紫外分光光度法测定川明参中总香豆素类成分含量

'　　紫外分光光度法测定川明参中总香豆素类成分含量作者：谌立巍刘静赵波李宏张梅【摘要】目的建立川明参药材中总香豆素含量测定方法。方法采用紫外分光光度法，以8羟基5甲氧基补骨脂素为对照品，检测波长为273nm。结果在1.53～7.65μg/ml质量浓度范围内，对照品8羟基5甲氧基补骨脂素的吸光度和浓度线性关系良好，r=0.9991。平均回收率为101.8%，RSD=2.37%（n=6）。结论该法简便，可靠，为有效控制川明参药材质量奠定了一定的基础。【关键词】川明参；总香豆素；紫外分光光度法；含量测定【Abstract】ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofthecontentoftotalcoumarininChuanminshenviloaceum.Methodsethoxypsoralenasthestandard,theCoumarininC.viloaceumbyUVspectrophotometry.ResultsTheabsorbencyandconcentrationof8hydroxy5methoxypsoralenhadagoodlinearrelationintherangeof1.53～7.65(g/ml(r=0.9991).Theaveragerecoveryrate ethodofcontentdeterminationissimpleandrepeatable.Ourresearchhaslaidafoundationforthequalityevaluationoncrudechuanminshen.【Keyinshenviloaceum；totalcoumarin；UVspectrophotometry;contentdetermination川明参为伞形科川明参属植物川明参(ChuanminshenviolaceumShehetShan)的干燥根，为我国特有单种属植物，是四川道地药材［1］。川明参具有润肺化痰、和胃、生津、解毒等功效，主治肺热咳嗽、热病伤阴，适用于病后补虚和强壮身体，为一药食同源植物，应用广泛。但对该药的质量控制仅《四川中药材标准》1987年版有简单的外观性状描述，2005年版中国药典尚未收载。本课题组成员在对川明参药效物质基础进行深入研究，确定了川明参祛痰止咳，滋阴强体药效活性部位（主要含各种香豆素类成分）基础上［23］，以课题组成员从川明参药材中分得的单体化合物为对照，采用紫外分光光度法建立了川明参药材中总香豆素含量测定方法。该法简便，可靠，为有效控制川明参药材质量奠定了基础。1实验部分1.1仪器与试药UV1100型紫外分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；电子 天平（SartoriusBP211D，十万分之一；SartoriusBP121S，万分之一）；8羟基5甲氧基补骨脂素（由本室制备，纯度>98%）；川明参药材采自四川苍溪、巴中、金堂、中江，由成都中医药大学郭平博士鉴定为伞形科川明参属植物川明参(ChuanminshenviolaceumShehetShan)的干燥根；其余试剂为分析纯。1.2方法与结果1.2.1样品溶液的制备取川明参药材（产地：四川中江）约0.5g置于100ml烧瓶中，加20ml甲醇回流提取两次，每次2h，合并滤液，水浴挥干。残渣用蒸馏水溶解后用乙醚萃取，乙醚萃取液定容至10ml，即得样品溶液。1.2.2对照品溶液的制备取8羟基5甲氧基补骨脂素对照品适量，精密称定，用乙醚溶解并定容，得到对照品溶液（0.051mg/ml）。1.2.3检测波长的选择取对照品溶液，样品溶液和空白试剂溶液，于200～400nm扫描，对照品溶液及供试品溶液均在273nm处有最大吸收（图1A,B），峰形变化平缓，且空白试剂无干扰，便于定量测定，故选择检测波长为273nm.1.2.4线性关系考察分别精密吸取浓度为0.051mg/ml的8羟基5甲氧基补骨脂素对照品溶液0.3，0.5，1，1.2，1.5于10ml量瓶中，乙醚定容至刻度，在273nm下测定不同浓度8羟基5 甲氧基补骨脂素的吸光度值A，以浓度(C)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标作图，得到回归方程：y=0.0869x+0.0038，r=0.9991.结果表明：在1.53～7.65μg/ml范围内，对照品8羟基5甲氧基补骨脂素的吸光度和浓度线性关系良好，见图2.图28羟基5甲氧基补骨脂素浓度和吸光度的关系Fig.2Therelationbetethoxypsoralen1.2.5精密度试验取上述川明参药材约0.5g，置于100ml烧瓶中，按1.2.1项下制备样品溶液，在273nm波长下测定其吸光度，重复测定6次，其吸光度值的RSD=0.35%，结果表明精密度良好。1.2.6稳定性实验取上述川明参药材约0.5g，置于100ml烧瓶中，按1.2.1项下制备样品溶液。在273nm波长下于0min、30min、60min、90min、120min、180min分别测定其吸光度值，RSD=2.16%，结果表明供试品溶液在3h内稳定性良好。1.2.7重复性实验称取上述川明参药材样品约0.5g共6份，按1.2.1项下制备样品溶液。在273nm波长下测定其吸光度并计算含量，RSD=3.63%，结果表明重复性良好。1.2.8加样回收试验精密称取已知含量的上述川明参药材样品约0.25g，精密加入14μg/ml8羟表1加样回收率实验结果基5甲氧基补骨脂素对照品溶液2.5 ml，按1.2.1项下制备样品溶液，计算得到8羟基5甲氧基补骨脂素的平均回收率为101.8%，RSD=2.37%.1.2.9样品测定取不同产地川明参药材样品，按照拟定的含量测定条件进行测定，计算各产地样品中总香豆素含量，结果见表2.表2川明参药材中总香豆素含量测定结果（n=3）2讨论2.1对样品溶液的制备本实验考察了以下方法①药材用甲醇提取后直接测定；②甲醇提取液挥干，残渣用蒸馏水溶解后分别用乙醚，正己烷萃取后进行测定；③甲醇提取液挥干，残渣用蒸馏水溶解后分别用乙醚、石油醚和乙酸乙酯萃取，萃取液挥干后用甲醇溶解后进行测定。结果表明采用甲醇提取液挥干，残渣用蒸馏水溶解，乙醚萃取后进行测定能满足定量分析要求。2.2本次实验中采用的四川苍溪产川明参药材样品是其作为保健品销售的药材，表面光洁白净，测定结果其中总香豆素含量较低，可能是因为药材前加工次数较多所致。2.3通过高效液相色谱质谱法分析了解到川明参药材中各种单体香豆素类成分含量均较低，故本实验采用紫外分光光度法测定川明参药材中总香豆素的含量。测定结果为川明参药材质量标准建立提供了实验依据。【参考'