紫外分光光度法测定云南红豆杉枝叶中总黄酮的含量

'　　紫外分光光度法测定云南红豆杉枝叶中总黄酮的含量作者：孔繁晟严春艳贲永光李坤平罗佳波【摘要】　　目的建立云南红豆杉枝叶中总黄酮含量的测定方法。方法采用紫外分光光度法，检测波长为272nm。结果总黄酮检测浓度在12～28μg/ml（r=0.9992）范围内与吸光度线性关系良好，平均加样回收率为96.04%，RSD为2.7%。结论该方法用于云南红豆杉枝叶中总黄酮的含量测定，方法稳定，结果准确、可靠。【关键词】紫外分光光度法；红豆杉；总黄酮　　Abstract:ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationoftotalflavonoidsinbranchesandleavesofTaxusyunnanensis．MethodsTheassayedbyspectrophotometricmethod．ResultsThelineardetectionconcentrationrangeoftotalflavonoidsl（r=0.9992），averagerecoveryethodisaccurate，reliableandstableanditcanbeusedforthedeterminationoftotalflavonoidsinbranchesandleavesofTaxusYunnanensis.　　Keyetry；Taxus；Totalflavonoids 　　红豆杉(Taxus)属裸子植物紫杉纲红豆杉科(Taxaceae)的常绿乔木，共11种，分布于北半球，我国有4种和1个变种［1］。紫杉属植物中含有的主要抗癌活性成分是以紫杉醇为主的二萜类化合物。随着研究的不断深入，黄酮类化合物也显示出了良好的抗癌效果［2，3］。据报道，红豆杉中也有着多种黄酮类成分［4，5］，故研究红豆杉中的黄酮类成分对保护稀有树种红豆杉，提高其资源利用率有着积极意义，但有关红豆杉总黄酮含量测定目前尚未见准确报道。本研究用紫外分光光度法对红豆杉中的总黄酮进行测定，并进行了方法学的考察，以期为红豆杉中黄酮类化合物的开发和利用提供科学依据。　　1仪器与试药　　Agilent1100高效液相色谱仪；HPUV-8453型可见紫外分光光度计；SartoriusCp3245型天平；KQ-500DE型医用数控超声仪；DHG-9140A电热恒温鼓风干燥箱；LABOROTA4000旋转蒸发仪，LG10-2.4A离心机。　　金松双黄酮对照品（自制，HPLC纯度>95%）；甲醇为色谱纯。其余试剂均为分析纯。药材为云南红豆杉（TaxusyunnanensisChengetL.K.Fu）的枝叶采自云南大理云龙县，经南方医科大学生药学教研室鉴定。 　　2方法与结果　　2.1对照品溶液的配制金松双黄酮为红豆杉中生理活性较好的黄酮类成分，故以此作为总黄酮测定中的对照品较具有代表性。精密称取干燥至恒重的金松双黄酮2mg，置50ml容量瓶中，加甲醇30ml，超声振荡使溶解，放冷至室温，甲醇定容至刻度，摇匀，得浓度为40μg/ml的对照品储备液。　　2.2供试品溶液的配制准确称取红豆杉药材粉末1g，加石油醚25ml，超声提取30min，抽滤，重复提取1次,滤液弃去。药渣挥干石油醚残液,加甲醇25ml，超声提取30min，抽滤，重复两次，滤液合并浓缩,置10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。　　2.3最大吸收波长的选择取对照品溶液和提取溶液进行波长扫描（图1～2），对照品与供试品溶液在272nm附近处吸收较强，故选择272nm作为测定波长。　　图1对照品紫外扫描光谱（略）　　图2提取液紫外扫描光谱（略）　　2.4标准曲线的绘制精密量取金松双黄酮对照品溶液0.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0ml,分别置于10ml容量瓶中，甲醇定容至刻度。用紫外-可见分光光度计于272nm处测定吸光度值,以吸光度(A)对浓度(C)进行线性回归，得回归方程： 　　C=1.55+29.16A，r=0.9992，在12～28μg/ml范围内线性关系良好。　　2.5精密度实验取金松双黄酮对照品溶液5ml5份，在272nm处测吸光度，吸光度平均值为0.5766，RSD为0.82%，表明该仪器精密度良好。　　2.6重复性实验精密称取药材样品1g共5份，按照“2.2”项下条件平行实验,依法处理，在272nm处测定吸光度。结果，平均含量为5.14%，RSD=2.08%。结果表明，本方法重现性良好。　　2.7加样回收率实验称取已知含量的药材约0.2g共5份，于60℃干燥至恒重，精密称重，置50ml磨口锥形瓶中，加入金松双黄酮对照品10mg，按照“2.2”项依法处理，测定272nm处吸光值，以相应试剂为空白，按对照品的回归方程进行计算处理，回收率平均值为96.04%，RSD为2.7%。结果见表1。　　表1加样回收率实验结果（略）　　2.8稳定性实验取“2.5”项下5号样品，于0，10，30，60，90，120min，测定吸光值，平均值为0.5758，RSD为3.03%，表明样品在120min内稳定性良好。　　2.9测定结果取3个编号的红豆杉样品各3份，分别按“2.2” 项下的方法配制成供试品溶液，再各准确吸取0.3ml于25ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，272nm测定其中总黄酮含量。结果见表2。　　表2样品含量测定结果（略）　　3讨论　　3.1样品前处理方法选择为了准确测定样品，故对提取方法及提取时间分别进行了考察。实验结果表明，在所考察的回流提取法、超声提取法、连续回流提取法中,采用超声提取法对有效成分的提取效果最优。　　3.2对照品的选择经'