实验93紫外分光光度法测定水果或蔬菜中的维生素C含量

'实验93紫外分光光度法测定水果（或蔬菜）中的维生素C含量93.1实验目的(1)掌握紫外分光光度计的工作原理及使用方法。(2)掌握水果（或蔬菜）中的维生素C含量的测定方法。 93.2实验原理紫外快速测定维生素C法，是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差，通过查标准曲线，即可计算样品中维生素C的含量。 （一）标准曲线的制作1．抗坏血酸标准溶液的配制：用分析天平准确称取抗坏血酸10mg，加2mL10%盐酸，加蒸馏水定容至100mL，混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100μg·mL-1。93.3操作步骤 2.标准曲线的绘制12345678标准抗坏血酸溶液加入体积/mL0.10.20.30.40.50.60.81.09.99.89.79.69.59.49.29.0总体积/mL10.010.010.010.010.010.010.010.0抗坏血酸溶液浓度/(μg·mL-1）1.02.03.04.05.06.08.010.0 3．消光值的测定：以蒸馏水为空白，在243nm处测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值，以抗坏血酸的含量（μg）为横坐标，以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。 （二）样品的测定1．样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.00g于研体中，加入2～5mL1%HCl，匀浆，转移到25mL容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过离心（10000g,10min）来消除。2．样品的测定：取0.1～0.2mL提取液，放入盛有0.2～0.4mL10%盐酸的10mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，在243nm处测定其消光值。3．待测碱处理液的制备：分别吸取0.1～0.2mL提取液，2mL蒸馏水和0.6～0.8mL1mol·L-1NaOH溶液依次放入10mL容量瓶中，混匀，15min后加入0.6～0.8mL10%HCl，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在243nm处测定其消光值。 4．由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线，即可计算出样品中维生素C的含量。5．也可直接以待测碱处理液为空白，测出待测液的消光值，通过查标准曲线，计算出样品的维生素C的含量。 93.4计算μ×V总维生素C的含量（μg/g）=————V1×W总式中：μ——从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量（μg）V1——测消光值时吸取样品溶液的体积（mL）V总——样品定容体积（mL）W总——称样重量（g） 93.5问题讨论（１）除了本实验中的方法外，抗坏血酸还有哪些测定方法? （1）除了本实验中的方法外，抗坏血酸还有哪些测定方法?答：一、氧化还原法1.直接碘量法2.2,6-二氯酚靛酚滴定法二、分光光度法1.紫外快速测定法2.2,4-二硝基苯肼法3.高铁还原法测定血浆中的抗坏血酸三、光电比浊法四、电化学法五、荧光分析法1.抗坏铁酸的微量荧光测定法2.抗坏铁酸总量的荧光测定法93.6参考答案'