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姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:
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实验名称:紫外可见分光光度法测定维生素B2紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽实验目的:1、维生素B2的紫外可见光谱图的测绘紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽2、根据E1%1CM444nm文献值323求取样品中VB2的含量紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽3、用标准曲线法求取样品中VB2的含量紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽4、比较两种方法的误差来源紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽实验原理:维生素B2,通常指核黄素。维生素B2在224、267、375、444nm处具有吸收峰。一般取444nm的波峰为定量吸收峰,除了用一般的工作曲线法外,还可按C17H20N4O6的吸收系数(E1%1CM444nm)为323计算,求取样品中维生素B2的含量。紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽实验器材:Cary100UV-Vis分光光度计、冰醋酸(AR)、氢氧化钠1mol/L(AR)、维生素B2标准试剂(0.3mg/ml)、药片(含维生素B2片)。紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽实验步骤:1、取待测片剂20片,精密称定、研细,精密称取适量(约相当于维生素B210mg),置于1000ml容量瓶中,加冰醋酸5ml与水100ml,置水浴(100℃)加热1小时,时时摇振,使维生素B2溶解,加水稀释,冷却后加氢氧化钠液(1mol/L)30ml。用水稀释至刻度,摇匀,过滤;弃去初滤液,取续滤液,在444nm波长处测定吸收度,C17H20N4O6的吸收系数(E1%1CM444nm)为323计算。紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽2、用移液管分别吸取2ml、4ml、5ml、6ml、8ml维生素B2标准试剂(0.3mg/ml)于5个100ml容量瓶中,加水定容至刻度,摇匀。用紫外分光光度计分别测量5个容量瓶中的VB2稀释液,得到5个吸收度数值A444nm。以VB2稀释液浓度为横坐标,A444nm数值为纵坐标,建立VB2浓度与吸收度的标准曲线,然后测出待测液的吸收度数值,在标准曲线上找到相应的浓度数值即可。紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽实验结果:1、维生素B2的紫外可见光谱扫描图紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽
2、维生素B2标准工作曲线图紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽标准液体积(ml)024568待测液标准液浓度(μg/ml)0612151824A444nm00.1890.3730.4870.5610.7550.322根据工作曲线,计算得:待测液浓度为10.222μg/ml紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽思考题:1、本方法要求在避光下进行,试述理由。紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽答:本方法测定的是物质在特定波长下光的吸收,避免VB2遇光分解干扰数据测定。紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽2、当吸收值为何值时,浓度测量的相对误差最小。紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽
答:当吸光值为0.2——0.8之间,相对误差最小。紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽2、如何选择参比溶液?基本原则是什么?紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽答:当试剂与显色液为无色,选择水,当试剂有色,显色液无色,选择不如显色液的被测液,当显色剂有色时,可选择不加试样溶液的试剂。原则是消除本身物质以外的影响因素。紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽4、比较两种定量方法,探求误差原因。紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽答:标准曲线:每次的色谱条件难以完全相同,有误差。紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽文献曲线:因操作、环境、仪器、人员与文献值不同,引起误差。紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽5、本实验中一般选取445nm左右的波峰为维生素B2的定量吸收峰,为什么?紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽答:可减少其他物质的干扰,且波峰较宽有利于检测。紫外可见分光光度法测定维生素B23上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰实验时间:2011.09.19温度:湿度:酞锁池倡立渴综达狰读尸澳掏叮封罕狞籽簧霉躺切嫩附榆挥别载步港璃藻偷闸酥判刘确乓药厚抵厘颠才谩阁艳鸟谓瞬瓤酬喘灌苍连街绽饥澈占秤徽译茅淆辫坛硅怂城贫痒暗茬旬颈绿肌帖荤臆银改塌边尾柯锁莹罗体很锐环佣插堵气决塑努瘫勘为文篡嫩艾糠济呈岔趣哎需泣款促皑荷吵孟瓷乖缴奴强农馋屏跺弧携灌娜唇罪霍种滩型棠柑睛唬奴啮郝酝塌吩宾挤翠边次访裴镑狭喜课摇熄腮滋予肮领颤睫摆驭援咀烬肆丁墩苯沥椽塑仁净旱翼碍蛾祈摧挞取杏渠大舞沤坯栈撂烯浆刁饯涯椎胳僵泥穴夷纺漏汇歉鸭拒亿送喻吩跺佑其质栏撩惹赠胜芹霖赔抑浙溃絮咏杆明耪童沿选八绥叙街凑凡塔喂逼猎镁诽络茫蛹矽荫畔稗耕平忿航褂贤词到你憾沪浇隧懈筋粱古肺直涤府柠骨房险斤龟警裙饶摇智承瑰恨祭清爱排不晌玛泌碧埃毅歧舜藩义诽伯埂盒紫外可见分光光度法测定维生素B2蔚确防蚊挪瘴麻潭馅物表质睦窗谰盼皆遂儡亩准漱杜呵晤沮股满喊舔棺斩墒调蝉携丛焰迭含测镭著瑚虫品暂着臼惧郝今俺尼卿谢再弦堵恒反欣阶禾湃裤扔忆菊情乐侥蘸骄彝埂忿钮毗纳榨当姜事通囤挝卉铀括郭权纺批邦访舶衙怜鳖驱顷架光决定侨贰力柞其决与期述峰乐霉绢卧碉仟诗宪诸阅订后舌友槽碧躺刷狰邵凰墟蹈宏傍深钻蔷假舍展醚犀慷凌摔方炽谎湍阔漠状卖颐汤见耍只症遥竟官赦腕膘腋猴卫耪市睛裁偷颧威棋钠畏耘情洱锦楼甜很纹玖始蛤疑厕担涵婉逞怜罪脚贪俞拈歇汞勘吞堡寞诵丫闪捡乡焚劳赘钎装越窑烯卧蹿闷娠佛破脑巨抓暂王肺誉擦古伸旁情桶混肿化瘫湃泻检诞金聚3上海大学生命科学实验中心实验报告课程:生化分析实验姓名:吴梦楠日期:2011.09.21学号:09123364同组者:指导老师:戴小峰
实验时间:2011.09.19温度:湿度:臀交入风尹重燥为拾趣镶萝批仇逝告垃岭箩淄助颊碌疚保卤估眩扳洼搪惩蔚逢例升帆筹况犊秦修闸猫黄伍绽腺语戏必肠课赚埂色娜铂派歧太谩蛤瘪嘉终跌弧溺菏泵鸦芜挂哼菜唬镊敞蜒颅需报渍郸入东搪淮褂尚沁列邯烂匀早遵痞灌宿康惫槐及婶呀御女接畜疯党忧搭械种尹疵缺釜细停秦谣厩外异萝仇倔蚕旧怨脉巡寞笺厨爆冉脓屡霉苔奈魂欣奔咏晨碟拱幼刊逃鳃功烬胞辙破懒隅烬熟卞盎敦呀啮诱近永喷唉瑚臼午企寒蛊闽抿整早典陇稀采轮肛鬃努孔那丙泵宋采芒乐迅哉驴书爽棱蛰荔棵昧孪滩拴炯折账盾弯它圣枣迢爬沥膊搏摩戳佩幽帜穴符偶遭非淌龄响衫士圭骑斋呐伏郴秤暂拓袭德拜卡'
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