大蒜多糖组分a总多糖含量的分光光度法测定论文

'　　大蒜多糖组分A总多糖含量的分光光度法测定论文余薇，查文良，梁惠敏，吴基良，刘彤云【摘要】目的对大蒜多糖组分A进行提取并测定其含量。方法采用0.5%草酸铵溶液提取、醇沉的方法分离纯化大蒜多糖组分A，以苯酚-硫酸显色法测定大蒜多糖组分A的含量。结果在2.0～15.0μg/ml内，浓度与吸光度呈良好线性关系。回归方程：A=0.0806C-0.0219(r=0.9934，n＝10).freelgarlicandthecontentined.MethodsPolysaccharidesAmoniumoxalateandethanolprecipitation,thecontentinedbyphenol-sulfuricacidunder485nm.ResultsFromtherangeof2.0-15.0μɡ/ml,theregarlicethodissimpleandaccurate.Key处无吸收，表明大蒜多糖组分A中无蛋白质成分，而在190nm处有多糖的特异性吸收峰。见图1。2.2试剂的配制2.2.1标准品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖10.0mg置100ml容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得浓度为100μg/ml的标准品溶液。 2.2.2供试品溶液的制备精密称取55℃干燥至恒重的大蒜多糖组分A10.0mg置100ml容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得浓度为100μg/ml的多糖供试品液。2.2.35%苯酚试剂的配制取苯酚100g，加铝片0．2g和NaHCO30.1g，蒸馏。收集180～182℃馏分，精密称取精制苯酚5.0g溶解后转至100ml容量瓶中定容，摇匀，得5%苯酚试剂。2.3检测波长的选择精确量取80μg/ml的葡萄糖溶液1.0ml，样品溶液1.0ml置干燥试管中，分别加入5%苯酚溶液1.0ml摇匀，然后加入浓H2SO45.0ml摇匀，另以1.0ml水作同上操作，作为空白液，于室温中放置5min，沸水浴中恒温15min，取出，冰水浴冷却至室温，在波长200～800nm之间扫描。结果供试品与标准品溶液在485nm波长处均有最大吸收，而空白溶液在此波长处无干扰，故选用485nm为检测波长。见图2～3。2.4标准曲线的绘制精密量取标准品溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0ml分别置11只试管中，各加蒸馏水至1.0ml，再加1.0ml5％苯酚溶液，摇匀后再加入5.0ml浓H2SO4，摇匀，室温放置5 min，沸水浴中恒温15min，取出，冰水浴冷却至室温，在485nm处，以蒸馏水管作为空白对照，测定各浓度标准液的吸光度，以糖浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标绘制标准曲线，计算得回归方程A=0.0806C-0.0219(r=0.9934，n＝10)，两者相关性较好。见图4。2.5换算因素的测定精确量取供试品溶液2.0ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度值。按下式计算换算因素f＝2.0078。f=l），D为供试品溶液的稀释倍数。2.6精密度实验随机取“标准曲线绘制”项中其中一支葡萄糖试管液，置于光度计中，反复测量该标准液的吸光度5次，结果RSD=0.21％。见表1。表1精密度实验（略）2.7稳定性实验精密量取50μg/ml多糖样品1.0ml，按测定标准曲线同样的方法每隔20min测定样品溶液吸光度，观察100min内吸光度的变化情况，算得吸光度的RSD=0.13％，结果表明样品溶液在100min内显色稳定。见表2。2.8重复性实验精密称取同一批次大蒜多糖组分A10mg各5份，分别置于5个100ml容量瓶中定容，精密量取100μg/ml多糖样品溶液5.0ml于10ml容量瓶中，稀释成50μ g/ml的样品溶液，各取1.0ml于5支干燥试管中,按测定标准曲线同样的方法操作,在485.0nm处分别测定其吸光度，算得其RSD=3.74％。表2稳定性实验（略）2.9多糖含量的计算精密称取多糖10.0mg，用蒸馏水溶解后定容到100ml，精密量取100μg/ml多糖溶液5ml至10ml容量瓶中稀释至50μg/ml的样品溶液。取样品液1.0ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度，算得平均糖含量为77.40%。见表3。表3多糖含量的计算（略）多糖含量(%)=(C·D·f)/l)；D为样品溶液的稀释倍数；f为换算因素；l于试管中，加入与样品浓度相近的葡萄糖对照品溶液1.0ml，按测定标准曲线同样的方法操作，算得样品的平均加样回收率为96.14％，RSD=0.06％,表明本方法准确度良好。3讨论多糖广泛存在于自然界，是多种中草药的有效成分之一，具有多种生物活性，本文运用醇沉法从大蒜中提取大蒜多糖组分A,并运用苯酚—硫酸比色法对其含量进行了测定，苯酚— 硫酸比色法为多糖含量测定的经典方法，本实验中该方法的原理是大蒜多糖在硫酸的作用下，先水解为单糖，单糖迅速脱水形成糖醛衍生物，糖醛衍生物再与苯酚缩合为有色化合物。该有色物质在485.0nm处有最大吸收,可在该波长处进行测定算得大蒜多糖的含量。结果表明，本法简单，显色稳定，灵敏度高，重复性好,回收率较高。本实验对大蒜多糖含量测定的各项指标均进行了详细考察,结果表明，上述提取及含量测定方法适用于大蒜多糖组分A,测得多糖的含量为77.40％，糖含量较高，有较高的开发价值。【'