中国药典2010年版紫外分光光度法讲义二

'第二节紫外分光光度计的检定 一.波长的准确度波长准确度的允许误差：1.双光束光栅型允许误差为±0.5nm2.单光束棱镜型350nm处±0.7nm，500nm处±2.0nm，700nm处±4·8nm。 波长准确度检定方法1.用低压汞灯检定:用于检定紫外可见分光光度计的汞灯谱波长：237.83、253.65、275.28、296.73、302.15、313.16、334.15、365.02、365.48、366.33、404.66（紫色）、435.83（蓝色）、546．07（绿色)、576．96（黄色）及579.07nm 2.用仪器固有的氘灯检定:486.02及656.10nm.3.用氧化钬玻璃检定:氧化钬玻璃在279.4，287.5，333.7，360.9，418.7，460.0，484.5，536.2及637.5nm波长处有尖锐的吸收峰。4.用高氯酸钛溶液检定 二.吸收度准确度精密称取在120℃干燥至恒重的基准重铬钾约60mg，置1000ml量瓶中，用硫酸液(0.005mol／L）溶解并稀释至1000ml，用配对的1cm石英池，以硫酸液（0．005mol／L）为空白，在235，257，313，350nm分别测定吸收度，然后换算成百分吸收系数，测得值应符合下表中规定的允差范围（士1％）。国际药典规定的允差亦为士互％ 三.杂散光检查:在实际工作中，杂散光是所有分析工作者最应引起重视的技术指标。杂散光是非信号波长的光在检测器上产生的信号，是分析误差的主要来源，它影响测量浓度上限，同时也是影响动态范围的重要因素。 杂散光指标的意义 检查方法：按下表的试剂和浓度，配成水溶液，置1cm石英池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。 分辨率、基线平直度、稳定度、绝缘电阻等项检定，按中华人民共和国国家计量检定规程JJG682－90《双光束紫外可见分光光度计检定规程》执行，并应符合有关项下的规定。日常常规测定主要是对以上两项时常检查。 第三节样品测定操作方法一.吸收系数测定（性状项下）:按各该品种项下规定的方法配制供试品溶液，在规定的波长测定其吸收度，并计算吸收系数，应符合规定范围。 二.鉴别及检查:按各该品种项下的规定，测定供试品溶液在有关波长处的最大及最小吸收，有的并须测定其各最大吸收峰值或最大吸收与最小吸收的比值，均应符合规定。 三.含量测定:1.对照品比较法:按各该品种项下规定的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的（100士10）％以内，用同一溶剂，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度。 2.吸收系数法按各该品种项下配制供试品溶液，在规定的波长及该波长士1nm处测定其吸收度，按各该品种在规定条件下给出的吸收系数计算含量。采用吸收系数法应对仪器进行校正后测定，如为测定新品种的吸收系数，需按“吸收系数测定法”的规定进行。 3.计算分光光度法采用计算分光光度法的品种，应严格按各该品种项下规定的方法进行，用本法时应注意：有一些吸收度是在供试品或其成分吸收曲线的上升或下降陡坡部处测定，影响精度的因素较多，故应仔细操作，尽量使测定供试品和对照品的条件一致，若该品种不用对照品，如维生素A测定法（见中国药典附录），则应在测定前对仪器作仔细的校正和检定 第四节注意事项1.试验中所用的量瓶，移液管均应经检定校正、洗净后使用。2.使用的石英吸收池必须洁净。用于盛装样品、参比及空白溶液的吸收池，当装入同一溶剂时，在规定波长测定吸收池的透光率，如透光率相差在0．3％以下者可配对使用，否则必须加以校正。 3.取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。装盛样品溶液以池体积的4／5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留溶剂，吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同。使用后用溶剂及水冲洗干净，晾干防尘保存，吸收池如污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸（3:1V/V）混合液稍加浸泡后，洗净备用。如用铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面．并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。 4.测定前应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附近是否符合要求，可用1cm石英吸收池盛溶剂以空气为空白（即参比光路中不放置任何物质）测定其吸收度，应符合下表规定。所用溶剂应不超过其截止使用波长。每次测定时应采用同一厂牌批号，混合均匀的1批溶剂。 5.称量应按药典规定要求。配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时所取溶积一般应不少于5ml。含量测定供试品应称取2份，如为对照品比较法，对照品一般也应称取2份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。作鉴别或检查可取样品1份。 6.供试品测试溶液的浓度，除各该品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸收度以在0.3～0.7之间为宜，吸收度读数在此范围误差较小，并应结合所用仪器吸收度线性范围，配制合适的读数浓度。 7.选用仪器的狭缝谱带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度值会偏低，狭缝宽度的选择应以减小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，对于中国药典紫外测定的大部分品种，可以使用2nm缝宽，但对某些品种如青霉素钾及钠的吸收度检查则需用1nm缝宽或更窄，否则其264nm的吸收度会偏低。 8.测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰±2nm处，再测几点的吸收度，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸收度最大的波长作为测定波长，除另有规定外吸收度最大波长应在该品种项下规定的波长±1nm以内，否则应考虑试样的同一性、纯度以及仪器波长的准确度。 第五节结果计算一.对照品比较法可根据供试品溶液及对照品溶液的吸收度与对照品溶液的浓度以正比法算出供试品溶液的浓度，再计算含量。A样品:A对照=C样品:C对照C样品=A样品×C对照/A对照式中A为吸收度值；C为测试液浓度（以mg／ml计）。 二.吸收系数法中国药典规定的吸收系数，系指E，即在指定波长时，光路长度为1cm，试样浓度换算为1％（g／ml）时的吸收度值，故应先求出被测样品的口值，再与规定的E值比较，可计算出供试样品的含量。 '