衍生物，此糖醛衍生物和苯酚缩合成有色化合物，可用分光光度法于490nm处测定。此法简便，显色稳定，灵敏。5.2　操作中必须注意时间、温度对实验结果的影响，要在规定的条件下进行，以保证测定结果的真实，无误。　　致谢：本文得到罗田县药检所化学室主任袁基焱同志指导!作者简介：丰朝霞(1975-)，女(汉族)，湖北罗田人，现任湖北省罗田县药检所中药药剂师.作者单位：丰朝霞（湖北省罗田县药品检验所　436600）　　　　　张鸿（湖北省药品检验所，湖北武汉　430064）参考文献：'