分光光度法测定蛇足石杉中总黄酮含量论文

'　　分光光度法测定蛇足石杉中总黄酮含量论文马燮何笑聪杨郭汤秀华【摘要】目的建立蛇足石杉中总黄酮含量的测定方法。方法以芦丁为对照品，采用分光光度法在510nm处测定蛇足石杉中总黄酮的含量。结果芦丁浓度在8.16～57.12μg/ml范围内与吸光度值呈良好的线性关系，回归方程为A=10.649C+0.00557，r=0.9982，平均回收率为96.88%，RSD=2.53%。结论该测定方法简便、快速，准确，可作为测定蛇足石杉中总黄酮含量的方法。【关键词】蛇足石杉；总黄酮；芦丁；分光光度法Abstract：ObjectiveToestablishamethodfordeterminingthecontentoftotalflavonoidsinHuperziaserrata.MethodsRutinasreferencesample,thetotalflavonoidscontentinhuperziaserratainedbyspectrophotometryat510nm.ResultsThelinearrelationshipofrutin8.16to57.12mg/ml,A=10.649C-0.00557,r=0.9982.Theaveragerecoveryethodissimple,rapidandaccurate.ItcanbeusedfordeterminingthecontentoftotalflavonoidsinHuperziaserrata. Keyetry蛇足石杉Huperziaserrata.freelin，于微波炉中在600in，加入80%乙醇溶液100ml，80℃回流提取2次，每次30min，合并2次滤液，置于250ml的容量瓶中，加80%乙醇-水溶液至刻度，待用。蛇足石杉中总黄酮含量按下式计算：总黄酮含量（%）=CV1V31000V2m×100%其中C-样品溶液浓度（mg/ml）；V1-比色管中的定容体积（ml）；V2-移取到比色管中的提取液体积（ml）；V3-提取液体积（ml）；m-蛇足石杉粗粉质量（g）。2.2对照品溶液的配置称取干燥至恒重的芦丁标准品10.2mg，用60%的乙醇-水溶液（V/V）溶解，定容至50ml，摇匀得0.2040mg/ml的芦丁贮备液。2.3检测波长的确定取5.00ml的0.2040mg/ml芦丁标准溶液置于25ml比色管中，用60%的乙醇水溶液稀释至10.0ml，再加入1.00ml5%的亚硝酸钠溶液，摇匀，静置6min，加入1.00ml的10%硝酸铝溶液，摇匀，再静置6min，加入4.00ml的10%氢氧化钠溶液，定容至25ml。放置15min后，以试剂空白作参比，波长间隔为1nm，用1cm的玻璃比色皿在400～700nm波长范围内用紫外可见光分光光度计进行扫描，扫描曲线如图1中实线所示：取“2.1”项中的待测液4.00ml于25 ml的比色管中，加入60%的乙醇-水溶液至10.0ml，再加入1.00ml5%的亚硝酸钠溶液，摇匀，静置6min，加入1.00ml的10%硝酸铝溶液，摇匀，再静置6min，加入4.00ml的10%氢氧化钠溶液，定容至25ml。放置15min后，用1cm的玻璃比色皿在400～700nm波长范围内用紫外可见光分光光度计进行扫描，扫描曲线如图1中虚线所示。根据图1可知，蛇足石杉总黄酮提取物经铝盐显色后最大吸收波长在510nm处，与芦丁标准溶液显色后的扫描曲线相似，因此，本方法选用510nm为测定波长。2.4标准曲线的建立分别取1.00，2.00，3.00，4.00和5.00，6.00ml，7.00ml的0.2040mg/ml芦丁标准溶液置于25ml的比色管中，用60%的乙醇-水溶液稀释至10.0ml，再加入1.00ml的5%的亚硝酸钠溶液，摇匀，静置6min，加入1.00ml的10%硝酸铝溶液，摇匀，静置6min，加入4.00ml的10%氢氧化钠，定容至刻度。放置15min后，以试剂空白作参比，用1cm的玻璃比色皿于510nm波长处用紫外可见光分光光度计测定其吸光度。以吸光度（A）为纵坐标，以芦丁标准溶液的浓度（mg/ml）为横坐标绘制标准曲线，如图2所示。用最小二乘法进行回归，得到芦丁浓度（C）与吸光度（A）关系曲线的回归方程式：A=10.649C+0.00557，r=0.998 2，n=7，P＜0.0001，式中：C为芦丁标准溶液的浓度（mg/ml），A为吸光度。2.5精密度实验分别取“2.1”项中所得的蛇足石杉中黄酮类化合物的提取液5份，各4.00ml于25ml的比色管中用60%的乙醇水溶液稀释至10.0ml，再加入1.00ml的5%的亚硝酸钠溶液，摇匀，静置6min，加入1.00ml的10%硝酸铝溶液，摇匀，静置6min，加入4.00ml的10%氢氧化钠，定容至刻度。放置15min后，以试剂空白作参比，用1cm的玻璃比色皿于510nm波长处用紫外可见光分光光度计测定其吸光度，代入回归方程计算黄酮含量。2.6稳定性实验分别取2.00ml的对照品和4.00ml供试品溶液，按“2.3”项下方法显色后，每隔5min测定一次吸光度值，结果表明，对照品溶液在2h内吸光度值较为稳定，而供试品溶液在显色后30min内吸光度值较稳定，因此，提取液应在显色后30min内测定。表1精密度测试结果2.7加标回收率取供试品溶液4.00ml各5份于25ml的比色管中，分别加入0.5ml，1.00ml，1.50ml，2.00ml和2.50ml的0.2040mg/ml芦丁标准溶液，按“2.3”项下方法显色后测定总黄酮含量，计算加标回收率，结果见表2。表2加标回收率实验结果实验结果表明，总黄酮含量在8.16 ～57.12mg/ml线性范围内，回收率在94.06～100.54%之间，平均回收率为96.88%，RSD=2.53%。3结论研究表明，在510nm下，在浓度为8.16～57.12mg/ml范围内，芦丁浓度与吸光度值呈良好的线性关系，回归方程为A=10.649C+0.00557，r=0.9982；平均加标回收率为96.88%，RSD为2.53%；经测定，样品中总黄酮含量为0.879%。该测定方法简便、快速，准确，可作为测定蛇足石杉中总黄酮含量的方法。【'