GB541313-2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定.pdf

'中华人民共和国国家标准GB5413.13—2010前言食品安全国家标准本标准代替婴幼儿食品和乳品中维生素GB5413.13-1997《婴幼儿配方食品和乳粉维生素B6的测定》。B的测定本标准与GB5413.13-1997相比，主要变化如下：6——标准名称改为《婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定》；Nationalfoodsafetystandard——完善了维生素B6含量的计算。本标准附录A为资料性附录。DeterminationofvitaminB6infoodsforinfantsandyoungchildren,本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB5413-1985、GB5413.13-1997milkandmilkproducts。2010-03-26发布2010-06-01实施中华人民共和国卫生部发布 GB5413.13—2010前言本标准代替GB/T5413.13-1997《婴幼儿配方食品和乳粉维生素B6的测定》。本标准与GB/T5413.13-1997相比，主要变化如下：——标准名称改为《婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定》；——完善了维生素B6含量的计算。本标准附录A为资料性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB5413-1985、GB/T5413.13-1997。I GB5413.13—2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定1范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。3原理试样经热水提取等前处理后，经C18色谱柱分离，荧光检测器检测，外标法定量测定维生素B6（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）的含量。4试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1淀粉酶：酶活力≥1.5U/mg。4.2辛烷磺酸钠：优级纯。4.3冰乙酸：优级纯。4.4甲醇：色谱纯。4.5三乙胺：色谱纯。4.6盐酸溶液（5.0mol/L，0.1mol/L）。4.7氢氧化钠溶液（5.0mol/L，0.1mol/L）。4.8标准溶液4.8.1维生素B6（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）标准贮备液（1mg/mL）：称取0.05g（精确至0.0001g）吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺标准品，分别置于50mL容量瓶中，用水溶解定容。4.8.2维生素B6（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）混合标准中间液（20µg/mL）：分别准确吸取吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺标准贮备液（4.8.1）1mL至50mL容量瓶中，用水定容。4.8.3维生素B6（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）混合标准系列测定液：分别准确吸取维生素B6混合标准中间液（4.8.2）0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、5.0mL，至100mL容量瓶中，用水定容。该标准系列浓度分别为0.00μg/mL、0.20μg/mL、0.40μg/mL、0.60μg/mL、1.00μg/mL。临用前配制。5仪器和设备5.1超声波振荡器。1 GB5413.13—20105.2高效液相色谱仪，带荧光检测器。5.3天平：感量为0.1mg。5.4pH计：精度为0.01。5.5培养箱：30℃～80℃。6分析步骤6.1试样预处理6.1.1含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约5.0g（精确至0.0001g），加入约25mL45℃～50℃的水，或称取混合均匀液体试样约20.0g（精确至0.0001g）于150mL锥形瓶中。加入约0.5g淀粉酶（4.1），混匀后向锥形瓶中充氮，盖上瓶塞，置50℃～60℃培养箱内约30min。取出冷却至室温。6.1.2不含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约5.0g（精确至0.0001g），加入约25mL45℃～50℃的水，或称取混合均匀液体试样约20.0g（精确至0.0001g）于150mL锥形瓶中。混匀并充分溶解，静置5min～10min，冷却至室温。6.2待测液的制备6.2.1用盐酸溶液（4.6）调节试样溶液的pH值至1.7±0.1，放置约1min。再用氢氧化钠溶液（4.7）调节试样溶液的pH值至4.5±0.1。6.2.2将试样溶液转移至50mL容量瓶中，用水冲洗锥形瓶。洗液合并于50mL容量瓶中，用水定容至50mL。6.2.3把上述容量瓶放入超声波振荡器中，超声振荡约10min。6.2.4另取50mL三角瓶，上面放入三角漏斗和滤纸，把超声波振荡的试样溶液倒入其中，自然过滤。滤液再经0.45μm微孔滤膜加压过滤，用试管收集，即为试样待测液。6.3参考色谱条件色谱柱：C18柱（粒径5µm，150mm×4.6mm）或同等性能的色谱柱。流动相：甲醇（4.4）50mL，辛烷磺酸钠（4.2）2.0g，三乙胺（4.5）2.5mL，用水溶解并定容到1000mL后，用冰乙酸（4.3）调pH至3.0±0.1，再经0.45μm微孔滤膜加压过滤。流速：1.0mL/min。检测波长：激发波长293nm，发射波长395nm。进样量：10μL。6.4定量分析6.4.1标准曲线绘制将维生素B6混合标准系列测定液（4.8.3）依次进行色谱测定（其标准样品色谱图参见附录A中图A.1）。记录各组分的色谱峰面积或峰高，以峰面积或峰高为纵坐标，以标准测定液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。6.4.2试样测定将试样待测液（6.2.4）进行色谱测定。记录各组分色谱峰面积或峰高，根据标准曲线计算出试样待测液中维生素B6各组分的浓度ci。7分析结果的表述7.1试样中维生素B6各组分的含量的计算试样中维生素B6各组分的含量按式（1）计算：2 GB5413.13—2010c×V×100iX=………………………………………………………（1）im式中：Xi——试样中组分的含量，单位为微克每百克（μg/100g）；ci——试样待测液中维生素B6各组分的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；m——试样的质量，单位为克（g）；V——试样溶液的体积，单位为毫升（mL）。7.2试样中维生素B6的含量的计算试样中维生素B6的含量按式（2）计算：X=X+X×.1012+X×.1006…………………………………（2）醇醛胺式中：X——试样中维生素B6含量，单位为微克每百克（μg/100g）；X醇——试样中吡哆醇含量，单位为微克每百克（μg/100g）；X醛——试样中吡哆醛含量，单位为微克每百克（μg/100g）；X胺——试样中吡哆胺含量，单位为微克每百克（μg/100g）；1.012——吡哆醛的含量换算成吡哆醇的系数；1.006——吡哆胺的含量换算成吡哆醇的系数。注：试样中维生素B6含量以吡哆醇计。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。9其他本标准检出限为：吡哆醇1.5µg/100g、吡哆醛1.3µg/100g、吡哆胺1.6µg/100g。3 GB5413.13—2010附录A（资料性附录）维生素B6标准溶液的液相色谱图A.1维生素B6标准溶液的液相色谱图维生素B6标准溶液的液相色谱图见图A.1。40.00-10.54530.00-5.965-7.525吡哆胺20.00吡哆醛吡哆醇Fluorescence10.000.001.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.0016.0017.0018.0019.0020.00分钟图A.1维生素B6标准溶液的液相色谱图4'