分光光度法测细菌浓度11月18日

'用分光光度法粗测金黄色葡萄球菌菌悬液的浓度实验目的：通过对同一菌液同时测吸光度值与平板菌落计数，将两个结果做标准曲线。标准曲线做出后，通过测吸光度值间接反应菌悬液的浓度，用于指导菌悬液的制备。实验设备：U-2900型分光光度计波长为600nm比色皿厚度：cm实验材料：空白对照液：0.9%无菌氯化钠溶液稀释液：0.9%无菌氯化钠溶液营养肉汤培养基实验菌种：金黄色葡萄球菌（新鲜培养物）实验步骤：1.将金黄色葡萄球菌的新鲜培养物接种至营养肉汤培养基中，在30～35℃恒温培养箱中培养18～24h。2.在无菌阳性室按无菌操作将培养后的金黄色葡萄球菌用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成不同浓度的菌悬液。具体为分别吸取营养肉汤培养液0.1ml,0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.5ml，0.6ml，0.7ml到10ml0.9%无菌氯化钠溶液中，稀释成7种不同浓度的原始菌悬液。序号分别为1-7号。2.1平板菌落计数法测活菌浓度 取14个营养琼脂培养基平板，分别从每个原始菌液中，取0.2ml的菌悬液，用平板涂布法，涂于平板中，标明序号，每个稀释度涂2块平板.37℃培养箱培养72h后，可见菌落形成，选取菌落数在30~300间的平板进行计数，每组稀释度相同的平板取平均值作为菌落数.计算出原菌液细菌浓度，作为细菌菌液的标准浓度。2.2分光光度法测菌悬液吸收值同时将以上5种原始菌液在波长为600nm下测定吸光度。用0.9%无菌氯化钠溶液作为空白对照，记录各原始菌液的吸光度值。表一：平板菌落计数与吸光度值对比记录序号吸取原培养液的量（ml）---原始菌液加样到平板上的量（ml）稀释倍数平板计数菌落数（cfu）吸光度值原始菌液的含菌量（cfu）10.10.25倍0.01820.20.25倍0.02930.30.25倍0.04940.40.25倍0.05850.50.25倍0.07660.60.25倍0.08270.70.25倍0.1023结果计算_2Y-^U?Eyeiy{教育论文网]9|Y8n"a5oa对同一菌液同时测吸光度值与进行平板菌落计数，将平板菌落计数所得菌液浓度作为细菌标准浓度c.根据所测出A值以及相对应的标准浓度c值，作出标准曲线。'