分光光度法测定龙头鱼中二甲胺的研究

'7．5％三氯乙酸溶液：7．59三氯乙酸用超纯水定容至lOOmL。铜铵试剂：209醋酸铵和0．29五水硫酸铜与30mL超纯水中：另取109氢氧化钠溶于25mL超纯水中，冷却，混合上述两种溶液，再加入20mL浓氨水，用超纯水定容至lOOmL，避光保存。5％-硫化碳苯溶液：5mL二硫化碳与lOOmL苯溶液混匀。30％冰醋酸溶液：30mL冰醋酸用超纯水定容至100mL。超纯水(18．2MfD由Mili．Q超纯水系统制得。1．3实验原理二甲胺在氨水的存在下，经过剧烈的摇动能和二硫化碳缩合生成二甲胺磺酸，该缩合物又能与醋酸二价铜离子反应生成溶于有机溶剂(苯)的琥珀色二甲胺磺酸铜盐【14】。溶液浓度与颜色强度的变化规律符合朗伯比尔定律，1．4标准曲线的配置准确吸取0．10、0．30、O．50、O．70、1．00、因此可用分光光度法测定。1．50mL1001ag／mL二甲胺标准溶液于50raL聚乙烯管内，用超纯水稀释至5．0mL，空白为5．0mL超纯水。加入1．00mL铜铵试剂，涡旋lmin。再加入10mL5％的二硫化碳苯溶液，50。C水浴加热2min，取出涡旋2min，然后继续加热2min，再取出涡旋2min。而后加入1．00mL30％冰醋酸溶液，充分混匀。5000r／min离心3min，使苯层和水层完全分离。将苯层移至另一干燥试管中，加入适量无水硫酸钠干燥。在434nm下测吸光值。1．5样品测定龙头鱼去头、去尾、去内脏后，搅匀。称取5．009样品于50mL离心管中，加入10mL7．5％三氯乙酸溶液，涡旋2min；5000r／min离心5min，取上清液；沉淀再用10mL7．5％---氯乙酸溶液提取一次，合并两次上清液，过0．45pm水膜，然后用超纯水定容至100mL，4"C保存。根据样品中二甲胺浓度，适量吸取样品溶液，加水至5．0mL，接下来的步骤同标准曲线的测定。最后通过标准曲线计算出二甲胺含量。样品中二甲胺含量的计算公式为：r—DxK以×mc：样品中二甲胺浓度(mg／kg)；D：从标准曲线上读出的二甲胺浓度(}lg)；巧：定容后的提取液体积(mL)；％：样品测定所取提取液体积(mL)。计算结果保留两位有效数字。2结果与讨论2．1分光光度法条件优化 2．1．1样品提取剂的选择采用7．5％的三氯乙酸提取海产品中的二甲胺，避免了蛋白质对测定的干扰‘151。实验表明，用7．5％的三氯乙酸对龙头鱼中的二甲胺进行两次提取，可获得较好的结果。2．1．2显色反应条件的优化二甲胺在氨水的存在下，经过剧烈的摇动能和二硫化碳缩合生成二甲胺磺酸，实验发现，在经过两次加热和涡旋后，反应比只经过一次加热涡旋充分，故本实验选择两次加热和涡旋后，再与醋酸溶液反应。为使苯层和下层水层更好地分离，采用5000r／min离心3min的方法，达到了较好的分层效果。2．1-3测定波长的选择选择两个不同浓度的二甲胺标准溶液，在420．450nm波长范围内测定吸光度，结果如图1所示。1．0000．8000．6000．4000．2000．000‘一^J-_一一-_-一叫—～一420422424426428430432434436438440442444446448450波长(rim)图1不同波长下二甲胺标准溶液的吸光值Fig．1AbsorbancesofDimethylaminestandardsolutionsatdifferentwavelengths从图l可以看出，两个浓度的标准溶液都在434nm处有最大吸光值，故本实验选择在434nm处测定吸光值。2．2方法的工作曲线、检出限和线性范围、精密度、准确度2．2．1方法的工作曲线根据1．4配置含量为10、30、50、70、100、150lag的二甲胺标准溶液，在434nm下测得吸光值分别为0．095、0．281、O．504、0．709、1．013、1．494。以二甲胺含量(1ag)为横坐标，吸光值A为纵坐标，绘制标准曲线，如图2所示。其线性方程为y=0．010Ix．0．0035，相关系数为0．9998。95道采签 0306090120150180浓度(1ig)图2二甲胺标准曲线Fig．2StandardcurveofDimeth)‘lamine2．2．2方法的检出限和线性范围检出限是指由特定的分析步骤能够合理地检测出的最小分析信号求得的最低浓度。本实验对试剂空白进行10次平行测定，计算空白标准偏差，确定二甲胺的检出限为1．5嵋。配制一系列不同浓度的二甲胺标准溶液，测定吸光值，结果表明二甲胺含量和吸光值在1．5．150}lg范围内呈良好的线性关系。2．2．3方法的精密度分别配置含方法上限150pg的10％、50％、90％且P15lag、75I_tg、135pg二甲胺的标准溶液，每个浓度测定7次，计算其相对标准偏差。由表l可知，该方法测得三种标准溶液的RSD值分别为3．52％、1．15％和0．854％。表1二甲胺精密度试验(n--7)Tab．1PrecisiontestofDimethylamine(n27)2．2．4方法的准确度分别往某冻藏龙头鱼样品中添加40mg／kg、80mg／kg、200mg／kg三个浓度的二甲胺，每个浓度水平重复3次实验，其回收率在87．6—95．6％之间，如表2所示。表2龙头鱼中添加二甲胺的回收率(n-3)Tab．2SpikedrecoveriesofDimethylamineinLeadingfish样品样品二甲胺含量加标浓度回收率％(n-3)(mg／kg)平均回收率％O6428642O1T1O《莓f米臣 龙头鱼241．8408020091．O87．691．389．193．095．692．091．194．090．790．693．62．3龙头鱼中二甲胺含量的分析本实验在Oh、24h、48h和72h对4℃条件下贮存的龙头鱼进行二甲胺含量的测定，其500400暴量300姜喜200I91000o24时间(h)4872值分别为123．1mg／kg、128．3mg／kg、308．7mg／kg和397．7mg／kg，如图3所示。图34"12条件下龙头鱼中二甲胺含量的变化Fig．3ChangesofDimethylamineconcentrationinLeadingfishundertheconditionof4。C可以看出，在0-72h贮存时间内，随着时问的延长，龙头鱼中二甲胺含量呈明显增大趋势。该结果为二甲胺的含量与水产品的新鲜程度有关这一说法提供了一定依据。3结论本文建立了龙头鱼中二甲胺的分光光度测定法。二甲胺在1．5．150I_tg的含量范围内呈良好的线性关系，线性方程为y=0．OlOlx．0．0035，相关系数为0．9998。该法的检出限为1．5I．tg。测得15}tg、75嵋、135I-tg三个标准溶液的RSD分别为3．52％、1．15％和0．854％，样品加标回收率在87．6．95．6％。该方法操作简单，精密度良好，准确度高，为水产品中二甲胺的检测提供了参考。龙头鱼中的二甲胺含量较高，且随冷藏时间的延长而增大。到72h时，含量由123．1mg／kg增加到397．7mg／kg。说明二甲胺的含量与水产品的新鲜程度有一定的相关性。参考文献：[1】陈国防，张维冰，尤进茂等．氯甲酸2_(9-咔唑)乙基酯柱前衍生化HPLC法用于环境水中脂肪胺测定【J】．分析测试学报，2004，23(1)：28-31．[2】VaiseyEB．Thenon-enzymicreductionoftrimethylamine-oxidetotrimethylamine，97 dimethy7lamineandformaldehyde[J]．CanadianJournalofBiochemistryandphysiology,1956，34(6)：1085—1086．【3】LundstromRC，CorreiaFF,VilhemKA．EnzymaticdimethylamineandformaldehydeProductioninmincedAmericanPlaiceandblackjackfloundermixedwitharedhakeTMAO—aseactivefraction[J]．FoodScience，1982，47：1305·1310．【4】StanleyDW,HultinHO．AmineandformaldehydeProductioninNorthAmericansquidandtheirrelationtoquality[J]．CanadianInstituteofFoodScienceandTechnology,984，17：157-162．【5】CastellCH，NealWE，DaleJ．ComparisonofchangesiTMAO、TMA、DMAntrimethylamine，Dimethy’iamineandextractableProteininicedandfrozengadoidfillet[J]．JournaloftheFisheriesResearchBoardofCanada,1973，30"1246—1248．【6】SpinelliJ,KouryB．Nonenzymicformationofdimethy’lamineindriedfisheryProducts[J]．JournalofAgriculturalandFoodChemistry,1979，27(5)：1104-l108．【7】BabbittJK，CrawfordDL，LawDK．Decompositionoftrimethylamine-oxideandchangesinProteinextractabilityduringfrozenstorageofmincedandintacthakemuscle[J]．JournalofAgriculturalandFoodChemistry,1972，20(5)：1052·1054．【8】JolyA，HuidobroA，TejadaM．Influenceoflipidsondimethylamineformationinmodelsystemsofhakekidneyduringfrozenstorage[J]．ZLebensmUntersForschA，1997，205：14-18．【9】SIDDIQIZM，PATHANIAD．Rapid，selectiveanddirectspectrophotometricdeterminationofaliphaticamineswithm-dinitrobenzene[J]．Talanta,2003．60：l197—1203．【10】ZHAOYCAILS．DeterminationofaliphaticaminesusingNsuccinimidylbenzoateasanewderivatizationreagentingaschromatographycombinedwithsolid-phasemicroextraction[J]．JournalofChromatographyA，2003，1021：175—181．【ll】LDPEZMR，ALVAREZMJGORDIERESAJM．Determinationofdimethylamineingroundwaterbyliquidchromatographyandprecolumnderivatizationwith9-Fluorenylmethylchloroformate[J]．JournalofChromatographyA，1996，721：231—239．【12】CHANGIH，LEECGLEEDS．Developmentofanautomatedmethodforsimultaneousdeterminationoflowmolecularweightaliphaticaminesandammoniainambientairbydiffusionscrubbercoupledtoionchromatography[J]．AnalChem，2003，75(22)：6141-6146．【13】TIMMM，JORGENSENBM．Simultaneousdeterminationofammonia,dimethylamine，trimethylamineandtrimethylamineoxideinfishextractsbycapillaryelectrophoresiswithindirectUV-detection[J]．FoodChemistry,2002，76：509-5l8．【14】DyerWJ,MounseyYA．AminesinfishmuscleII．Developmentoftrimeth)7iamineandotheramines．JoumaloftheFisheriesResearchBoardofCanada，1945，30，91-98．【15】贾佳，朱军莉，励建荣．气相色谱一氢火焰离子检测器检测海产品中的二甲胺【J】．食品科 DeterminationofdimethylamineinleadingfishbyspectrophotometryLINJing1WANGYang1HUANGFuyong1ZHENGChongying1SONGHongqiang21.ZhejiangProvincialFisheryQualityTestingCenter,Hangzhou310012,China2.ZhoushanFisheriesTestyCenter,Zhoushan316111,ChinaAbstract:ASpectrophotometrymethodwasdevelopedtostudytheextractionanddeterminationofdimethylamineinleadingfish.Sampleswereextractedwith7.5％trichloroaceticacid,generateddimethylaminesulfonatefromcondensationofcarbondisulfide,thecondensationproductreactedwithacetatedivalentcopperiontogenerateamberdimethylaminesulfonicacidcoppersaltwhichsolubledinorganicsolvent(benzene),thendeterminedtheabsorbanceat434nmwavelength.Theresultsshowedthatthelinearityofdimethylaminewasgoodovertheconcentrationrangeof1.5-150μgwithcorrelationcoefficientof0.9998,detectionlimitwasfoundtobe1.5-150μg.TheRSDvaluesofthreestandardsolutionsof15μg,75μg,135μgwere3.52％,1.15％and0.854％,respectively.Therecoverieswereintherangebetween87.6-95.6％.Keywords:dimethylamine;spectrophotometry;leadingfish'