紫外分光光度法测定补骨脂药材中总呋喃香豆素含量２

'　　紫外分光光度法测定补骨脂药材中总呋喃香豆素含量２作者：寿清耀，杨荣平，王宾豪，钟国跃，涂永勤，胡轶娟【关键词】补骨脂药材；,,总呋喃香豆素；,,紫外分光光度法　　摘要：目的建立紫外分光光度法测定补骨脂药材中总呋喃香豆素的含量。方法补骨脂药材粉末经索氏提取2h，过聚酰胺柱后，采用紫外分光光度法，检测波长为245nm对补骨脂药材中的总呋喃香豆素进行测定。结果采用该方法可准确测定补骨脂药材中总呋喃香豆素的含量，补骨脂素在1.008～10.08μl/ml范围内吸光度与浓度的线性关系良好，样品平均回收率为98.7%，精密度RSD为0.11%，重复性RSD为2.8%，稳定性RSD为0.75%（4h内）。结论该方法简单、准确，可用于补骨脂药材中总呋喃香豆素的含量测定。　　关键词：补骨脂药材；总呋喃香豆素；紫外分光光度法　　DeterminationoftheTotalFuranocoumarinsinFructusPsoraleaebyUVSpectrophotometry　　Abstract：ObjectiveToestablishaUV spectrophotometryfordeterminationofthetotalfuranocoumarinsinFructusProsraleae.MethodsThepoidecolumnchromatography;inedbyUVspectrophotometry,.ResultsThemethodhadgoodlinearrelationshipfrom1.008μl/mlto10.08μl/ml,andtherecoveryrateethodissimpleandaccurate,andcanbeusedfordeterminationofthetotalfuranocoumarinsinFructusPsoraleae.　　Keyarins；UVspectrophotometry　　补骨脂为豆科植物补骨脂PsoraleacorylifoliaL.的干燥成熟果实。补骨脂味辛，苦，归肾、脾经。具有温肾补阳、纳气、止泻之功效［1］。用于阳痿遗精，遗尿尿频，腰膝冷痛，肾虚作喘，五更泄泻；外用治白癜风、斑秃。呋喃香豆素类为补骨脂的主要活性物质，用于治疗 白癜风、多种妇科出血、鼻、牙龈出血及类血友病出血等症［2］；同时有一定的抗癌活性及对成骨细胞的增殖作用。由于补骨脂中呋喃香豆素类成分无酚羟基，而其他成分包括拟雌内酯类，补骨脂黄酮类及单萜酚类成分均有酚羟基，故采用聚酰胺柱色谱对补骨脂药材中的呋喃香豆素进行富集，以补骨脂素为对照品，建立了用紫外分光光度法测定总呋喃香豆素含量的方法。结果表明该方法简便、准确，可用于补骨脂药材中总呋喃香豆素含量测定。　　1仪器与试药　　UV1601型可见紫外分光光度计（日本岛津），Al30~60目聚酰胺，1×10cm），水洗脱至无色，再依次以30%,50%,70%乙醇各洗脱100ml，洗脱液进行紫外全波长扫描，图谱见图1~5。　　由上图可以看出，30%乙醇洗脱液的紫外扫描图最大吸收波长为245nm，与补骨脂素及异补骨脂素等呋喃香豆素的紫外扫描图基本一致；50%乙醇洗脱液显示为补骨脂酚的紫外吸收图；而70%洗脱液显示为黄酮及拟雌内酯类紫外吸收。　　图130%乙醇洗脱液(略)　　图250%乙醇洗脱液(略)　　图370%乙醇洗脱液(略)　　图4补骨脂素(略)　　图5异补骨脂素(略)　　2.1.3乙醇洗脱用量的考察将样品上聚酰胺柱，加水洗脱至无色，再加30%乙醇洗脱以10ml/min洗脱，每25ml为一流分，取1ml稀释至10ml，在245nm处测定吸光度。结果见表1。 　　表1样品30%乙醇洗脱液不同流分的紫外吸收(略)　　由上表可以看出，第10个流分所检测到的吸光度已很低，故样品上聚酰胺柱后，加水洗脱至无色，用30%乙醇以10ml/min洗脱250ml即得。　　2.1.4结论根据实验结果，最终确定补骨脂药材供试品制备方法为取补骨脂药材粉末0.5g（过三号筛），精密称定，置索式提取器中，加甲醇适量，加热回流提取2h，过滤，滤液加0.5g聚酰胺粉（30～60目）拌匀，挥干，上聚酰胺柱，以30%乙醇洗脱250ml。　　2.3对照品溶液的配置取补骨脂对照品12.6mg精密称定，加甲醇超声，定容至50ml，再精密吸取1ml，加甲醇定容至25ml即得标准品溶液。　　2.4标准曲线的绘制精密吸取上述对照品溶液1，3，5，7，10ml，加甲醇定容至10ml，于245nm处测定吸收度,.并以吸光度与对照品浓度进行回归,得标准曲线方程y=0.1321x+0.0088，r=0.9997(n=5)。实验表明补骨脂素在1.008～10.08μg/ml浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系。　　2.5精密度实验精密吸取上述对照品溶液1ml，加甲醇稀释至10ml，于245 nm处测定吸光度，连续测定5次，结果表明5次测定的RSD为0.11%，故仪器精密度良好。　　2.6稳定性实验将精密度考察项下对照品溶液于0，6，12，24，48h在245nm处测定吸光度，实验结果表明RSD为0.75%，对照品溶液在4h内稳定性良好。　　2.7重复性实验按照拟定的含量测定方法，取同一批药材5份，每份0.5g，分别制备样品，测定吸光度，并计算其含量，实验结果5个样品含量RSD为2.9%，表明本法重复性良好。　　2.8回收率实验取已知含量的补骨脂药材0.25g，精密称定，分别精密加入补骨脂素对照品溶液适量（3种不同水平，各2份），按供试品制备方法处理，进行含量测定，计算回收率。结果见表2。　　表2回收率实验(略)　　由表2可知，3种水平6次实验的加样回收率测定结果均在95%～105%之间，其平均值为98.7%，RSD为1.00%。　　2.9样品测定取6批补骨脂药材，每批0.5g（过三号筛选），按供试品制备方法制备，测定吸光度，根据标准曲线计算样品中总呋喃香豆素的含量。结果见表3。　　表36批补骨脂药材含量测定结果(略) 　　从表3可知，补骨脂药材中总呋喃香豆素的含量在1%左右，各个批次药材之间总呋喃香豆素的含量有较大的差异。　　3讨论　　补骨脂中总呋喃香豆素是补骨脂中的主要活性物质，补骨脂中呋喃香豆素没有酚羟基，在聚酰胺柱上的吸附能力较补骨脂中的其他成分如黄酮类、拟雌内酯类及单萜酚类为弱。根据这一特性，我们通过聚酰胺柱色谱对补骨脂药材中的呋喃香豆素进行了富集，并对乙醇洗脱的浓度与用量进行了考察。结果以药材提取液拌聚酰胺，上柱，水洗至无色，再以30%乙醇洗脱250ml作为供试品溶液；以补骨脂素为对照品绘制标准曲线测定样品中总呋喃香豆素含量，该方法灵敏度高，重复性好。根据拟定的方法，我们测定了6个不同批次药材中中呋喃香豆素的含量，发现各个批次药材含量有较大的差别，故有必要通过总呋喃香豆素来控制补骨脂药材的质量。　　参考'