.原子吸收分光光度法

'第一篇总则1．一般规则1.1名词、术语1.1.1mg/L、μg/L或ng/L:本标准各项测定结果，除了色、浑浊度、臭和味、肉眼可见物、细菌总数及总大肠菌群、放射性物质等项目各有其特定表示单位或用文字描述外，其他各项的浓度测定结果均用mg/L、μg/L或ng/L表示，即每升水样中含有若干毫克、微克或纳克该种物质。1.1.2恒重：除溶解性固体外，系指连续两次干燥后的重量差异在0.2mg以下。1.1.3准确称取：指用分析天平称重准确到0.0001g。例如：准确称取约0.2g草酸钠，是表明称取0.2g左右，但要准确到0.0001g。1.1.4量取：指用量筒取水样或试液。1.1.5吸取：指用无分度吸管（又称移液管）或刻度吸管（又称吸量管）吸取。取水样的体积：50ml以下用无分度吸管吸取，大于50ml时，可用量筒量取。1.1.6最低检测量：指除零管外的第一个标准管所含该被测物的量。1.1.7最低检测浓度：系为最低检测量所对应的浓度。1.1.8参比溶液：本标准方法所列项目，除另有规定外，均以溶剂空白（纯水或有机溶剂）作参比。1.2试剂及浓度表示1.2.1试剂规格：本标准所用试剂，凡未指明规格者，均为分析纯（Ar）。当需用其他规格时将另作说明；但指示剂和生物染料不分规格。1.2.2两种液体相混合的试剂，以溶质体积+溶剂体积表示两者体积比。凡未注明溶剂名称者，均指纯水。例如：1+3盐酸，系指1体积浓盐酸与3体积纯水相混溶。1.2.3本标准中一些试剂的浓度,用mol/L表示。但在滴定法中氧化-还原部分，仍沿用当量浓度表示。1.2.4所用试剂的配制方法均在各项目中阐明，表1为几种常用酸、碱的浓度和配制稀溶液的配方。表1几种常用酸、碱的浓度及稀释配方　 酸、碱名称盐酸硫酸硝酸冰乙酸氨水比重(20/4℃)1.191.841.421.050.88浓度(g/100g)36～3895～9865～689925～28摩尔浓度(mol/L)1218161715配制每升下列溶液所需浓酸或浓碱的毫升数:配制6mol/L溶液500(1+1)334(1+2)375353400配制1mol/L溶液8356635967　1.3纯水系指下述的蒸馏水或去离子水等。有特殊要求的纯水，则另作具体说明。1.3.1蒸馏水:将清洁水用蒸馏器蒸馏制备。1.3.2重蒸馏水：用全玻璃蒸馏器将蒸馏一次的蒸馏水重蒸馏制备。蒸馏时应避免污染。1.3.3去离子水：将清洁水通过阴阳离子树脂交换床制备。1.3.4蒸馏去离子水：将市售蒸馏水再通过阴阳离子树脂交换床制备。1.3.5去离子蒸馏水：将去离子水再用全玻璃蒸馏器一次制备。1.4玻璃仪器玻璃按其成分不同,可分为硬质玻璃（又称硼硅玻璃）与普通玻璃。普通玻璃耐热、耐腐蚀、硬度等性能都较差，但透明性好，用以制造不需加热的仪器，如无分度吸管等；硬质玻璃由于耐热、抗腐蚀等性能好，许多分析仪器如烧杯、烧瓶等均用硬质玻璃制成。试剂瓶及采样容器，最好使用硬质玻璃瓶。当试剂或水样对玻璃具有侵蚀性，或玻璃对试剂与水样有影响时，则改用聚乙烯瓶。1.4.1玻璃仪器的校正：容量瓶、滴定管、无分度吸管、刻度吸管等应按国家有关规定及规程进行校正。 配制标准色列时，须使用成套的比色管，各管分度高低应该一致，必要时应校正体积。1.4.2玻璃仪器的洗涤：玻璃器皿须经彻底洗净后方能使用。一般方法是先用自来水冲洗，再用洗涤液等洗涤，然后用自来水冲洗干净，最后用纯水冲洗3次。洗净后的器皿内壁，应能均匀地被水润湿，如果发现有小水珠或不沾水的地方，说明容器壁上有油垢，必须重新洗涤。常用洗涤液配制和使用方法如下。1.4.2.1铬酸洗涤液(重铬酸钾的浓硫酸溶液)：称取100g工业用重铬酸钾于烧杯中，加入约100ml水，微加热，使重铬酸钾溶解。放冷后慢慢加入工业用浓硫酸，边加边用玻棒搅动（注意：防止硫酸溅出），开始加入硫酸时有沉淀析出，加硫酸至沉淀刚好溶完为止。这种洗涤液是一种很强的氧化剂，但作用比较慢，因此须使洗涤的器皿与洗涤充分接触，浸泡数分钟至数小时。用铬酸洗涤液洗过的器皿，要用自来水充分清洗，一般要冲洗7～10次，最后用纯水淋洗3次。用铬酸洗涤液洗过的器皿要特别注意吸附在器皿壁上的铬离子的干扰。铬酸洗涤液应贮于磨口玻璃瓶，以免吸收水分，用后仍倒入瓶中。多次使用后洗涤液变为绿褐色，就不能再用。1.4.2.2肥皂液、碱液及合成洗涤剂：用以洗涤油脂和一些有机物。1.4.2.310%氢氧化钾酒精溶液：称取100g氢氧化钾，加50ml水溶解，加工业酒精至1L。它适用于洗涤油垢、树脂等。1.4.2.4酸性草酸或酸性羟胺洗涤液：适用于洗涤氧化性物质。如洗涤沾污氧化锰的容器，羟胺作用较快。其配方是：称取10g草酸或1g盐酸羟胺，溶于100ml1+4盐酸溶液中。1.4.2.5硝酸溶液：测定金属离子时需用不同浓度（常用的浓度为1+9）的硝酸溶液浸泡、洗涤玻璃仪器。洗涤玻璃仪器时应防止受到新的污染，如测铁所用的玻璃仪器不能用铁丝柄毛刷刷洗，可用塑料棒栓以泡沫塑料刷洗；测锌、铁用的玻璃仪器用酸洗后不能再用自来水冲洗，必须直接用纯水洗涤；测氨和碘用的仪器洗净后应浸泡在纯水中。在进行水中微量物质分析时还要注意实验室的环境条件。空气中有害气体和灰尘往往会严重干扰测定，必要时应采取净化措施。1.5仪器校正各测定项目中使用的天平、分光光计等需定期校正。2水样的采集和保存2.1水样的采集 项目采样容器保存方法色、臭、味浑浊度pH值总硬度金属(铁、锰、铜、锌、镉、铅)挥发酚类阴离子合成洗涤剂氟化物氰化物砷、硒汞　铬(六价)细菌总数总大肠菌群余氯氨氮亚硝酸盐氮硝酸盐氮玻璃瓶玻璃瓶或聚乙烯瓶玻璃瓶或聚乙烯瓶聚乙烯瓶或玻璃瓶　聚乙烯瓶或玻璃瓶玻璃瓶玻璃瓶聚乙烯瓶聚乙烯瓶玻璃瓶或聚乙烯瓶玻璃瓶或聚乙烯瓶聚乙烯瓶　内壁无磨损的玻璃瓶消毒玻璃瓶消毒玻璃瓶玻璃瓶4℃保存,24h内测定4℃保存最好现场测定,必要时4℃保存,6h测定必要时加硝酸至pH<2　加硝酸至pH<2加氢氧化钠至pH≥12,4℃保存,24h内测定4℃保存,24h测定4℃保存加氢氧化钠至pH≥12,4℃保存,24h内测定　加1+9硝酸(内含0.01％Cr2O72-)pH<2,10天内测定加氢氧化钠至pH7～9,尽快测定在4h内检验在4h内检验现场测定每升水样加0.8ml硫酸,4℃保存,24h内测定4℃保存,尽快分析每升水样加0.8ml硫酸,4℃保存,24h内测定每升水样加0.8ml硫酸,4℃保存,24h内测定 耗氧量氯化物硫酸盐碘化物滴滴涕六六六氯仿四氯化碳苯并(A)芘玻璃瓶或聚乙烯瓶玻璃瓶或聚乙烯瓶璃瓶或聚乙烯瓶玻璃瓶玻璃瓶或聚乙烯瓶玻璃瓶或聚乙烯瓶玻璃瓶或聚乙烯瓶玻璃瓶玻璃瓶玻璃瓶玻璃瓶玻璃瓶(棕色)　　　　　现场处理后送回实验室,于冰箱内保存不得超过4h现场处理后送回实验室,于冰箱内保存不得超过4h阴凉的暗处放置不超过4h2.1.1供物理、化学检验用的水样的采集方法：根据欲测项目决定的。采集的水样应均匀、有代表性以及不改变其理化特性。水样量根据欲测项目多少而不同，采集2～3L即可满足通常水质理化分析的需要。若测定苯并（a）芘等项目时，则需采集10L水样。采集水样的容器，可用硬质玻璃瓶或聚乙烯瓶。一般情况下，两种均可应用。当容器对水样中某种组分有影响时，则应选用合适的容器。采样前先将容器洗净，采样时用水样冲洗3次，再将水样采集于瓶中。采集自来水及具有抽水设备的井水时，应先放水数分钟，使积留于水管中的杂质流去，然后将水样收集于瓶中。采集无抽水设备的井水或江、河、水库等地面水的水样时，可将采样器浸入水中，使采样瓶口位于水面下20～30cm，然后拉开瓶塞，使水进入瓶中。2.1.2供卫生细菌学检验用的水样的采集方法:采集前所用容器必须按照规定的办法进行灭菌,并需保证水样在运送、保存过程中不受污染。 在取自来水样时，先用酒精灯将水龙头烧灼消毒，然后把水龙头完全打开，放水5～10min后再取水样。取井水及江、河、湖、水库等地面水水样时，应距水面10～5cm深处取样。取样时应将采样器先做灭菌处理。采取含有余氯的水样时，应在水样瓶未消毒前按每500ml水样加2ml计加入1.5%硫代硫酸钠溶液。2.2水样的保存采样和分析的间隔时间尽可能缩短。某些项目的测定，应现场进行。有些项目则需加入适当的保存剂。需要加保存剂的水样，一般应先将保存剂加入瓶中，或在低温下保存。加酸保存可防止金属形成沉淀和抑制细菌对一些项目的影响。加碱可防止氰化物等组分挥发。低温保存可抑制细菌的作用和减慢化学反应的速率。六价铬不应在酸性溶液中而应在接近中性或弱碱性的溶液中保存。当水样pH值低时，六价铬易被还原，一般推荐pH7～9时保存。表2为本法所含分析项目对存放水样容器的要求和水样保存方法。表2存放水样容器的要求和水样保存方法。注:①未注明保存方法的项目表示水样不需要特殊处理。      ②测硒用的聚乙烯瓶必须用1+1盐酸或1+1硝酸溶液浸泡4h以上,然后再用纯水清洗干净。3水质检验结果的表示方法和数据处理3.1有效数字记录和整理分析结果时，为避免报告结果混乱，要确定采用几位“有效数字”。报告的各位数字，除末位外，均为准确测出，仅末位是可疑数字。可疑数字以后是无意义数。报告结果时只能报告到可疑那位数，不能列入无意义数。报告的位数，只能在方法的灵敏限度以内，不应任意增加位数。例如75.6mg/L，表示化验人员对75是肯定的，0.6是不确定的，可能是0.5或0.7。可疑数字以后的数字可根据GB1.1～81《标准化工作导则编写标准的一般规定》附录C的规定进行修约。当可疑数以后的数字为1，2，3，4者舍去，为6，7，8，9者进入，若为5时又需根据5右边的数字而定。若5右边的数字全部为零，舍或入需根据5之左的数字为奇数或偶数而定。5之左为奇数时进1，5之左为偶数时则舍去；若5右边数字并非全部为零，则不论5左边的数字为奇数或偶数，一律进入。例如某数为14.65,应报告为14.6。又如0.35可修约为0.4,1.0501可修约为1.1。“0”可以是有效数字，也可以不是有效数字，仅仅表示位数。如104,40.08,1.2010,所有的0均为有效数字;而0.6050g，小数点前面的0则不是有效数字，只起到定位作用。0为有效数字时不可略去不写，如滴定管读数为23.60ml时，即应记录为23.60ml，而不得记录为23.6ml。如果量筒取25ml水样，就只能写成25ml，而不能写成25.0ml。 在说明标准溶液浓度时，常写作1.00ml含0.500mg某离子,此数字表示体积准确到0.1ml，重量准确到0.01mg；然而1ml含0.5mg某离子，则只是一种粗略的含量表示。当几个数字相加或相减时，小数点后数字的保留位数，应以各数中小数点后位数最少者为准，例如2.03+1.1+1.034的答数不应多于小数点位数最少的1.1，所以答数是4.2而不是4.164。当几个数值相乘除时，应以有效数字位数最少的那个数值，即相对误差最大的数据为准，弃去其余各数值中的过多位数，然后进行乘、除。有时也可以暂时多保留一位数，得到最后结果后，再弃去多余的数字。例如将0.0121,25.64,1.05782三个数值相乘,因第一个数值0.0121仅三位有效数字,故应以此数为准,确定其余两个数值的位数,然后相乘,即0.0121×25.6×1.06=0.328，不应写成0.328182308。3.2分析数据的取舍在一组分析数据中,往往有个别数值与其他值相差较大,如不舍弃,将影响均值的准确性,但数据的舍弃应有充分理由,可用下述方法之一处理。3.2.1Dixon检验法将n次测定的数据从小到大排列为X1，X2......Xi......Xn-1，Xn。X1为最小可疑数，Xn为最大可疑数，然后按照下列相应的公式计算统计量（r）：                                   检验Xn           检验X13～7次    r10=(Xn－Xn-1)/(Xn－X1)或r10=(X2－X1)/(Xn－X1).......(1)　8～10次    r11=(Xn－Xn-1)/(Xn－X2)或r11=(X2－X1)/(Xn-1－X1).......(2)　11～13次    r21=(Xn－Xn-2)/(Xn－X2)或r21=(X3－X1)/(Xn-1－X1).......(3)　14～25次    r22=(Xn－Xn-2)/(Xn－X3)或r22=(X3－X1)/(Xn-2－X1).......(4)　将统计量（r）的计算值与根据n次测定和显著性水平从表3中查得的临界值比较，如极端值大于临界值，应予舍弃，并重复进行检验，直到不再检出其他极端值为止。表3Dixon检验临界值 n显著性水平n显著性水平0.050.010.050.01345678910111213140.9410.7650.6420.5600.5070.5540.5120.4770.5760.5460.5210.5640.9880.8890.7800.6980.6370.6830.6350.5970.6790.6420.6150.6411516171819202122232425　0.5250.5070.4900.4750.4620.4500.4400.4300.4210.4130.406　0.6160.5950.5170.5610.5470.5350.5240.5140.5050.4970.489　例1：某水样的6次分析结果按大小顺序排列如下：40.02,40.12,40.16,40.18,40.18,40.20,确定极端值的取舍。解：从上述公式可知，当n=6时，利用式（5）进行计算：                    r10=(X2－X1)/(Xn－X1)(检验X1)...................(5)代入数值计算r10:                    r10=(40.12-40.02)/(40.20-40.02)=0.10/0.18=0.556查表3，当n=6,0.05显著性水平的r=0.560,故40.02应保留。 3.2.2Grubbs检验法将一组数据由小到大依次排列为X1,X2....Xi....Xn-1,Xn,若认为最小值X1或最大值Xn可疑时,用下列公式之一计算统计量T:               （检验X1）     (检验Xn)                T=(-X1)/S或T=(Xn-)/S.................................(6)式中：--算术平均值      S--标准差。将求得的T值与表4中的临界值T(a,n)比较，如T>T(a,n),此可疑值应舍弃；若T23036.1.5.2水源水36.1.5.2.1将水样作1：10稀释。36.1.5.22于各装有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液(36.1.4.2)的5个试管中(内有倒管),各加入10ml水样；于各装有10ml乳糖蛋白胨培养液(36.1.4.1)的5个试管中(内有倒管),各加入1ml水样；于各装有10ml乳糖蛋白胨培养液(36.1.4.1)的5个试管中(内有倒管),各加入1ml1：10稀释水样。共计15管,三个稀释度。以后的检验步骤同上述生活饮用水的检验方法。36.1.5.2.3根据证实有总大肠菌群存在的阳性管数查表20报告每升水样中的总大肠菌群数。               表20总大肠菌群（MPN）检数表（   总接种量55.5ml,其中5份10ml水样；5份1ml水样；5份0.1ml水样） 接种量，ml每100ml水样中总大肠菌群近似数接种量，ml每100ml水样中总大肠菌群近似数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滤膜法36.2.1应用范围36.2.1.1本法适用于饮用水和水源水，特别是低浊度水样中总大肠菌群数的测定。36.2.1.2本法适用于较大量水样的测定。36.2.1.3如检验原水样量过少，可加适量灭菌水稀释使体积加大后再测定。36.2.2原理滤膜是一种微孔薄膜，孔径0.45～0.60μm，能滤过大量水样，并将水中含有的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜贴在选择性培养基上，经培养后，直接计数滤膜上生长的，典型大肠菌群菌落，算出每升水样中含有的总大肠菌群数。36.2.3仪器36.2.3.1滤器。36.2.3.2滤膜，孔径0.45～0.65μm。直径根据滤器规格，目前常用的有3.5cm和4.7cm两种。36.2.3.3抽滤设备。36.2.3.4无齿镊子。36.2.3.5其他仪器同35.1.3和36.1.3。36.2.4培养基36.2.4.1品红亚硫酸钠培养基36.2.4.1.1成分 蛋白胨酵母浸膏牛肉膏乳糖    琼脂磷酸氢二钾无水亚硫酸钠5％碱性品红乙醇溶液蒸馏水10g5g5g10g15～20g 3.5g5g左右20ml1000ml                  36.2.4.1.2培养基的制备培养基的制备方法与36.1.4.3.2制备法相同。36.2.4.2乳糖蛋白胨培养液，同36.1.4.1条相同。36.2.4.3乳糖蛋白胨半固体培养基36.2.4.3.1成分蛋白胨牛肉膏酵母浸膏乳糖琼脂蒸馏水10g5g5g10g5g左右 1000ml            36.2.4.3.2制法 将上述成分置于800ml蒸馏水中，加热溶解，调整pH为7.2～7.4，再用蒸馏水补充至1000ml，过滤分装于小试管中，每管装入的培养基量约为试管容积的1／3，115℃灭菌20min，冷却后置于冰箱内保存，以不超过二周为宜。此培养基制成后，需用已知大肠菌群菌株进行鉴定，应在6～8h产生明显气泡。36.2.5步骤36.2.5.1准备工作36.2.5.1.1滤膜灭菌：将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌三次，每次15min。前两次煮沸后需更换水洗涤2～3次，以除去残留溶剂。36.2.5.1.2滤器灭菌：用点燃的酒精棉球，火焰灭菌。也可用121℃灭菌20min。36.2.5.2过滤水样36.2.5.2.1用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙向上，贴放已灭菌的滤床上，稳妥地固定好滤器，将333ml水样(如水样含菌数较多，可减少过滤水样量)注入滤器中，加盖，打开滤器阀门，在负0.5大气压下抽滤。36.2.5.2.2水样滤完后，再抽气约5S，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基(36.2.4.1)，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入37℃恒温箱内培养22～24h。36.2.6观察结果36.2.6.1挑选符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检。紫红色，具有金属光泽的菌落；深红色，不带或略带金属光泽的菌落；淡红色，中心色较深的菌落。36.2.6.1.1凡系革兰氏染色阴性无芽胞杆菌，再接种乳糖蛋白胨培养液(36.2.4.2)或乳糖蛋白胨半固体培养基(36.2.4.3)(接种前应将此培养基放入水浴中煮沸排气，冷却凝固后方能使用)，经37℃培养，前者于24h产酸产气者；或后者经6～8h培养后产气者，则判定为总大肠菌群阳性。36.2.6.1.211水样中总大肠菌群数等于滤膜上生长的大肠菌群菌落总数乘以3。37余氯余氯是指水经加氯消毒，接触一定时间后，余留在水中的氯。 余氯有三种形式：总余氯：包括HOCl，NH2Cl，NHCl2等。化合余氯：包括NH2Cl，NHCl2及其他氯胺类化合物。游离余氯：包括HOCl及OCl-等。余氯可用邻联甲苯胺比色法(37.1法)、邻联甲苯胺－亚砷酸盐比色法（37.2法）、N，N-乙基对苯胺-硫酸亚铁胺容量法(37.3)测定。37.1法较简单，可测定总余氯及游离余氯。37.2法可以分别测定三种形式的余氯，并能去除假色的干扰。37.3法可分别测定游离余氯、一氯胺、二氯胺及三氯胺。37.1邻联甲苯胺比色法37.1.1应用范围37.1.1.1本法适用于测定生活饮用水及其水源水的总余氯及游离余氯。37.1.1.2水中含有悬浮性物质时干扰测定，可用离心法去除。干扰物质的最高允许含量如下：高铁，0.2mg／L；四价锰，0.01mg／L；亚硝酸盐：0.2mg／L。37.1.1.3本法最低检测浓度为0.01mg／L余氯。37.1.2原理在pH值小于1.8的酸性溶液中，余氯与邻联甲苯胺反应，生成黄色的醌式化合物，用目视法进行比色定量：还可用重铬酸钾－铬酸钾溶液配制的永久性余氯标准溶液进行目视比色。37.1.3永久性余氯比色溶液的配制37.1.3.1磷酸盐缓冲贮备溶液：将无水磷酸氢二钠（Na2HPO4)和无水磷酸二氢钾(KH2PO4)置于105℃烘箱内2h，冷却后，分别称取22.86g和46.14g。将此两种试剂共溶于纯水中，并稀释至1000ml。至少静置4天，使其中胶状杂质凝聚沉淀，过滤。37.1.3.2磷酸盐缓冲溶液(pH6.45)：吸取200.0ml磷酸盐缓冲贮备溶液(37.1.3.1)，加纯水稀释至1000ml。37.1.3.3重铬酸钾-铬酸钾溶液：称取0.1550g干燥的重铬酸钾(K2Cr2O7)及0.4650g铬酸钾(K2CrO4)，溶于磷酸盐缓冲溶液(37.1.3.2)中，并定容至1000ml。此溶液所产生的颜色相当于1mg／L余氯与邻联甲苯胺所产生的颜色。37.1.3.40.01～1.0mg／L永久性余氯标准比色管的配制方法：按表21所列数量，吸取重铬酸钾-铬酸钾溶液(37.1.3.3)，分别注入50ml刻度具塞比色管中，用磷酸盐缓冲溶液稀释至50ml刻度。避免日光照射，可保存6个月。 37.1.3.5若水样余氯大于1mg／L，则需将重铬酸钾－铬酸钾溶液的量增加10倍，配成相当于10mg／L余氯的标准色，再适当稀释，即为所需的较浓余氯标准色列。           表21永久性余氯标准比色溶液的配制余氯，mg／L重铬酸钾－铬酸钾溶液，ml余氯，mg／L重铬酸钾－铬酸钾溶液，ml0.010.030.050.100.200.300.400.51.52.55.010.015.020.00.500.600.700.800.901.0025.030.035.040.045.060.037.1.4试剂37.1.4.1邻联甲苯胺溶液:称取1.35g二盐酸邻联甲苯胺〔(C6H3CH3NH3)2·2HCl〕，溶于500ml纯水中，在不停搅拌下将此溶液加至150ml浓盐酸与350ml纯水的混合液中，盛于棕色瓶内，在室温下保存，可使用6个月。当温度低于0℃，邻联甲苯胺将析出，不中易再溶解。37.1.5步骤37.1.5.1取配制永久性作氯标准比色管用的同型50ml比色管，先放入2.5ml邻联甲苯胺溶液(37.1.4.1)，再加入澄清水样50.0ml，混合均匀。水样的温度最好为15～20℃，如低于此温度，应先将水样管放入温水浴中，使温度提高到15～20℃。37.1.5.2水样与邻联甲苯胺溶液接触后，如立即进行比色，所得结果为游离余氯；如放置10min使产生最高色度，再进行比色，则所得结果为水样的总余氯。总余氯减去游离余氯等于化合余氯。37.1.5.3如余氯浓度很高，会产生橘黄色。若水样碱度过高而余氯浓度较低时，将产生淡绿色或淡蓝色，此时可多加1ml邻联甲苯胺溶液，即产生正常的淡黄色。37.1.5.4如水样浑浊或色度较高，比色时应减除水样所造成的空白。37.2邻联甲苯胺-亚砷酸盐比色法 37.2.1应用范围37.2.1.1本法适用于分别测定生活饮用水及其水源水的总余氯、化合余氯及游离余氯。37.2.1.2本法的灵敏度与水温成反比，故测定时水温不宜超过20℃。37.2.1.3本法最低检测浓度为0.01mg／L余氯。37.2.2原理水样中余氯与邻联甲苯胺作用，生成黄色化合物后再加入亚砷酸盐时，颜色不再变化。如先加亚砷酸盐，则亚砷酸盐将余氯还原为氯化物，不能再与邻联甲苯胺作用，此时呈现的是干扰物的假色。根据亚砷酸盐及邻联甲苯胺的加入次序，并控制不同的显色时间，可以分别测出游离余氯、化合余氯和总余氯的含量，并能去除假色的干扰。37.2.3试剂37.2.3.10.5％亚砷酸钠溶液：称取5g亚砷酸钠（NaAsO2)，溶于纯水中，并稀释至1000ml。37.2.3.2邻联甲苯胺溶液：同37.1.4.1。37.2.4步骤37.2.4.1取50ml比色管3支，标明甲、乙、丙。37.2.4.2向甲管中加入2.5ml邻联甲苯胺溶液(37.2.3.2)，加入50.0ml水样，并迅速混匀，立即加入2.5ml亚砷酸钠溶液(37.2.3.1)，混合均匀，与标准管进行比色，记录结果(A)。A包括游离余氯及干扰物质所显示的颜色。37.2.4.3向乙管中放入2.5ml亚砷酸钠溶液(37.2.3.1)，加入50.0ml水样，迅速混匀，并加入2.5ml邻联甲苯胺溶液(37.2.3.2)，混合均匀，立即与标准管进行比色，记录结果（B1）。准确放置10min后，再将乙管与标准管比较，记录结果（B2）。B1为干扰物质于迅速混合后所产生的假色；B2为干扰物质混合10min后所产生的假色。37.2.4.4向丙管中放入2.5ml邻联甲苯胺溶液(37.2.3.2)，加入50.0ml水样，迅速混匀，准确放置10min后再与标准管比色，记录结果（C）。C为总余氯及干扰物质于混合10min后显示的颜色。37.2.5计算总余氯D（Cl2，mg／L）＝C－B2................(71)游离余氯E（Cl2，mg／L）＝A－B1..............(72) 化合性余氯（Cl2，mg／L）＝D－E...............(73)37.3N，N-二乙基对苯二胺-硫酸亚铁铵滴定法37.3.1应用范围37.3.1.1本法适用于分别测定生活饮用水及其水源水的游离余氯、一氯胺、二氯胺及三氯胺。37.3.1.2水温及pH值对本法有影响，必须严格控制。氧化锰干扰测定，测定前须先去除。注：①滴定时水样的pH值应控制在6.2～6.5，此时终点敏锐。若pH值太低，则37.3.5.1.1的游离余氯结果中包括有二氯胺，37.3.5.1.2的一氯胺结果中包括有三氯胺。如pH值太高，水中的溶解氧会使指示剂产生红色，使结果偏高。如温度较高，氯胺容易与指示剂反应，使游离余氯结果偏高，故测定时应将水样冷却至20℃以下。②水中如有氯化锰存在，可用下列步骤消除其干扰：在三角瓶中加入5ml缓冲溶液、一小粒碘化钾结晶及0.5ml0.5％亚砷酸钠溶液，再加入100ml水样，混匀。加入5mlDPD指示剂溶液，混匀后用硫酸亚铁铵标准溶液滴定。37.3.1.3本法最低检测浓度为0.001mg／L余氯。37.3.2原理水中余氯与N，N-二乙基对苯二胺(DPD)指示剂反应显出红色，用硫酸亚铁铵标准溶液滴定。余氯还原为氯化物时红色消失。从硫酸亚铁铵溶液滴定量求出余氯的量。在下列不同条件下滴定，可求得不同形式的余氯含量。37.3.2.1水解缓冲至pH值为6.2～6.5，如无碘化物存在，游离余氯立即与DPD指示剂反应显示红色，用硫酸亚铁铵溶液滴定，测出的是游离余氯量。37.3.2.2再加少量碘离子，则催化一氯胺使红色重现，用硫酸亚铁铵溶液滴定，测出的是一氯胺量。37.3.2.3再加过量的碘化物，二氯胺使红色重现，用硫酸亚铁铵溶液滴定，测出的是二氯胺量。37.2.3.4水样先加入碘离子，再加DPD指示剂显示红色，用硫酸亚铁铵溶液滴定，测出的是游离氯和1／2三氯胺的总量。37.3.3仪器37.3.3.150ml滴定管。37.3.3.2250ml三角瓶。 37.3.4试剂37.3.4.1磷酸盐缓冲溶液：称取24g无水磷酸氢二钠(Na2HPO4)和46g无水磷酸二氢钾(KH2PO4)，溶于纯水中，另在100ml纯水中溶解800mg乙二胺四乙酸二钠(C10H14N2O8Na2·2H2O)，然后加入上述磷酸盐溶液，加纯水稀释至1000ml。另加20mg氯化汞(HgCl2)，以防止霉菌生长。37.3.4.2硫酸亚铁铵标准溶液：称取1.106g硫酸亚铁铵〔Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O〕，溶于含1ml1＋3硫酸的纯水中，用新煮沸放冷的纯水稀释至1000ml。用重铬酸钾标准溶液校正溶液，使1.00ml相当于100.0μg余氯。此标准溶液可使用1个月。37.3.4.3N，N-二乙基-对苯二胺(DPD)指示剂溶液：称取1gN，N-二基-对苯二胺草酸盐｛〔(C2H5)2NC6H4NH2〕2·(COOH)2｝或1.5g对氯基-N，N-二乙基苯胺硫酸盐〔(C2H5)2NC6H2NH2·12H2SO4〕，溶于含有8ml1＋3硫酸和200mg乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2O8Na2·2H2O）的不含氯和纯水中，并用不含水稀释至1000ml，贮于具玻塞的棕色玻璃瓶中。如发现溶液变色，应即弃去。注意！DPD草酸盐有毒，防止摄入。37.3.4.4碘化钾结晶。37.3.4.5碘化钾溶液：称取0.5g碘化钾(KI)，溶液于新煮沸放冷的纯水中，并稀释至100ml，贮于具玻塞的棕色玻璃瓶中，最好冷藏。如发现溶液颜色变黄，应即弃去。37.3.5步骤37.3.5.1游离余氯和氯胺：分别吸取5ml缓冲溶液(37.3.4.1)和5mlDPD指示剂溶液(37.3.4.3)，置于三角瓶中，加入100ml水样，混匀。37.3.5.1.1游离余氯：用硫酸亚铁铵溶液（37.3.4.2）迅速滴定至红色消失，读数为A。37.3.5.1.2一氯胺：加入一小粒碘化钾晶体(37.3.4.4)，混匀。如估计二氯胺含量较高，加入0.1ml碘化钾溶液(37.3.4.5)，并混匀。用硫酸亚铁铵标准溶液(37.3.4.2)继续滴定至红色消失，读数为B。37.3.5.1.3二氯胺：加入约1g碘化钾晶体(37.3.4.4)，混匀使其溶解，放置2min，用硫酸亚铁铵标准溶液(37.3.4.2)继续滴定至红色消失。如二氯胺含量过高，红色重现，多放2min再滴定，读数为C。37.3.5.2游离余氯和三氯胺：如测定游离余氯过程中加指示剂后有显红色，表示水中不存在游离余氯和三氯胺。如显出红色，则按下述步骤操作。37.3.5.2.1取一个三角瓶，放入一粒碘化钾结晶(37.3.4.4)，加入100ml水样，混匀。加5ml缓冲溶液(37.3.4.1)和5mlDPD指示剂(37.3.4.3)。37.3.5.2.2另取一个三角瓶，倒入经上述处理的水样，混匀。37.3.5.2.3用硫酸亚铁铵标准溶液(37.3.4.2)迅速滴定至红色消失，读数为D。 37.3.6计算      C＝A×100/V.....................................(74)式中：C───水样中的余氯（Cl2），mg／L；     A───硫酸亚铁铵标准溶液用量，ml；     V───水样体积，ml。按表22分别计算各种形式的余氯含量。               表22各种形式余氯的计算读数不含三氯胺时含三氯胺时AB－AC－BD2（D－A）C－D游离余氯一氯胺二氯胺－－－游离余氯一氯胺二氯胺＋1／2三氯胺游离余氯＋1／2三氯胺三氯胺二氯胺38总α放射性此处的总α放射性是指天然水中除氡以外的所有α辐射体，包括天然和人工核素的总放射性溶液。地面水中总α放射性一般低于0.01Bq／L，地下水中较高。测量总α放射性的方法有直接测量法和比较测量法。后一种方法比较简便，使用较广。38.1直接测量法38.1.1应用范围本法适用于测定生活饮用水及其水源水中总α放射性浓度。38.1.2原理 在生活饮用水及其水源的放射性测量中，由于放射性浓度较低，必须先将水中的放射性核素浓集到少量固体物质上，再用固体物质制成源，才能进行放射性测量。本法使用蒸发方式浓集。在固体物质中，α粒子射程极短，当测量源达到一定厚度时，由它的表面发射的α粒子数趋于饱和，这一厚度称为“有效厚度”。在实际测量中，测量源的厚度应大于有效厚度，因为在这种条件下由测量源表面发射的α粒子数将不随厚度变化，操作比较方便。使用直接测量法，在事先已测得待测水样体积、浓缩后制成的固体物质重量、样品源的有效厚度和测量装置计数效率和情况下，只须直接测量由待测水样制成的样品源的α净计数率，便可计算水样中总α放射性浓度。38.1.3仪器38.1.3.1低本底α、β测量仪。38.1.3.2电热恒温干燥箱。38.1.3.3红外线干燥灯。38.1.3.4干燥器。38.1.4试剂38.1.4.1盐酸。38.1.4.2丙酮。38.1.4.3天然铀或钚－239参考源，活性区面积与样品源相同，强度为103表面粒子数／2π·min。38.1.4.4铀标准溶液；用商品铀标准溶液稀释或按下述方法配制。取一定量分析纯八氧化三铀于瓷蒸发皿中，放入高温炉，在500℃下灼烧20min，在干燥器中冷至室温。用称量瓶准确称取0.479g八氧化三铀，有6M盐酸将其转入500ml烧杯中。加热溶解。冷却，将溶液转入1000ml容量瓶中。用纯水洗涤称量瓶及烧杯三次，洗涤液并入容量瓶中。用纯水定容至刻度，摇匀。铀标准溶液的比活度为10Bq／ml。38.1.5步骤38.1.5.1样品处理38.1.5.1.1取1L水样倒入2000ml烧杯中，缓慢加热，蒸发浓缩。若上述水样中残渣量不够制源需要时，在蒸发过程中可以添加水样，但须控制体积不得超过烧杯容积的二分之一。注：水样中残渣含量可通过预实验测定。 38.1.5.1.2将烧杯中少量浓缩液连同沉淀转入已称量瓷蒸发皿中，以数滴1M盐酸润湿烧杯壁，用带橡皮头的玻璃棒擦洗烧杯壁三次，洗涤液转入蒸发皿中，继续蒸至近干。38.1.5.1.3将蒸发皿置于电热恒温干燥箱内，在103～105℃范围内烘干。放入干燥器中冷至室温。准确称量浓缩成的固体物质重量。38.1.5.1.4将固体物质研细、混匀。38.1.5.2测量38.1.5.2.1样品源制备和放射性测量38.1.5.2.1.1取一定量上述固体粉末均匀铺在样品盘内，制成厚度大于有效厚度的样品源。注：①固体粉末取样量：直径18mm样品盘，大于25mg；直径50mm样品盘，大于200mg。为了提高方法的灵敏度，应尽量使用大面积样品盘。②为了使固体粉末铺匀，可以使用压样器，也可以用数滴丙酮润湿固体粉末帮助铺匀，但经润湿的样品源须在红外灯下烘干后才能测量。38.1.5.2.1.2用低本底α、β测量仪的α道测量样品源的α活性，同时测量仪器的本底计数。38.1.5.2.2有效厚度测定38.1.5.2.2.1吸取5ml铀标准溶液放入2000ml烧杯中，加入1L待测水样，按38.1.5.1程序处理，制成固体粉末。38.1.5.2.2.2用上述粉末制成一系列厚度不等的测量源。在低本底α、β测量仪上用α道测量这一系列源的α活性，同时测量仪器的本底计数计算每一测量源的α净计数率。38.1.5.2.2.3以测得的α净计数率对测量源厚度(mg／cm2)作图，延长自吸收曲线的斜线段和水平线段，其交点所对应的厚度即为待测样品源的有效厚度。38.1.5.2.3测量装置计数效率的测定在低本底α、β测量仪上，按照测量样品源的几何条件用α道测量天然铀或钚-239参考源的α计数，同时测量仪器的本底计数，计算该仪器在2π方向的计数效率。38.1.6计算总α放射性（Ca，Bq／L）＝[6.67×10-2W(Nx–N0)]/（Yη2πVδS）....(75)式中：W───浓缩水样后制得的固体物质的重量，mg；     Nx───样品源的α计数率，cpm；      N0───测量装置的本底计数率，cpm；     Y───化学回收率，可取作100％； η2π───测量装置在2π方向的计数效率，％；     V───待测水样体积，L；    δ───样品源的有效厚度，mg／cm2；     S───样品源活性区面积，cm2；6.67×10-2───4/60，由样品源的α活性换算成构成样品源的固体物质比活度的系数，Bq／mg／dpm。样品源计数率的标准差按式（76）计算：　................................(76)　式中：Nx───样品源的总计数；     N0───测量装置本底总计数；     tx───样品源的计数时间，min；     t0───测量装置本底计数时间，min。38.2比较测量法比较测量法是通过待测样品源与含有已知量标准物质的标准源在相同条件下的比较测量，计算水样中放射性浓度的测量方法。所谓相同条件，除要求制备样品源和标准源的待测水样体积相同、测量时几何条件一致外，还要求样品源与标准源具有相同的有效厚度，换句话说，要求构成样品源和标准源的固体物质化学组成相同，且标准物质的α粒子能量与样品源的α平均能量相近，否则会引起较大误差。应用范围、仪器、试剂、样品处理及样品源制备参阅直接测量法。38.2.1测量 38.2.1.1标准源制备准确吸取1ml铀标准溶液，放入2000ml烧杯中，加入与制备样品源同样体积的待测水样。其余步骤参阅直接测量法，制成标准源。38.2.1.2放射性测量在低本底α、β测量仪上，按相同的几何条件，用α道分别测量标准源和样品源的α活性，同时测量仪器的本底计数。38.2.2计算总α放射性（Ca，Bq／L）＝CsVsWx（Nx－N0）/[VWs（Ns－Nx）]...............(77)式中：Cs────铀标准溶液比活度，Bq／ml；     Vs────铀标准溶液体积，ml；     Ns────标准源的α计数率，cpm；     Nx────样品源的α计数率，cpm；     N0────测量装置的本底计数率，cpm；     Ws────浓缩含铀标准物质的水样后制得的固体物质重量，mg；     Wx────浓缩待测水样后制得的固体物质重量，mg；     V────待测水样体积，L。39总β放射性地面水中总β放射性一般低于0.3Bq/L，井水和地下水中浓度稍高。39.1薄样法39.1.1应用范围本法适用于测定生活饮用水及其水源水中总β放射性浓度。39.1.2原理β射线在固体物质中也有较强的自吸收作用。只有当测量源薄到一定程度，这种自吸收作用才可以忽略。测量源的与这一厚度相对应的重量叫“最大取样量”。由于使用这种方法时测量源必须薄到可以忽略其自吸收的程度，因此这种测量方法通常称为“薄样法”。在总β放射性测量中，这种方法使用较多。 39.1.3仪器39.1.3.1低本底α、β测量仪。39.1.3.2电热恒温干燥箱。39.1.3.3干燥器。39.1.4试剂39.1.4.1盐酸。39.1.4.2氯化钾：优级纯。39.1.5步骤39.1.5.1样品处理参阅第38章总α放射性。39.1.5.2测量39.1.5.2.1最大取样量测定39.1.5.2.1.1取一定量氯化钾放入玻璃研钵，研细转入瓷蒸发皿，放入电热恒温干燥箱，在120℃下烘30min，干燥器中冷至室温。39.1.5.2.1.2用上述氯化钾粉末制成一系列厚度不等的测量源，分别在低本底α、β测量仪上用β道测量，同时测量仪器的本底计数。计算不同厚度测量源的β净计数率。39.1.5.2.1.3以各测量源的β净计数率对取样量(mg)作图，曲线开始弯曲处所对应的取样量即为氯化钾标准源的最大取样量。39.1.5.2.1.4样品源的最大取样量可以参考上述方法实际测定，也可以粗略地直接引用氯化钾标准源的最大取样量。39.1.5.2.2标准源制备准确称取小于最大取样量的已经研磨和烘干的氯化钾粉末，均匀铺在样品盘内。氯化钾的比活度为1.47×10-2Bq/mg。39.1.5.2.3样品源制备准确称取小于最大取样量的由待测水样浓缩制成的固体粉末，均匀铺在样品盘内。39.1.5.2.4放射性测量 在低本底α、β测量仪上，按相同的几何条件，用β道分别测量标准源和样品源的β活性，同时测量仪器的本底计数。39.1.6计算总β放射性（Cβ，Bq／L）＝1.47×10-2WkWt（nx－n0）/[YVWx（nk－n0）] 式中：Wk───制备标准源的氯化钾重量，mg；        Wt───浓缩水样后制得的固体物质总重量，mg；        Wx───制备样品源的固体粉末重量,mg；         Y───化学回收率，可取作100％；         V───待测水样体积，L；        nk───标准源β计数率，cpm；        nx───样品源β计数率，cpm；        N0───测量装置本底计数率，cpm。附录A水质参考指标的检验方法（参考件）A.1氨氮水中氨氮可用纳氏比色法或酚盐法测定。酚盐法比纳氏法有较高的灵敏度。水样中的氨氮极不稳定，除加入适合的保存剂并且在冷藏条件下运输，还必需在最短时间内完成分析。A.1.1纳氏试剂分光光度法A.1.1.1应用范围A.1.1.1.1本法适用于测定生活饮用水及其水源水中氨氮含量。A.1.1.1.2水中常见的钙、镁、铁等离子能在测定过程中生成沉淀，可加入酒石酸钾钠掩蔽。水样中含有余氯时能与氨结合成氮胺，可用硫代硫酸钠脱氯。水中悬浮物质可用硫酸锌和氢氧化钠混凝沉淀除去。A.1.1.1.3硫化物、铜、醛等亦可引起溶液浑浊。脂肪胺、芳香胺、亚铁等可与碘化汞钾产生颜色。水中带有颜色的物质，亦能发生干扰。遇此情况，可采用蒸馏法去除。A.1.1.1.4本法最低检测量为1μg氨氮，若取50ml水样测定，则最低检测浓度为0.02mg／L。 A.1.1.2原理水中氨与纳氏试剂(K2HgI4)在碱性条件下生成黄至棕色的化合物(NH2Hg2OI)，其色度与氨氮含量成正比。A.1.1.3仪器A.1.1.3.1500ml全玻璃蒸馏器。A.1.1.3.250ml具塞比色管。A.1.1.3.3分光光度计。A.1.1.4试剂本法所有试剂均需用不含氨的纯水配制。无氨水可用一般纯水通过强酸性阳离子交换树脂或者加硫酸和高锰酸钾后重蒸馏制得。A.1.1.4.1氨氮标准贮备溶液：将氯化铵(NH4Cl)置于烘箱内，在105℃烘烤1h，冷却后称取3.8190g，溶于纯水中，定容至1000ml。此溶液1.00ml含1.00mg／L氨氮（N）。A.1.1.4.2氨氮标准溶液：（临用时配制）：吸取10.00ml氨氮贮备溶液(A.1.1.4.1)，用纯水定容到1000ml，此溶液1.00ml含10.0μg氨氮(N)。A.1.1.4.30.35％硫代硫酸钠溶液：称取0.35g硫代硫酸钠(Na2S2O3.5H2O)溶于纯水中，并稀释至100ml。此溶液0.4ml能除去200ml水样中有效氯1mg／L。使用时可按水样中余氯含量计算加入量。A.1.1.4.4磷酸盐缓冲溶液：称取7.15g无水磷酸二氢钾(KH2PO4)及34.4g磷酸氢二钾(K2HPO4或45.075gK2HPO4·3h2O)，溶于纯水中，并稀释至500ml。A.1.1.4.52％硼酸溶液：称取20g硼酸，溶于纯水中，并稀释至1000ml。A.1.1.4.610％硫酸锌溶液：称取10g硫酸锌(ZnSO4·7H2O)，溶于少量纯水中，并稀释至100ml。A.1.1.4.724％氢氧化钠溶液：称取24g氢氧化钠，溶于纯水中，并稀释至100ml。A.1.1.4.850％酒石酸钾钠溶液：称取50g酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O)溶于100ml纯水中，加热煮沸至不含氨为止，冷却后再用纯水补充至100ml。A.1.1.4.9纳氏试剂：称取100g碘化汞(HgI2)及70g碘化钾(KI)，溶于少量纯水中，将此溶液缓缓倾入已冷却的500ml32％氢氧化钠溶液中，并不停搅拌，然后再以纯水稀释至1000ml，贮于棕色瓶中，用橡皮塞塞紧，避光保存。本试剂有毒，应谨慎使用。 注：配制试剂时应注意勿使碘化钾过剩。过量的碘离子将影响有色络合物的生成，使发色变浅。贮存已久的纳氏试剂，使用前应先用已知量的氨氮标准溶液显色，并核对应有的吸光度；加入试剂后2h内不得出现浑浊，否则应重新配制。A.1.1.5步骤A.1.1.5.1水样预处理无色澄清的水样可直接测定，色度、浑浊度较高和含干扰物质较多的水样，需经过蒸馏或混凝沉淀等预处理步骤。A.1.1.5.1.1.蒸馏A.1.1.5.1.1.1取200ml纯水于全玻璃蒸馏器中，加入5ml磷酸盐缓冲液(A.1.1.4.4)及数粒玻璃珠.加热蒸馏，直至馏出液用纳氏试剂(A.1.1.4.9)检不出氨为止。A.1.1.5.1.1.2稍冷后倾出并弃去蒸馏瓶中残液，量取200ml水样(或取适量，加纯水稀释至200ml)于蒸馏瓶中。根据水中余氯含量，计算并加入0.35％硫代硫酸钠溶液脱氯。用稀氢氧化钠溶液调节水样至呈中性。A.1.1.5.1.1.3加入5ml磷酸盐缓冲液(A.1.1.4.4)，加热蒸馏。用200ml容量瓶为接收瓶，内装20ml硼酸溶液(A.1.1.4.5)作为吸收液。蒸馏器的冷凝管末端要插入吸收液中。待蒸出150ml左右，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏以清洗冷凝管。最后用纯水稀释到刻度，摇匀。供比色用。注：水中含钙量超过250mg／L，将与磷酸盐缓冲溶液反应，生成磷酸钙沉淀，并释放出氢离子，使溶液pH值低于7.4，影响氨的蒸馏。因此硬度高的水样应增加磷酸盐缓冲溶液用量，并用酸或碱调节pH值为7.4后，再行蒸馏。A.1.1.5.1.2混凝沉淀取200ml水样，加入2ml硫酸锌溶液(A.1.1.4.6)，混匀。加入0.8～1ml氢氧化钠溶液(A.1.1.4.7)，使pH值为10.5，静置数分钟，倾出上清液供比色用。经硫酸锌和氢氧化钠沉淀的水样，静置后一般均能澄清。如必需过滤时，应注意滤纸中的铵盐对水样的污染，必需预先将滤纸处理后再使用。A.1.1.5.2测定A.1.1.5.2.1取50.0ml澄清水样或经预处理的水样(如氨氮含量大于0.1mg，则取适量水样加纯水至50ml)于50ml比色管中。A.1.1.5.2.2另取50ml比色管10支，分别加入氨氮标准溶液(A.1.1.4.2)0、0.10、0.30、0.50、0.70、1.00、3.00、5.00、7.00及10.00ml，用纯水稀释至50ml。 A.1.1.5.2.3向水样及标准溶液管内分别加入1ml酒石酸钾钠溶液(A.1.1.4.8)(经蒸馏预处理过的水样，水样及标准管中均不加此试剂)，混匀，加1.0ml纳氏试剂(A.1.1.4.9)，混匀后放置10min，于420nm波长下，用1cm比色皿，以纯水作参比，测定吸光度；如氨氮含量低于30μg，改用3cm比色皿。低于10μg的氨氮可用目视比色。A.1.1.5.2.4绘制校准曲线，比曲线上查出样品管中氨氮含量，或目视比色记录水样中相当于氨氮标准的含量。A.1.1.6计算      C＝M/V...............................(A1)式中：C───水样中氨氮（N）的浓度，mg／L；        M───从校准曲线上查得的样品管中氨氮的含量（或相当于氨氮标准的含量），μg；        V───水样体积，ml。A.1.1.7精密度与准确度有65个实验室用本法测定含氨氮1.3mg／L的合成水样，其他离子浓度（mg／L）分别为：硝酸盐氮，1.59；正磷酸盐，0.154，测定氨氮的相对标准差为6.9％，相对误差为0。A.1.2酚盐分光光度法A.1.2.1应用范围A.1.2.1.1本法适用于无色、澄清的生活饮用水及其水源水中氨的直接测定。单纯的悬浮物可通过5μM滤膜过滤。干扰物较多的水样需经蒸馏后再行测定。A.1.2.1.2为防止氨氮在运输过程中的损失，于每升水样中加入0.8ml硫酸，并在4℃保存。如有可能，最好在采样时立即过滤，并加入试剂显色，这样结果更为准确。注：对于直接测定的水样，加硫酸固定时必需注意酸的用量。一般水样每升加0.8ml硫酸已足够；碱度大的水样可适当增加。应注意勿使过量，以免使加显色剂后pH值不能控制在10.5～11.5。A.1.2.1.3本法最低检测量为0.25μg，如取10ml水样按本法操作，最低检测浓度为0.025mg／L。A.1.2.2原理 氨在碱性溶液中与次氯酸盐生成一氯胺，在亚硝基铁氰化钠催化下与酚生成吲哚酚蓝染料，比色定量。一氯胺和吲哚酚蓝的形成均与溶液pH值有关。次氯酸与氨在pH7.5以上产要生成一氯胺，当pH降低到5～7和4.5以下，则分别生成二氯胺和三氯胺，在pH10.5～11.5之间，生成的一氯胺和吲哚酚蓝都较为稳定，且呈色最深。用直接法比色测定时，需加入柠檬酸防止水中钙、镁离子生成沉淀。A.1.2.3仪器A.1.2.3.110ml具塞比色管。A.1.2.3.2分光光度计。A.1.2.4试剂本法配制试剂及稀释水样均需用不含氨的纯水。A.1.2.4.1氨氮标准贮备液：同A.1.1.4.1。A.1.2.4.2氨氮标准溶液(临用时配制)：吸取5.00ml氨氮贮备溶液(A.1.2.4.1)于1000ml容量瓶中，加纯水稀释到刻度，此溶液1.00ml含5.00μg氨氮。A.1.2.4.3酚-乙醇溶液：称取62.5g精制过的苯酚(无色)，溶于45ml95％乙醇中，保存于冰箱中，如发现空白值增高，应重配。A.1.2.4.41％亚硝基铁氰化钠溶液：称取1g亚硝基铁氰化钠〔Na2Fe(CN)5·NO·2H2O，又名硝普钠〕，溶于少量纯水中，并稀释至100ml，贮存于冰箱中。如发现空白值增高，应重配。A.1.2.4.524％氢氧化钠溶液：称取120g氢氧化钠，溶于500ml纯水中，煮沸并蒸发至450ml，冷却后稀释到500ml。A.1.2.4.6柠檬酸钠溶液：称取200g柠檬酸钠(C6H5O7Na3·2H2O)溶于600ml纯水中。煮沸蒸发至450ml，冷却后加纯水稀释至500ml。A.1.2.4.7酚盐-柠檬酸盐试剂：将3.0ml亚硝基铁氰化钠溶液(A.1.2.4.4)，5.0ml酚-乙醇溶液(A.1.2.4.3)，6.5ml氢氧化钠溶液(A.1.2.4.5)及50ml柠檬酸钠溶液(A.1.2.4.6)加以混合。在冰箱中保存，可使用2～3天。A.1.2.4.8含氯缓冲溶液：称取12g无水碳酸钠(Na2CO3)及0.8g碳酸氢钠(NaHCO3)，溶于100ml纯水中。加入34ml3％次氯酸钠溶液(或安替福明)，并加纯水至200ml，放置1h后即可使用。本试剂1ml用纯水稀释到50ml，加入1g碘化钾及3滴浓硫酸，以淀粉溶液作指示剂，用0.025mol／L硫代硫酸钠溶液滴定生成的碘，应消耗5.6ml左右。如低于4.5ml应补加次氯酸钠溶液。A.1.2.4.7和A.1.2.4.8二种试剂混合后pH值的校正：加1.0ml酚盐-柠檬酸盐溶液(A.1.2.4.7)和0.4ml含氯缓冲溶液(A.1.2.4.8)于10ml纯水中，其pH值应在11.4～11.8之间，否则应在酚盐-柠檬酸盐溶液中再加入适量24％的氢氧化钠溶液(A.1.2.4.5)。A.1.2.5步骤 A.1.2.5.1试剂空白的制备：取10ml纯水，置于10ml具塞比色管中，加入0.4ml含氯缓冲溶液(A.1.2.4.8)，混匀，静置半小时，将存在于水中的微量氨氧化分解，然后加入1.0ml酚盐-柠檬酸盐溶液(A.1.2.4.7)，静置90min，测定吸不光度，即为不包括稀释水在内的试剂空白值。A.1.2.5.2标准系列的制备：分别吸取氨氮标准溶液(A.1.2.4.2)0、0.05、0.10、1.00、1.50及2.00ml于7支10ml具塞比色管中，加纯水至10ml刻度。A.1.2.5.3取10.0ml澄清水样或水样蒸馏液，于10ml具塞比色管中。注：用蒸馏法预处理水样时可按A.1.1.5.1.1操作，改用50ml0.02mol／L硫酸为吸收液。A.1.2.5.4向水样及标准管中各加入1.0ml酚盐-柠檬酸盐溶液(A.1.2.4.7)，立即加入0.4ml含氯缓冲溶液(A.1.2.4.8)，充分混匀。静置90min后，于630nm波长下，用1cm比色皿，以纯水作参比，测定吸光度。A.1.2.5.5绘制校准曲线，从曲线上查出样品管中氨氮的含量。A.1.2.6计算　C＝M/V.......................................(A2)　式中：C───水样中氨氮（N）的浓度，mg／L；M───从校准曲线上查得的样品管中氨氮的含量，μg；V───水样体积，ml。A.2亚硝酸盐氮水中亚硝酸盐氮是标志水体被有机物污染的指标之一。它是含氮化合物分解的中间产物，不稳定，易氧化成硝酸盐，也可被还原成氨。它的含量与硝酸盐和氨的含量结合考虑，可推测水体污染程度及净化能力。A.2.1重氮化偶合分光光度法A.2.1.1应用范围A.2.1.1.1本法适用于测定生活饮用水及其水源水中亚硝酸盐氮。A.2.1.1.2水中三氯胺产生红色干扰。三价铁、铅等离子可产生沉淀，引起干扰。二价铜离子起催化作用，可分解重氮盐，因而使结果偏低。有色离子有干扰作用，也不应存在。 注：试剂加入的次序改为先加盐酸N－（1－萘基）－乙烯二胺，后加对氨基苯磺酰胺，可稍减低三氯胺产生的红色干扰。但三氯胺浓度大时仍能产生橙色。A.2.1.1.3本法最低检测量为0.05μg亚硝酸盐氮，若取50ml水样测定，则最低检测浓度为0.001mg／L。A.2.1.2原理在pH1.7以下，水中亚硝酸盐与对氨基苯磺酰胺起重氮作用，再与盐酸N-(1-萘基)-乙烯二胺产生偶合反应，生成紫红色的偶氮染料，比色定量。A.2.1.3仪器A.2.1.3.150ml具塞比色管。A.2.1.3.2分光光度计。A.2.1.4试剂A.2.1.4.1亚硝酸盐氮标准贮备溶液：称取0.2463g在干燥器内放置24h的亚硝酸钠(NaNO2)。溶于纯水中，并定容至1000ml。每升内加2ml氯仿保存。此溶液1.00ml含50.0μg亚硝酸盐氮。A.2.1.4.2亚硝酸盐氮标准溶液：取10.00ml亚硝酸盐氮贮备溶液(A.2.1.4.1)，用纯水稀释至500ml，再从中吸取出10.00ml，用纯水定容100ml。1.00ml含0.10μg亚硝酸盐氮。A.2.1.4.3氢氧化铝悬浮液：同18.1.3.4。A.2.1.4.41％对氨基苯磺酰胺溶液：同29.2.4.3。A.2.1.4.50.1％盐酸N-(1-萘基)-乙烯二胺溶液：同29.2.4.4。A.2.1.5步骤A.2.1.5.1若水样浑浊或色度较深，可先取100ml，加入2ml氢氧化铝悬浮液(A.2.1.4.3)，搅拌后静置数分钟，过滤。A.2.1.5.2先将水样或经处理后的水样，用酸或碱调节至中性，取50.0ml，置于比色管中。A.2.1.5.3另取50ml比色管8支，分别加入亚硝酸盐氮标准溶液(A.2.1.4.2)0、0.50、1.00、2.50、5.00、7.50、10.00及12.50ml，用纯水稀释至50ml。A.2.1.5.4向水样及标准色列管中分别加入1ml对氨基苯磺酰胺溶液(A.2.1.4.4)，摇匀后放置2～8min。加入1.0ml盐酸N-(1-萘基)-乙烯二胺溶液(A.2.1.4.5)，立即混匀。 A.2.1.5.5于540nm波长下，用1cm比色皿以纯水作参比，大10min至2h内，于分光光度计上测定吸光度。如亚硝酸盐氮浓度低于4μg／L时，改用3cm比色皿。A.2.1.5.6绘制校准曲线，从曲线上查出水样管中亚硝酸盐氮含量。A.2.1.6计算            C＝M/V......................................(A3)式中：C───水样中亚硝酸盐氮（N）浓度，mg／L；      M───从校准曲线上查得样品管中亚硝酸盐氮含量，μg；      V───水样体积，ml。A.3耗氧量耗氧量是1L水中还原性物质在一定条件下被氧化时所消耗的氧毫克数。不同条件下所测得的耗氧量值不同，因此必须严格控制反应条件。同样条件下所得耗氧量值才有可比性，因此报告结果时应注明测定方法。饮用水耗氧量的测定方法主要是酸性及碱性高锰酸钾法。水样中氯化物含量低时用前法，含量高时用后法。A.3.1酸性高锰酸钾滴定法A.3.1.1适用范围A.3.1.1.1本法适用于测定氯化物浓度低于300mg／L饮用水的耗氧量。A.3.1.1.2本法最低检测浓度为0.05mg／L，最高可测到5.0mg／L。A.3.1.2原理高锰酸钾在酸性溶液中将还原性物质氧化，过量的高锰酸钾用草酸否定还原。根据消耗的高锰酸钾量折合成氧表示之。A.3.1.3试剂A.3.1.3.11＋3硫酸溶液：将1份浓硫酸加入3份纯水中，煮沸。滴加高锰酸钾溶液至溶液保持微红色。A.3.1.3.20.1000N草酸钠溶液：称取6.701g草酸钠(Na2C2O4)，溶于少量纯水中，并定容至1000ml，置暗处保存。 A.3.1.3.30.1000N高锰酸钾溶液：称取3.3g高锰酸钾(KMnO4)，溶于少量纯水中，并稀释至1000ml。煮沸15min，静置2日以上。然后用玻璃砂芯漏斗过滤或用虹吸法将上部溶液移入棕色瓶中。置暗处保存并按下述方法标定浓度：A.3.1.3.3.1吸取25.00ml草酸钠溶液(A.3.1.3.2)于500ml三角瓶中，加入225ml新煮沸放冷的纯水及10ml浓硫酸。A.3.1.3.3.2迅速自滴定管中加入约24ml高锰酸钾溶液，待褪色后加热至70～80℃，再继续滴定至溶液呈微红色并保持30S不褪。当滴定终了时，溶液温度不低于55℃记录高锰酸钾溶液用量。       N＝0.1000×25.00/V.............................(A4)式中：N───高锰酸钾溶液的当量浓度；      V───高锰酸钾溶液的用量，ml。A.3.1.3.3.4校正高锰酸钾溶液浓度为0.1000N。A.3.1.3.40.0100N高锰酸钾溶液：将0.1000N高锰酸钾溶液准确稀释10倍。A.3.1.3.50.0100N草酸钠溶液：将0.1000N草酸钠溶液准确稀释10倍。A.3.1.4步骤A.3.1.4.1测定前须预先处理三角瓶：向250ml三角瓶内加入50ml纯水，再加入1ml1＋3硫酸(A.3.1.3.1)及少量高锰酸钾溶液(A.3.1.3.4)。加热煮沸数分钟，取下三角瓶用草酸钠溶液(A.3.1.3.5)滴定至微红色，将溶液倾出。A.3.1.4.2取100ml充分混匀的水样(若水样中有机物含量较高，可取适量水样以纯水稀释至100ml)，置于上述处理过的三角瓶中。加入5ml1＋3硫酸溶液(A.3.1.3.1)。用滴定管加入10.00ml0.0100N高锰酸钾溶液(A.3.1.3.4)。A.3.1.4.3将三角瓶放入沸腾的水浴内，准确放置30min。如加热过程中红色明显减退，须将水样稀释重做。A.3.1.4.4取下三角瓶，趁热加入10.00ml0.0100N草酸钠溶液(A.3.1.3.5)，充分振摇，使红褪尽。A.3.1.4.5再于白色背景上，自滴定管加入0.0100N高锰酸钾溶液(A.3.1.3.4)，至溶液呈微红色即为终点。记录用量V1(ml)。A.3.1.4.6向滴定终点的水样中，趁热(70～80℃)加入10.00ml0.0100N草酸钠溶液(A.3.1.3.5)。立即用0.0100N高锰酸钾溶液(A.3.1.3.4)滴定至微红色，记录用量V2(ml)。如高锰酸钾溶液浓度为准确的0.0100N，滴定时用量应为10.00ml，否则可求一校正系数：          K＝10/V2................................(A5)A.3.1.4.7如水样用纯水稀释，则另取100ml纯水，同上述步骤滴定，记录高锰酸钾溶液消耗量（V0）。A.3.1.5计算耗氧量（O2，mg／L）＝〔(10＋V1)K－10〕×0.08×1000/100                               ＝〔(10＋V1)K－10〕×0.8..........................(A6)如水样用纯水稀释,则采用下列公式计算水样的耗氧量：耗氧量(O2，mg／L)＝〔(10＋V1)K－10〕-〔(10＋V0)K－10〕R｝×0.08×1000/V3式中：R───稀释水样时，纯水在100ml体积内所占的比例。例如25ml水样用纯水稀释至100ml，则                     R＝(100–25)/100＝0.75V1，K，V0分别见步骤A.3.1.4.6及A.3.1.4.7；V3───水样体积，ml。A.3.2碱性高锰酸钾滴定法A.3.2.1应用范围A.3.2.1.1本法适用于氯化物在300mg／L以上的水样。A.3.2.1.2当采用100ml水样测定时，本法的最低及最高检测浓度同A.3.1法。A.3.2.2原理高锰酸钾在碱性溶液中将还原性物质氧化，过量的高锰酸钾在碱性溶液中用草酸钠滴定。A.3.2.3试剂A.3.2.3.10.0100N草酸钠溶液：同A.3.1.3.5。A.3.2.3.20.0100N高锰酸钾溶液：同A.3.1.3.4。A.3.1.3.31＋3硫酸溶液：同A.3.1.3.1。A.3.1.3.450％氢氧化钠溶液：称取50g氢氧化钠(NaOH)，溶于纯水中，稀释至100ml。 A.3.2.4步骤A.3.2.4.1于250ml处理过的三角瓶内(处理方法见A.3.1.4.1)，加入100ml混匀水样(或适量水样加纯水稀释至100ml)，加入0.5ml50％氢氧化钠溶液(A.3.2.3.4)及10.00ml0.0100N高锰酸钾溶液(A.3.2.3.2)。A.3.2.4.2于沸腾水浴中加热准确30min。A.3.2.4.3取下三角瓶，趁热加入5ml1＋3硫酸溶液(A.3.2.3.3)及10.00ml0.0100N草酸钠溶液(A.3.2.3.1)，振摇均匀至红色褪尽。A.3.2.4.4自滴定管滴加0.0100N高锰酸钾溶液(A.3.2.3.2)至淡红色，即为终点。记录用量V1(ml)。A.3.2.4.5按A.3.1.4.6求高锰酸钾溶液的校正系数K。A.3.2.4.6如水样需经纯水稀释后测定，按A.3.1.4.7求100ml纯水的耗氧量，记录高锰酸钾溶液消耗量V0(ml)。A.3.2.5计算同A.3.1法。A.4碘化物碘在天然水中含量一般在微克／升级。A.4.1硫酸高铈催化分光光度法A.4.1.1应用范围A.4.1.1.1低浓度范围的测定方法适用于碘化物浓度在1～10μg／L的水样。高浓度范围的方法适用于含碘化物10～100μg／L的水样。A.4.1.1.2银及汞离子可抑制碘的催化能力，氯离与碘离子有类似的催化作用，通过加入大量氯离子可以抑制以上干扰。A.4.1.1.3温度及反应时间对本法影响极大，因此操作条件应按规定严格控制。A.4.1.1.4本法最低检测量为0.01μg，若取10ml水样测定，其最低检测浓度为1μg／L。A.4.1.2原理在酸性条件下，亚砷酸与硫酸高铈发生很缓慢的氧化还原反应。 当有碘离子存在时，由于碘的催化作用使反应加速进行。碘离子含量越高，反应速度越快，所剩余的高铈离子越少。利用亚铁离子与剩余的高铈离子反应来终止砷－铈的氧化还原反应。所生成的高铁离子与硫氰酸钾反应进行比色分析，从而测定碘化物的含量。A.4.1.3仪器A.4.1.3.1恒温水浴，30±0.5℃。A.4.1.3.2秒表。A.4.1.3.3分光光度计。A.4.1.3.425ml具塞比色管：临用前洗净，并注意防止铁的污染。A.4.1.4试剂：本法所用试剂均不得含有碘。A.4.1.4.1无碘纯水：将普通蒸馏水按每升水加2g氢氧化钠再次蒸馏。本法所用全部纯水均为无碘纯水。亦可采用去离子水。A.4.1.4.2碘化物标准溶液：称取0.1308g在硅胶干燥器中放置24h的碘化钾，溶于纯水并定容至1000ml，配制成每毫升含100μg碘化物的贮备液。临用前依次稀释成1.00ml含1.00μg碘化物及1.00ml含0.01μg碘化物的标准溶液。A.4.1.4.3氯化钠溶液：称取26g在700℃灼烧2h的优级纯氯化钠(NaCl)，溶于纯水并稀释至100ml。A.4.1.4.40.1N亚砷酸溶液：称取4.946g三氧化二砷(As2O3)加500ml纯水，10滴浓硫酸(优级纯)，加热至三氧化二砷溶解。用纯水稀释至1000ml。如三氧化二砷纯度不够可按下法纯化：将三氧化二砷磨细，加入重蒸馏乙醇25ml，用玻棒搅匀，弃去上部乙醇液。再加入乙醇反复洗涤结晶10～15次。最后于80℃烘干，即可使用。A.4.1.4.51＋3硫酸：取125ml浓硫酸(优纯级)，徐徐加入375ml纯水中并稀释至500ml。A.4.1.4.60.02N硫酸铈或硫酸铈铵溶液：称取8.086g硫酸铈〔Ce(SO4)2·4H2O〕或13.37g硫酸铈铵〔Ce(SO4)2·2(NH4)2SO4·4H2O〕溶于500ml纯水中，加浓硫酸(优纯级)44ml，加纯水稀释至1000ml。A.4.1.4.71.5％硫酸亚铁铵溶液：称取1.5g硫酸亚铁铵(优级纯)〔FeSO4·(NH4)2SO4·6H2O〕溶于纯水，加入2.5ml1＋3硫酸(A.4.1.4.5)，并用纯水稀释至100ml。临用前配制。A.4.1.4.84.0％硫氰酸钾溶液：称取4.00g硫氰酸钾(KSCN)溶于纯水，并稀释至100ml。A.4.1.5步骤A.4.1.5.1低浓度范围(1.0～10μg／L) A.4.1.5.1.1按表A1配制标准系列、水样及A、B管，并按表A1量向各管加入试剂。摇匀后各管放在30±0.0℃恒温水浴中10min使温度达到平衡。表A1碘化物测定各管的试剂加入量　管号标准碘液0.01μg/ml水样ml纯水ml26％氯化钠ml0.1亚砷酸ml1＋3硫酸ml标准管1标准管2标准管3标准管4标准管5标准管6样品B管A管1.003.005.007.0010.00000000000010.010.009.07.05.03.0010.0000.510.51.01.01.01.01.01.01.01.01.00.50.50.50.50.50.50.5001.01.01.01.01.01.01.01.01.0　A.4.1.5.1.2按下秒表计时，依顺序向各管加0.50ml硫酸铈溶液(A.4.1.4.6)每管相隔30S，加入试剂后即加塞迅速摇匀，放回水浴中保温。A.4.1.5.1.3在水浴中放置20±0.1min后依顺序向各管加1.00ml硫酸亚铁铵溶液(A.4.1.4.7)，每管相隔30S(即每管从加硫酸铈溶液到加硫酸亚铁铵溶液的时间均为20±0.1min)。每加一试剂后，立即加塞摇匀迅速并放回水浴中。A.4.1.5.1.420±0.1min后依顺序向各管加1.00ml硫氰酸钾溶液(A.4.1.4.8)，每管相隔30S于室温放置45min，用分光光度计，于510nm波长下，用1cm比色皿，以纯水用参比，测定吸光度。碘离子浓度越高，吸光度越低，但所制备的校准曲线不呈线性，略向下弯曲。A.4.1.5.2高浓度范围(10～100μg／L) 高浓度范围校准曲线，所用碘化钾标准溶液为1.0ml含0.10μg碘化物。恒温水浴温度为20±0.5℃，反应时间为8min，每管间隔30S，不必测定A、B管。其余操作同上。A.4.1.6计算低浓度范围：当A管吸光度大于B管时，水样所得吸光度应加（A－B）。当A小于B时，水样所得吸光度应减（B－A）。将校正后的吸光度从仪准曲线上查出碘化物微克数，按式计算：     C＝M/V×1000............................(A8)式中：C───水样中碘化物（I-）浓度，μg／L；   M───从校准曲线查得样品管中碘化物含量，μg；   V───水样体积，ml。高浓度范围：将测得吸光度直接从校准曲线上查出碘化物的微克数，再按上述公式计算水样中碘化物的浓度。在测定低浓度范围碘化物水样时应经过A、B管的校正，以清除水样中氧化还原物质对反应的干扰。当A管吸光度大于B时，说明水样中有还原性物质，还原了一部分高铈离子，或所生成的高铁离子，使比色液变浅，因此，应将水样测得的吸光度加上（A－B），以校正还原物质造成的误差。当B管吸光度大于A管时，水样中有氧化性物质，致使低铁还原剂氧化为高铁离子，比色液加深，因此应将水样所测得吸光度减去（B－A）。A.5漂白粉中有效氯A.5.1碘量法A.5.1.1原理漂白粉在的有效氯在酸性溶液中与碘化钾反应，释放出的碘，用硫代硫酸钠标准溶液滴定。从硫代硫酸钠溶液的用量计算出漂白粉中的有效氯含量。A.5.1.2仪器A.5.1.2.1250ml碘量瓶。A.5.1.2.2100ml烧杯。A.5.1.2.3250ml容量瓶。 A.5.1.3试剂A.5.1.3.10.1000N硫代硫酸钠标准溶液：配制和标定方法见15.1.4.3。A.5.1.3.2淀粉指示剂：见15.1.4.10。A.5.1.3.3碘化钾。A.5.1.3.4冰乙酸。A.5.1.4步骤A.5.1.4.1将漂白粉置于称量瓶中，用减量法称出约2g(准确至小数点后两位，漂粉精准确称取1g)，置于100ml烧杯中。A.5.1.4.2加入少量纯水，用玻璃棒将漂白粉调成糊状。再加适量纯水使成悬浮液，倾入250ml容量瓶中。用纯水冲洗烧杯3次，将全部洗液倾入容量瓶中。加纯水至刻度，不断振荡容量瓶，使混合均匀。A.5.1.4.3在250ml碘量瓶中，加入1g碘化钾，再加75ml纯水摇动碘量瓶，使碘化钾溶解。然后加入2ml冰乙酸(A.5.1.3.4)A.5.1.4.4从容量瓶中吸出25.0ml漂白粉悬浮液，注入碘量瓶中，混匀。于暗处静置5min。A.5.1.4.5用硫代硫酸钠标准溶液(A.5.1.3.1)滴定碘量瓶中释放出的碘，至淡黄色时加入1ml淀粉溶液(A.5.1.3.2)，继续滴至蓝色刚消失。A.5.1.5计算C＝[V×N×(71.91/2000)×100]/[W×(25/250)]＝V×N×35.5/W................................(A9)　式中：C───漂白粉的有效氯含量（Cl2），％（W／W）；     V───滴定时硫代硫酸钠标准溶液用量，ml；     W───漂白粉重量，g；     N───硫代硫酸钠标准溶液的当量浓度。附录B革兰氏染色法（参考件）革兰氏染色法 B.1染色液B.1.1结晶紫溶液:结晶紫乙醇饱和溶液(取结晶紫约4～8g，溶液于95％乙醇100ml中)20ml，1％草酸铵溶液80ml，将上列两溶液混合，过滤。结晶紫不可用龙胆紫代替。前者是纯品，后者不是单一成分，易出假阳性。结晶紫溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。B.1.2助染剂碘1g碘化钾2g蒸馏水300ml将碘与碘化钾先行混合，加入少许蒸馏水，充分振摇。待完全溶解后再加入其余的蒸馏水。当溶液由棕黄色变为淡黄色时即应弃去。为易于准备，可将上列碘与碘化钾溶于30ml蒸馏水中，用前稀释。B.1.3脱色剂95％乙醇B.1.4复染剂沙黄0.25g95％乙醇10ml蒸馏水90ml将沙黄溶于乙醇中，待完全溶解后加入蒸馏水。B.2染色步骤B.2.1将培养18～24h的培养物涂片，要涂得薄些。B.2.2将涂片在火焰上加温固定，待冷却后滴加结晶紫溶液，1min后水洗。B.2.3滴加助染剂，1min后水洗。B.2.4滴加脱色剂，摇动玻片，直至无紫色脱落为止(约20～30s)水洗。 B.2.5滴加复染剂，1min后水洗，晾干，镜检。呈紫色者为革兰氏阳性菌，红色者为阴性菌。说明:　　本标准由中华人民共和国卫生部提出。本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所、　中国预防医学科学院环境卫生与卫生工程研究所、湖北省卫生防疫站、北京市卫生防疫站、上海市卫生防疫站、江苏省卫生防疫站、辽宁省卫生防疫站、重庆市卫生防疫站、广东省职业病防治院、陕西省卫生防疫站、四川省卫生防疫站、天津市卫生防疫站、云南省卫生防疫站、甘肃省卫生防疫站、上海市自来水公司、北京市自来水公司、北京市环境保护监测中心、成都市卫生防疫站、北京市环境保护科学研究所、山东省卫生防疫站、山西省卫生防疫站、浙江省卫生防疫站、广西壮族自治区卫生防疫站、唐山市卫生防疫站、卫生部工业卫生实验所、哈尔滨市卫生防疫站负责起草。本标准主要起草人陈守建、张宏陶、庄丽、卢玉棋、徐幼云、孙淑庄、陈昌杰、潘长庆、魏宗源。'