金莲花中总黄酮的分光光度法测定研究

'金莲花中总黄酮的分光光度法测定研究金莲花中总黄酮的分光光度法测定研究摘要：目的：建立分光光度法测定金莲花中总黄酮的方法。方法：以芦丁为对照品，采用A1C13显色分光光度法，在最大吸收波长420nni处，对金莲花中总黄酮进行定量测定。结果：测得金莲花中总黄酮为93.34mg/g,方法的相对标准偏差(RSD)为0.55%(n=6),加标冋收率在95.91%〜101.42%之间。结论：选用芦丁为对照品，通过A1C13显色，分光光度法测定金莲花中总黄酮，方法简单，准确度较高。关键词：金莲花；黄酮；分光光度法；芦丁中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：1673-7717(2012)01-2719-03DeterminationofTotalFlavonoidsinTrolliusChinensisBungebySpectrophotometryBAIJianhua,ZHAOErlao,WANGAiling(Departmentofchemistry,XinzhouTeachersUniversity,Xinzhou034000,Shanxi,China)Abstract:Objective:ToestablishaspectrophotometrytodeterminetotalflavonoidsinTrolliuschinensisBunge.Methods:WithRutinbeingtakenasrefereneesubstance,TotalflavonidsinTrolliuschinensisBungeweredeterminedbyspectrophotometry,throughA1C13Colorimetryat420run.Results:Thecontentofflavonoidswas93.34mg/ginTrolliuschinensisBunge,theRSDwas0.55%(n二6),andrecoveriesrangedfrom95.91%to101.42%・Conelusion:TodeterminecontentoftotalflavonoidsinTrolliuschinensisBungewithspectrophotometrythroughA1C13ColorimetrybystandardRutinisasimplemethodwithhigheraccuracy・省略。金莲花(TrolliusChinensis Bunge）又名金芙蓉、旱金莲等，为毛萇科多年生草本植物，我国主要分布于河北、辽宁、吉林和山西等地，资源广泛。金莲花以花入药，收载于本草，以清赵学敏所著《本草纲目拾遗》为最早，此外《广群方谱》、《植物名实图考》等书中都有记载[1]。药理研究证明，金莲花具有抗癌、抗肿瘤、抗心血管疾病、抗炎抗菌、抗突变、抗辐射等作用和增强免疫力等广谱生理活性[2]。黄酮类成分是金莲花主要活性成分[3-4],因此测定金莲花中的黄酮类成分具有一定的实际意义。目前天然产物中黄酮的测定方法主要有高效液相色谱法[5]、红外光谱法[6]、荧光法[7]和分光光度法[8],分光光度法因简便、快速，使用仪器简单、便于推广，故应用较多。而分光光度法测定天然产物屮黄酮，主要有NaN02-Al（N03）3-NaOH显色法和AlC13-（HAc-NaAc）显色法[8-10]。郭亚健等[11-13]的研究证明，采用NaN02-Al（N03）3-NaOH显色法，以芦丁作为对照，测定天然产物中总黄酮含量，不能排除非黄酮类物质的干扰。如天然产物中若含有邻二酚轻基的非黄酮类物质绿原酸等，则其在芦丁显色的最大波长处（510nm左右）也有较强吸收，因此这种方法测定黄酮含量的专属性不强。而马陶陶等[14-15]的研究说明，采用A1C13显色法测定天然产物中总黄酮含量具有合理性。因此本文研究了AlC13-（HAc-NaAc）显色分光光度测定金莲花中总黄酮的方法，以期为评价金莲花的内在质量和金莲花资源的开发利用提供理论依据。1材料与方法1.1仪器与试剂UV-2550紫外可见分光度计（日木岛津公司）;723型光栅可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；AL104电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；LWMC-201型微电脑微波化学反应器（南京陵江科技开发有限责任公司）；药材粉碎机（浙江武义屹立工具有限公司）。0.106mg/mL的芦丁标准溶液：精密称取10.6mg在120°C下干燥至恒重的芦丁标准品（购自中国药品生物制品检定所），无水乙醇溶解，定容于100mL的容量瓶中。无水三氯化铝、醋酸钠、冰醋酸、无水乙醇等试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸惚水。 金莲花，购于忻州市土特产商店，药材粉碎机粉碎,过60目筛，装瓶备用。1.2金莲花供试溶液的提取精密称取金莲花2.0g,按料液比1:20(g:mL)加入50%(v/v)的乙醇溶液，充分浸润5min后，于微波反应器中，微波功率325W提取2min后，冷却过滤，收集滤液。滤渣按上述操作多次提取，直到滤液中检测不到黄酮类成分为止，收集合并提取液，适当浓缩，测定其总体积，即为待测液。1.3实验方法精密吸取芦丁标准溶液0.0、0.5、1.0、15、2.0、2.5、3.0mL,分别置于10mL比色管中,加50%乙醇稀释至约为5.0mL,都加入pH为5.8的HAc-NaAc缓冲溶液1.0mL,混合均匀后，加1%的A1C13溶液1.OmL,以50%乙醇定容至刻度，放置反应lOmin后，以第一份溶液为试剂空白，在最大吸收波长420nm处测定吸光度，以吸光度对相应的浓度作图，绘制标准曲线，然后在相同的条件下测定样品中黄酮的吸光度，由回归方程计算金莲花中黄酮含量。2结果与分析2.1吸收光谱吸取1.0mL金莲花待测液于10mL比色管中，按照1.3节的实验方法操作，在UV-2550紫外可见分光度计上，于350〜500nm波长范围内进行扫描，可知，金莲花黄酮的最大吸收波长为420nm,与芦丁标准溶液的最大吸收波长相同，故选用420nni为最佳测量波长。图1芦丁标准曲线2.2芦丁标准曲线、线性方程按1.3节的方法试验，以芦丁标准溶液浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，制作标准曲线，结果如图1其回归方程为A=26.818c-0.0333,(c为芦丁质量浓度，单位mg/mL),相关系数一0.9993,线性范围0.005-0.032mg/mLo2.3精密度考察吸取芦丁标准溶液0.5mL,按1・3的操作，平行实验6次，计算得和对标准偏差RSD为0.35%,表明本方法的精密度良好。2.4稳定性试验精密吸取1.OmL金莲花待测液6份，按1・3节方法操作，在420波长处，每0.5h测一次吸光度值，结果在4h内， 金莲花提取液质量浓度的RSD为012%,表明金莲花供试液较稳定。2.5样品含量测定精密量取1.OmL的金莲花待测液6份，按1.3节中的方法操作，测定吸光度，计算金莲花中总黄酮含量，结果如表lo由表可知，金莲花中总黄酮含量为93.34mg/g,说明金莲花中含有较高的黄酮类成分。另外，由RSD为0.55%,说明方法的重现性较好。2.6样品回收率实验为了验证实验的准确性，精密量取金莲花样品待测液6份，分别加入不同量的芦丁标准液，按1・3节中的方法试验，测定吸光度，计算回收率，结果如表2。由表2可知A1C13显色分光光度法测定金莲花黄酮含量的凹收率在95.91%〜101.42%之间。说明本法可用于天然产物中黄酮的准确测定。2.7金莲花屮黄酮类化合物定性鉴定参考文献[16]的方法，利用黄酮类化合物的常规显色反应，对金莲花中黄酮类成分进行初步鉴别，结果表明金莲花中可能含有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮和异黄酮等类化合物。3讨论木实验研究了以芦丁为对照品，A1C13显色分光光度法，定量测定金莲花中总黄酮的方法，通过对方法的精密度、稳定性和回收率的考察，说明该方法简单，准确度较高，可用于金莲花中总黄酮的定量测定。实验的测定结果表明，金莲花中黄酮类化合物的含量较高。本实验的方法学研究和测定结果为金莲花的进一步开发研究提供了依据。参考文献[1]杨宜婷，李药兰,苓颖洲，等.金莲花的研究进展[J].中药材，2000,23(9):585-587.：2]赵二劳，赵小花，范建凤.金莲花黄酮微波辅助提取及其抗氧化性[J]・食品与生物技术学报,2009,28(1):81-85.[3]罗丽荣，蒋柏泉，口兰莉.金莲花有效药用成分提取研究[J]・江西化工，2006,6(3):96-98.[4]范新田，傅强，李凤丽，等.金莲花研究现状与展望[J].北华大学学报(自然科学版)，2006,7(2):131-134.[5]彭永芳，马银海,郭亚东，等.高效液和色谱法快速测定三白草中总黄酮类物质[J].理化检验-化学分册，2007,43(6): 463-464,467.：6]何书美，乔兰侠，刘敬兰.红外光谱法测定芹菜叶提取物中总黄酮含量[J]・分析科学学报，200&24(2):201-204・：7]张敏，曹庸，唐纯翼，等.A13+-芦丁二元络合物荧光光度法测定银杏叶中总黄酮的含量EJJ.分析科学学报，2005,21(2):188-190.[8]张颖心，何潮洪.从毛竹叶中提取总黄酮的工艺研究[J]・高等化学工程学报,2006,20(5):691-695.[9]邵峰，刘荣华,马志林，等•山楂叶总黄酮提取纯化工艺研究[J]•中成药，2008,30(9):1397-1398.收稿日期：2011-07-17基金项目：广西科技能力建设项目(桂科能07109004-01Z)作者简介：陈勇(1961-)，男，江西南昌人，教授，硕士研究生导师，研究方向：药物分析、中药及其制剂质量分析教学与科研工作。[10]毕和平，韩长FI,陈明松.光度法测定杜仲藤中总黄酮[J].理化检验-化学分册，2008,44(5):453-454,457.[11]郭亚健.对《中国药典》2005年版槐花总黄酮含量测定的修订建议[J]・中国药品标准,2008,9(5):327-328.[12]郭亚健，范莉，王晓强.关于NaN02-Al(N03)3-Na0H比色法测定总黄酮方法的探讨[J]・药物分析杂志，2002,22(2):97-99.[13]郭亚健，张兰珍.对《中国药典》2005年版中山楂叶、沙棘总黄酮含量测定的商榷[J]・中国药品标准，2010,11(4):246-247.：14]马陶陶，张群林，李俊，等.三氯化铝比色法测定中药总黄酮方法的探讨[J]・时珍国医国药，200&19(1):54-56.[15]杨悠，许军，刘燕华，等.比色法测定口花蛇舌草中总黄酮含量的研究EJL中华中医药学刊,200&19仃)：54-56.[16]郑大成，木合布力•阿布力孜，阿依努尔•吐鲁洪，等.昆仑雪菊水溶性黄酮的制备及初步鉴定[J]・亚太传统医药，2010, 6(10):18-20.'