紫外分光光度法测定纳米药物递送系统中卡铂含量

'紫外分光光度法测定纳米药物递送系统中卡钳含量摘要目的建立纳米药物递送系统中卡钳含量的测定方法。方法采用紫外分光光度法，起始波长：800nm,终止波长：190nm,扫描间隔：l.Onm,参比溶剂：5%葡萄糖注射液。测定卡铠/5%葡萄糖溶液的紫外吸收谱，对浓度与吸光度值间的线性关系、方法的精密度、重复性以及样品的稳定性、回收率进行考察，对C60/卡钳纳米药物递送系统中的卡铠含量进行测定。结果卡钳/5%葡萄糖溶液在229nm处出现最大吸收峰；在浓度范围0.64〜64?g/mL内，吸光度值与卡钳浓度具有良好的线性关系，线性回归方程为A=0.0105C+0.0082(R2=0.9984),方法具有良好的精密度(n=6,RSD=O.13%)与重复性(n=6RSD=1.69%),样品性质稳定，在室温避光条件下保存无显著降解(n=5,RSD=O.63%),日内回收率95.96%〜96.93%,日间回收率95.68%〜97.53%；C60/卡钳纳米药物递送系统中，卡钳的含量为50.57%O结论该方法可用于对纳米药物递送系统中卡钳的含量进行测定，具有良好的精密度与重复性，操作简单，有较好的实用性。关键词卡钳紫外分光光度法纳米药物递送系统卡钳(Carboplatin,CBP)的化学名称为顺-二氨T,1-环丁酸烷铠，是继顺钳之后的第二代钳类抗癌药物，对肺 癌、卵巢癌等多种癌症具有良好的治疗效果［1〜3］,相对于顺缶具有更小的肾、胃肠毒性［4,5］o无机纳米材料C60作为抗癌药物载体具有载药量大、控释性好、组织靶向性强的特点，建立C60/卡钳纳米药物递送系统可以增强卡钳对肿瘤组织的靶向性、提高肿瘤细胞外周与胞内的药物浓度，从而达到提高药效，降低毒副作用的目的。目前，卡钳的检测方法主要采用高效液相色谱［6〜8］和原子吸收光谱：9,10］,这2种方法具有良好的灵敏度和较强的专属性，但仪器价格昂贵、重现性欠佳。还有报道采用二阶导数光谱法［11］、络合分光光度法［12,13］、电感耦合等离子质谱/发射光谱法［14］对卡钳含量进行测定，但这些方法因样品预处理过程复杂、样品耗量大、检测时间长等问题而没有被广泛采用。纳米药物递送系统中卡钳含量的测定不仅要求方法灵敏、准确、专属，还要考虑C60本身的吸附性可能对仪器造成的损害和背景干扰问题。紫外分光光度法具有操作简单、迅速、经济的特点，准确性和重复性良好，吸附于比色池中的C60易于去除不会对仪器造成严重损害，同时C60在紫外光区内无强吸收，不会对卡钳的测定造成干扰。本文采用紫外分光光度计建立一种快速、准确的卡钳分析方法，以用于测定卡钳在纳米药物递送系统中的含量，为卡苗的药物开发打下基础。1仪器与试剂 UNIC2800紫外可见分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司），KQ-500DE数控超声清洗器（昆山超声仪器有限公司），AC-120S精密电子分析天平（德国Sartorius公司），卡铀（北京偶合科技有限公司，纯度$98%）,C60（濮阳市永新富勒烯科技有限公司，纯度99.9%）,5%葡萄糖注射液（石家庄四药集团）。2实验方法与结果2.1检测条件起始波长：800nm,终止波长：190nm,扫描间隔：1.Onm,参比溶剂：5%葡萄糖注射液。图1为卡钳在5%葡萄糖溶液中的紫外吸收光谱，最大吸收峰位置为229nmo2.2线性关系考察精确称取卡钳样品2.8mg,用25mL5%葡萄糖注射液定溶，超声lOmin使卡钳充分溶解，得到浓度为112?g/mL样品，作为母液备用。配制浓度为64?g/mL、32?g/mL、25.6?g/mL、19.2?g/mL>12.8?g/mL、6.4?g/mL、3.2?g/mL>1.6?g/mLx0.64?g/mL的待测样品，分别取上述样品3mL于比色池中，在229nm处测定吸光度值，每个样品平行测定3次。以样品浓度（C,?g/mL）为横坐标，吸光度值（A）为纵坐标，做线性回归，得到标准曲线方程A=0.0105C+0.0082(R2=0.9984),结果表明在0.64〜64?g/mL范围内，卡钳浓度与吸光度值呈良好的线性关系。 2.3精密度测定精确称取1.2mg卡钳，用30mL5%葡萄糖注射液溶解，配制浓度为40?g/mL的待测样品，在229nm处连续平行测定6次，记录吸光度值。结果：6次测定的吸光度值RSD=0.13%,表明方法精密度良好。2.4稳定性测定取2.3中所配浓度为40?g/mL的溶液，室温条件下避光保存，每天测定一次，连续测定5天。5天检测结果的RSD=0.63%,说明在卡钳在5%葡萄糖溶液中室温条件下避光保存较为稳定，未出现显著降解。2.5重复性测定重新称取6份质量为1.2吨的卡钳样品，如2.3所述方法配制浓度为40?g/mL的待测样，测定6份样品的吸光度值,分析批内变异情况。结果RSDJ.69%,表明方法的重复性良好。2.6回收率测定精确称取卡钳2.Omg,按高、中、低水平配成浓度为80?g/mL.40?g/mL.20?g/mL的待测样品，每日测定3次，连续检测3天，根据吸光度值和2.2项所得标准曲线计算回收率，见表lo实验结果表明，卡钳的日内回收率为95.96%〜 96.93%,日间回收率为95.68%〜97.53%,说明回收率良好。2.7载药量测定精确称取C60lO.Omg、卡钳24mg于锥形瓶中，加入5%葡萄糖注射液20mL,避光搅拌24h,以16000r/min离心8min,收集上清液并稀释10倍，在229nm处测定吸光度值，按照公式：（m游离药量二CX稀释倍数X稀释体积，C为测定吸光度值代入2.2项标准线方程计算结果）。实验结果（见表2）。3讨论以C60为药物载体对化疗药物卡钳进行吸附，可以实现提高药效、降低毒副作用的目的。因C60经长时间搅拌将有少量形成稳定存在于水中的纳米晶颗粒［15］,所以在收集到的游离药液中存在C60,如果按照中国药典中所采用的高效液相色谱法［16］对C60/卡钳药物递送系统中的卡钳含量进行测定，则可能遇到2点问题：（1）测定样品中存在的C60在色谱中高保留，造成色谱柱污染；（2）谱峰不佳。而其它检测方法如电感耦合等离子质谱/发射光谱法、络合分光度法则需要对样品进行预处理，既增加了操作的复杂性又不利于回收样品，还可能因预处理不当影响结果的准确性。采用紫外分光光度法对纳米药物递送系统中卡钳的含量进行测定，可以实现方便、快速、准确的定量，同时避免C60的干扰，操作简单，是一种良好的分析方法。 参考文献[1]SmithIE,HarlandSJ,RobinsonBA,etal.Carboplatin:averyactivenewcisplatininthetreatmentofsmallcelllungcancer[J]・CancerTreatmRep,1985,69(1)：43-46.[2]ZatloukalP,PetruzelkaL・Gemcitabine/carboplatininadvancednon-smallcelllungcancer[J].LungCancer,2002,38(2)：S33-S36.[3]ScallietP,PooterCDe,He11emansPWJ,etal.Interactionsentrelecarboplatine,lecisplatineetlesrayonnementsionisantsdansuneligneecellulairehumainedecancerovarien[J]・Cancer/Radiotherapie,1999,33(1):30-3&[4]DuffullSB,RobinsonBA.Clinnicalpharmacokineticsanddoseoptimizationofcarboplatin[J]・Clinnicalpharmacokinet.,1997,33：161-183・[5]杨一坤，普绍平，高文贵.顺钳的应用及钳金属抗癌药物的研究进展[J].中国新药杂志，1999,8：797-800.[6]RochardE.SimuItaneoushighperformanceliquidchromatographicanalysisofcarboplatinandcisplatinininfusionfluids[J]・JLiqChromatogr,1993,16(7)：1506-1516. [1]DuncanGF,etal.Liquid~chromatographicprocedureforthequantitativeanalysisofcarboplatininbeagledogplasmaultrafiltrate[J]・JPharmSci,1988,77(3)：273-276・[2]黄卫平，刘放.RP-HPLC法测定卡钳及其制剂的含量[J]・华西药学杂志，1997,12(2)：112-114.[3]张相林，任家佩，张道平等.国产卡钳和顺钳在兔体内的药物动力学[J].中国医院药学杂志，1992,12(9)：387-389.[4]倪俊，王元和，王强等.白蛋白对大鼠腹腔内卡钳分布的影响[J].中国医院药学杂志，1996,16(6)：246-248.[5]宋璟政.二阶导数分光光度法预测注射用卡波苗稳定性及其影响因素的研究[J].中国医药工业杂志，1991,22(12):538-549・[6]王皓，蒋雪涛，杨悦武等.白蛋白微球中卡钳的络合分光光度法测定[J].药物分析杂志，1995,15(1)：41.[7]孔维涵，赵博，陈启蒙等.络合分光光度法测定卡铀抗肿瘤膜剂中卡钳含量[门.天津药学，2005,17(5)：17-18.[8]徐风华，欧阳荔，刘雅琼.感耦等离子体质谱法和发射光谱法测定卡钳一乳酸/轻基乙酸共聚物微球中卡 钳含量的研究[J]・药物分析杂志,2006,26(6)：790-792.[1]DeguchiS,AlargovaRG,TsujiiK.Stabledispersionsoffullerenes,C60andC70,inwater.Preparationandcharacterization[J]・Langmuir,2001,17：6013-6017.[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].2000年版.二部.北京化学工业出版社，2000,136-137.'