固绿fcf分光光度法测替米沙坦的含量 -毕业论文

'【标题】固绿FCF分光光度法测替米沙坦的含量【作者】何以恒【关键词】固绿FCF  分光光度法  替米沙坦【指导老师】【专业】化学【正文】前 言替米沙坦[1]为白色片状固体，它是一种新型血管紧张素Ⅱ受体的高度选择性拮抗剂，可选择性地、难以逆转地阻滞AT1受体, 而对其他受体尤其是心血管系统的受体无影响, 临床上主要用于轻中度高血压治疗, 具有起效快、副作用少、作用时间长等优点, 只需每日给药1次即可明显降低24h均压[2]。替米沙坦拥有先进的作用机理：首先，它能够平稳降压，有不反弹的效果，替米沙坦在降压的同时可维持正常的血压昼夜节律及改善交感神经功能，更能有效控制血压，减少靶器官损害。替米沙坦治疗如果突然中断，数天后血压恢复到治疗前水平，而不出现反弹性高血压；其次，此药物有长效高效，耐受性好的功能，动态血压监测仪显示服药后降压效果持续超过24小时，包括下次给药前的4小时，在48小时内仍可测到。在目前已上市的沙坦类药物中，替米沙坦和坎地沙坦是仅有的两个每天服用一次的降压药，而替米沙坦比坎地沙坦的半衰期更长，是沙坦类作用时间最长的降血压药物。替米沙坦的抗高血压效果与其他类型的抗高血压代表药物具有可比性，替米沙坦对高血压患者的舒张压降压作用比洛沙坦或氨氯地平更理想；再次，它有靶向选择，副作用小的优点，替米沙坦与ATI受体的亲和力是ATII受体的3000多倍，可选择性、难逆性阻滞ATI受体，对其他受体尤其是心血管系统的受体无影响。替米沙坦可降低高血压患者的收缩压及舒张压而不影响心率和脉搏；替米沙坦不抑制血管紧张素转换酶（激素II），该酶亦可降解缓激肽作用增强导致的干咳等不良反应；最后，它的生物利用度高，适应性好，替米沙坦的绝对生物利用度平均约为50%。替米沙坦主要通过肝脏结合合成无活性的葡萄糖醛酸化合物，由胆汁通过粪便排泄，受肾功能影响较小。轻或中度肾功能不良的病人，服用替米沙坦亦不需调整剂量。替米沙坦药代动力学在老年人和年轻人无不同，故老年人服用替米沙坦亦不需调整剂量。替米沙坦能有效保护心血管、肾脏血管等靶器官，适用于对其他降压药不能耐受或过敏的各类高血压患者。替米沙坦与其它类抗高血压药物相比有以下特点：具有受体作用的专一性； 抗高血压作用显著；具有良好的利尿作用 ；能改善心肌狭窄障碍 ；用药安全，耐受性良好 l日1次，服用方便。对血浆中替米沙坦的检测方法国外多采用同位素14C标记法和质谱法， 国内有文献报道采用HPLC紫外检测法[3]和荧光检测法[4], 而对替米沙坦胶囊含量的HPLC测定国内已有报道[5], 但是这些方法的重线性，稳定性，灵敏度都不太满意，样品处理繁琐[6-8]，我国已经采用的反相高效液相色谱法[9-11]测定替米沙坦片的含量以便于达到对替米沙坦片的含量控制。目前,国内市售的替米沙坦品牌很多, 各自的内在质量如何, 疗效-价格比怎样，一直是医药工作者十分关心的问题，临床试验显示，不良反应主要有：药后头痛, 低血压, 眩晕,失眠, 腹痛、腹泻, 消化不良,血管性水肿等过敏反应 。那么，到底它的含量是多少才能既达到治疗的目的而它的副作用又是最小的呢？这就是我们本次研究的主要目的。本项目利用分光光度法对替米沙坦的含量进分析研究，建立一种快捷、有效、可靠的光度分析法[12]。该成果可扩展光谱分析的研究内容和应用范围，对分析化学、药学、临床医学、生物学等领域都将产生积极的影响，对医药品生产厂家及药检部门均具有广泛应用价值。1、实验方法1.1仪器和药品U-3010型紫外-可见分光光度计（日本日立公司）；T6新悦可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；EL104电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；Seveneasy型实验室酸度计（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）。替米沙坦（缩写TMST，含量 ＞99%，成都宇洋高科技发展有限公司）标准溶液：准确称取0.2573g替米沙坦用氢氧化钠溶解（0.2mol?L-1），定容至250mL的容量瓶中，摇匀得1.0×10-3mol?L-1的标准储备液，用时稀释成1.0×10-4mol?L-1的使用液。固绿FCF（缩写FGF; 中国医药集团上海化学试剂公司 批号：F20021218）溶液：准确称取0.2022g固绿FCF，用水稀释定容至250mL的容量瓶中，摇匀得1.0×10-3mol?L-1的固绿FCF溶液，用二次蒸馏水稀释成1.0×10-4mol?L-1。B-R缓冲溶液：配制0.04mol?L-1 H3PO4、H3BO3和HAC与0.2mol?L-1 NaOH溶液按一定比例混合，配成不同pH值的B-R缓冲溶液，并用酸度计校准。其它试剂为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。1.2实验方法取固绿FCF溶液（1.0×10-4mol?L-1）1mL；替米沙坦标准溶液（1.0×10-4mol?L-1）1mL；取pH6.20的B-R缓溶液1 .0mL；用水定容至刻度10mL ，摇匀，用1.0cm比色皿，用二次蒸馏水为参比，在598nm、632nm两个波长下进行测量吸光度。2、结果与讨论2.1吸收光谱图按实验方法配制溶液后，于U-3010型紫外-可见分光光度计上扫描得吸收光谱图1。从图1可以看到，以水为参比时，替米沙坦在可见光范围内无吸收（曲线5）；固绿FCF在可见光区波长为598nm产生强烈吸收（曲线1）；当在替米沙坦溶液中加入固绿FCF后，两者反应生成蓝色配合物在598nm为最大吸收波长。当试剂为参比时，在可见光区产生一个正吸收峰和一个负吸收峰，正吸收峰的最大吸收波长为598nm，负吸收峰的最大吸收波长为632nm。故本实验的测定波长选在598nm和632nm。因此，替米沙坦在一定浓度范围内呈良好的线性关系，可用于替米沙坦含量的光度测定，其波长在598nm和632nm作为该实验的测量波长。2.2缓冲溶液对实验的影响通过改变B-R缓冲溶液的pH值，固定2.0mL替米沙坦（C=1.0×10-4mol.L-1）和2.0mL固绿FCF（C=1.0×10-4 mol.L-1）得到吸光度-△A的值，通过B-R缓冲溶液与吸光度的关系，可以得到图2。由图表明：pH在5.51~7.56的B-R缓冲溶液所测吸光度最大且稳定，而在pH=6.20时所测吸光度值最大。故最终本实验选用pH=6.20的B-R缓冲溶液。固定固绿FCF（C=1.0×10-4mol.L-1）用量2.0mL和替米沙坦（1.0×10-4mol.L-1）2.0mL，改变B-R缓冲溶液pH6.20的用量从0.2mL、0.4mL到2 .0mL，从而确定pH6.20的B-R缓溶液的最佳用量。从吸光度与pH6.20B-R缓冲溶液用量的关系可以知道：当所取体积在0.6-1.0mL范围，吸光度差值最大。因此，在598nm和632nm波长可以得到最佳pH6.20的B-R缓冲溶液用量为0.8mL。2.3染料固绿FCF用量对实验的影响通过改变固绿FCF（C=1.0×10-4mol.L-1）的用量从0.2mL、0.4mL到4.0mL，固定替米沙坦（C=1.0×10-4mol.L-1）2.0mL和pH6.20的B-R缓冲溶液0.8mL，从固绿FCF和吸光度的关系从而确定固绿FCF的最佳用量。通过固绿FCF用量与吸光度的关系可以知道：1.0×10-4mol?L-1固绿FCF溶液用量在2.0~2.5mL时，吸光度最大且平稳。若用量少时，作用不完全；用量过大，空白值增大，误差增加。因此本实验选用2.0mL作为固绿FCF溶液的最佳用量。2.4标准品替米沙坦用量对实验的影响固定染料固绿FCF（C=1.0×10-4mol.L-1）的最佳用量2.0mL，pH6.20缓冲溶液用量0.8mL。改变标准品替米沙坦（C=1.0×10-4mol.L-1）的用量从0.2mL、0.4mL到3.0mL，从替米沙坦和吸光度的关系曲线确定替米沙坦的最佳用量。实验结果表明,浓度为1.0×10-4mol?L-1的替米沙坦的用量在１.８～２.４mL时，吸光度变化平稳。故本实验选用2.0mL作为替米沙坦的最佳用量。2.5表面活性剂对实验的影响取FGF溶液（1.0×10-4mol.L-1）2.0mL，pH6.20缓冲溶液用量0.8mL，TMST标准溶液（1.0×10-4mol.L-1）用量2.0mL，加表面活性剂（1.0g.L-1）的表面活性剂1.0 mL，定容至刻度线。本实验试验了聚乙稀醇、溴代异丁烷、十六烷基三甲基溴化铵、碘代正丁烷、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、四丁基溴化铵、溴化十六烷基吡啶等9种表面活性剂对体系灵敏度的影响，结果表明，表面活性剂对实验无增敏作用。2.6时间对吸光度稳定性的影响按实验方法配制溶液后，以1.0cm比色皿在最大吸收波长处每间隔5分钟测其吸光度，结果图3表明：配好溶液后测定，吸光度达到最大，吸光度不随放置时间的增加而有所变化，直到3h吸光度变化不大。说明体系反应较快，瞬间完成，配好溶液后即可测定。                          图3  时间对实验的影响2.7 加样顺序对吸光度变化植的影响取FGF溶液（1.0×10-4mol.L-1）2.0mL，pH6.20缓冲溶液用量0.8mL，TMST标准溶液（1.0×10-4mol.L-1）用量2.0mL，改变滴加顺序分别测量吸光度，从测量可以知道，测得吸光度最大时的滴加最佳顺序是FGF→pH6.20的缓冲溶液→TMST。因此最佳滴加顺序是FGF→pH6.20的缓冲溶液→TMST作为本实验的最佳滴加顺序。2.8 缔合物组成摩尔比法：固定1.0×10-4mol?L-1替米沙坦标准样品的用量为2 .0mL，pH6.20缓冲溶液用量0.8mL，改变1.0×10-4mol?L-1固绿FCF染料的用量（0.2、0.4、0.6、……3.0mL）。测定其吸光度对FGF的量与总量之比作图，其结果表明替米沙坦的物质的量∶固绿FCF的物质的量=３：７等摩尔比法：固定pH6.20缓冲溶液的量0.8mL，改变1.0×10-4mol?L-1固绿FCF染料的用量（从0.2～3.8mL），改变1.0×10-4mol?L-1替米沙坦的用量（从0.2、0.4、0.6、……3.8mL），配制溶液后，以1.0cm比色皿在最大吸收波长处测其吸光度。实验结果如图4所示，同样得知，替米沙坦的物质的量∶固绿FCF的物质的量=３：７  图4  缔和物组成对实验的影响2.9 相对标准偏差固定1.0×10-4mol?L-1固绿FCF染料的用量2.0mL，最佳pH6.20缓冲溶液用量0.8mL，1.0×10-4mol?L-1替米沙坦的标准溶液取2 .0mL。按最佳加样顺序加入各种物质，平行测定6次。表1 相对标准偏差测定序号123456相对标准偏差598nm0.4730.4560.4310.460.4470.4473.1%632nm-0.831-0.812-0.849-0.81-0.822-0.8141.8%从上面的相对标准偏差可以看出，通过相对标准偏差的测定，取样中存在的偏差对实验的影响较小。2. 10标准曲线与检出限取固绿FCF（1.0×10-4mol.L-1）用量2.0mL，pH6.20缓冲溶液用量0.8mL，改变替米沙坦（1.0×10-4mol.L-1）用量从0.1mL、0.2mL一直到2.0mL的用量，以1.0cm的比色皿在两个波长处，最大吸收（或最大褪色）波长处测其吸光度。实验结果如图5所示。该法测得在最大正吸收波长598nm处的线性回归方程为：△A =0.7649×105C -0.1219（c∶mol?L-1），线性范围为0～1.35×10-5mol?L-1，相关系数R为0.9969，表观摩尔吸光系数为6.43×104L?moL-1?cm-1，检出限为1.22×10-6mol?L-1。在最大负吸收波长632nm处的线性回归方程为△A = -1.6690×105C +0.16657（c∶mol?L-1），线性范围0～1.05×10-5mol?L-1，相关系数R为0.9936，表观摩尔吸光系数为1.5024×105L?moL-1?cm-1，检出限为3.2×10-7mol?L-12.11 干扰离子对实验的影响取pH6.20的B-R缓冲溶液0.8mL，固绿FCF用量2.0mL，试验了40多种外来离子对含量为1.0×10-4 mol?L-1的替米沙坦体系对吸光度的影响，测得有干扰离子存在时对替米沙坦标准溶液的相对偏差不大于±5％，如下表所示。从实验加入干扰离子后，通过测定加入干扰离子后的吸光度与没有加干扰离子的吸光度计算出相对标准偏差的数据可以看出，干扰离子对体系影响不大，体系稳定。表2  干扰离子对实验影响的测定物质浓度（g/l）相对偏差％物质浓度（g/l）相对偏差％尿素0.12.3酒石酸钠钾1.01.0CH3COONa0.054.7KI0.12.6CH3COONH40.10.87NH4I0.12.6NaF1.0-0.7草酸钠1.04.0NaBr0.11.7KBr0.11.7NH4NO30.053.75NaNO20.05-3.55HgNO30.53.0Zn(NO3)21.02.5Na2CO31.03.0NH4Cl0.005-4.5KMnO40.13.0KCl0.52.95NH4HCO30.053.0BaCl21.0-4.7ZnCl20.012.2FeCl30.54.4GaCl20.14.7AlCl30.053.55SrCl20.015.3Na2HPO40.15.5Na3PO4.12H2O1.00.6CdO30.014.8Na2SiO30.011.7KClO30.05-2.8Bi(NO3)3.5H2O0.1-1.4K2S2O80.53.95亚砷酸钠1.0-4.4FeSO4.7H2O0.11.5(NH4)2SO40.10.9Fe2(SO4)30.10.2Na2SO40.12.1MnSO40.12.5ZnSO4.7H2O0.13.5NaCl0.54.95CuSO40.11.8果糖0.50.67乳糖1.00.18蔗糖1.04.2麦芽糖1.01.5葡萄糖0.50.6淀粉0.54.53.样品分析3.1 尿样的制备由分析者自己提供尿样（分析者无传染病，无家庭病史，也没有吃药），用离心机离心（转速为3000r/min, 时间为20min），取其上清液，作为尿样。按实验方法分别测定无标准样品的尿样和有替米沙坦的尿样的吸光度。从测量结果可以看出：在尿样中未检测出替米沙坦，当在尿样中加入替米沙坦后，回收率满意。表3  尿样中替米沙坦的测定（λ＝598nm）尿样（mL）测定值加入标准品(mg)测定值（mg）测定平均值 （mg）平均回收率(%)相对偏差0.500.025730.02410.0244995.232.0%00.02428 00.0249500.0246200.0248900.0241.0 00.041150.03970.039796.60.28%00.0396900.0398200.0396900.0398200.04157表4  尿样中替米沙坦的测定（λ＝632nm）尿样的体积（mL）测定值加入标准品 (mg)测定值(mg)测定平均值(mg)平均回收率(%)相对偏差0.5 00.025730.02490.024597.230.38%00.025100.025000.025100.024500.02491.0 00.041150.04030.040498.1 1.27%00.040400.040500.040400.040300.0403３.2 合成样品的测定通过配制合成样品，在波长598nm和632nm测量出△A的值从而可以固定最佳固绿FCF染料的用量2.0mL、最佳pH6.20的B-R缓冲溶液0.8mL，再分别移取葡萄糖、MgSO4、果糖、FeCl3、蔗糖、淀粉各溶液不同的体积，按实验方法分别测定替米沙坦标准样品在0.8mL和1.0mL处的吸光度，并算出替米沙坦的回收率。实验结果见表５所示。从测定的结果来看,在合成样品中替米沙坦回收率满意.表5  合成样中替米沙坦的测定λ=598nmλ=632nm样品(mg)测定值（mg）测定平均值（mg）回收率(%)相对偏差(%)测定值（mg）测定平均值（mg）回收率(%)相对偏差(%)0.5 葡萄糖0.5 MgSO40.2 FeCl30.5 淀粉0.5 麦芽糖0.04115替米沙坦0.04080.041099.60.340.04030.040498.320.310.04090.04030.04110.04030.04100.04050.04090.04050.04110.04050.5 葡萄糖0.5 MgSO40.2 FeCl30.5 淀粉0.5 麦芽糖0.0515替米沙坦0.05130.051499.90.240.05150.052196.80.190.05130.05220.05150.05230.05150.05200.05150.05200.05130.0520 0.5 乳糖0.3 MgSO40.3 FeCl30.5 淀粉0.5 蔗糖0.04115替米沙坦0.04050.040698.70.520.040.040197.50.310.04080.04020.04090.04020.04060.040.04060.040.04030.04030.5 乳糖0.3 MgSO40.3 FeCl30.5 淀粉0.5 蔗糖0.05151替米沙坦0.04980.049096.50.710.04960.049896.880.560.04930.04960.050.050.04950.05010.04940.04990.05010.0502  4 讨论4.1  从替米沙坦分子结构中我们可以看到它含4个氮原子和1个羧基,从理论上知道，它具有酸碱两性。在溶剂的选择上,我们考察了在0.2mol?L-1氢氧化钠溶液中、0.1mol?L-1盐酸溶液中以及甲醇中的溶解行为,发现在0.1mol?L-1氢氧化钠溶液中易溶,0.1mol?L-1盐酸和甲醇中微溶,因此我们选择0.2mol?L-1氢氧化钠作为替米沙坦片剂的溶剂。4.2  临床医药试剂除含主要成分外，还含有葡萄糖、淀粉、和一些无机盐，故在做合成样测定时选用了两组干扰物质：一组含有FeCl3、MgSO4、淀粉、葡萄糖、麦芽糖；另一组为FeCl3、MgSO4、淀粉、蔗糖、乳糖作为干扰物质。从测定结果我们可以看到，这些干扰物质对体系无干扰，样品回收率较高。4.3  采用本方法测定替米沙坦的含量，其回收率较高，重现性好，体系稳定，且操作方法简便、快速。'