DB32∕T 2265-2012 鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的测定双波长分光光度法

'ICS65.020.01B22备案号：DB32江苏省地方标准DB32/T2265—2012鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的测定双波长分光光度法DeterminationofamylaseandamylopectincontentinfreshcornDual-QavelengthSpetrophotometry2012-12-28发布2013-02-28实施江苏省质量技术监督局发布 DB32/T2265—2012前言本标准按GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求编写。本标准由江苏省农业科学院提出。本标准起草单位：江苏省农业科学院农产品加工研究所、国家农业科技华东（江苏）创新中心农产品加工工程技术研究中心。本标准主要起草人：宋江峰、刘春泉、李大婧、林美娟、刘春菊、吴海虹、牛丽影、崔莉、江宁。 DB32/T2265—2012鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的测定双波长分光光度法1范围本标准规定了双波长分光光度法测定鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的方法。本标准适用于乳熟后期至蜡熟初期收获的鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB7648-1987水稻、玉米、谷子籽粒直链淀粉含量的测定GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法3原理根据双波长比色原理，若试样溶液在两个波长处均有吸收，则两个波长的吸光差值，与溶液中待测物质的浓度成正比。从待测样品液中的直链淀粉、支链淀粉分别与碘生成络合物的吸收图谱中，可以确定测定波长和参比波长。淀粉与碘能形成螺旋状结构的碘-淀粉复合物，它具有特效的颜色反应，其中直链淀粉与碘生成纯蓝色复合物，而支链淀粉与碘依其分枝程度生成紫红-红棕色复合物。因此两种淀粉与碘作用时会产生不同的光学特性，从而表现出特定的吸收谱及吸收峰。4试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682-2008中规定的水。4.1直链淀粉标准品直链淀粉标准品的制备参照GB7648-1987中附录Ａ（参考件）操作。4.2支链淀粉标准品支链淀粉标准品的制备参照GB7648-1987中附录B（参考件）操作。4.3盐酸（HCl）。4.4氢氧化钾（KOH）。4.5石油醚（沸点30℃～60℃）。4.6碘（I2）。4.7碘化钾（KI）。4.8碘试剂称取2.0g碘化钾，溶于少量蒸馏水，再加0.2g碘，待溶解后用蒸馏水稀释定容至100mL。每天用前现配，避光保存。4.9直链淀粉标准贮备液称取0.1000g直链淀粉标准品，置于50mL容量瓶中，加入1mol/L氢氧化钾溶液10mL，在热1 DB32/T2265—2012水中待溶解后，取出用蒸馏水定容至刻度，摇匀并静置，制备2mg/mL直链淀粉标准贮备液。4.10支链淀粉标准贮备液称取0.1000g支链淀粉标准品按（4.9）法制备2mg/mL支链淀粉标准贮备液。5仪器和设备5.1双光束分光光度计带波段扫描。5.2分析天平感量为0.01g和0.1mg各一台。5.3pH计pH计精度为±0.01，使用前校正。5.4索氏抽提器。5.5恒温水浴锅。5.6鼓风干燥箱。5.7组织捣碎机。6试样制备将鲜食玉米籽粒样品用组织捣碎机捣碎，置于60℃鼓风干燥箱中烘干，使其水分含量降低到10%以下，过孔径为0.25mm试样筛。称取1g的烘干样品放入索氏抽提器中，加入35mL石油醚，加热回流脱脂4h，然后放入鼓风干燥箱中烘干，挥去残余的石油醚。7检验步骤7.1提取准确称取脱脂样品0.1000g，置于50mL容量瓶中，加1mol/L氢氧化钾溶液10mL，在75℃水浴中充分溶解20min，冷却后用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静置15min后过滤。7.2测定精取5mL滤液，置于50mL容量瓶中，加25mL蒸馏水，以0.1mol/L盐酸溶液调pH至3.0，加0.5mL碘试剂，用蒸馏水定容至刻度。于室温静置25min后，以样品空白液为对照，用1cm比色杯，分别测定样品液λ1、λ2、λ3、λ4的吸收值Aλ1、Aλ2、Aλ3、Aλ4，得到△A样直，△A样支，再与标准化系列比较定量。7.3标准曲线绘制7.3.1选择直链、支链淀粉测定波长、参比波长分别吸取1.0mL、5.0mL直链和支链淀粉标准贮备液置于50mL容量瓶中，加蒸馏水25mL，以0.1mol/L盐酸溶液调pH至3.0，加0.5mL碘试剂，并用蒸馏水定容。室温下静置25min。以蒸馏水为空白，用双光束分光光度计进行可见光全波段扫描绘制直链和支链淀粉吸收曲线。根据原理（3）确定直链淀粉和支链淀粉的测定波长λ1、λ2，参比波长λ3、λ4。7.3.2双波长直链淀粉标准曲线绘制分别吸取0.3mL、0.5mL、0.7mL、0.9mL、1.1mL和1.3mL直链淀粉标准贮备液，置于50mL2 DB32/T2265—2012容量瓶中，加25mL蒸馏水，以0.1mol/L盐酸溶液调pH至3.0，加0.5mL碘试剂，用蒸馏水定容。室温下静置25min后，以蒸馏水为空白，用1cm比色杯在λ1、λ3两波长下分别测定Aλ1、Aλ3，即得△A直=Aλ1-Aλ3，以△A直为纵坐标，直链淀粉浓度（mg/mL）为横坐标，制作双波长直链淀粉标准曲线。7.3.3双波长支链淀粉标准曲线绘制分别吸取2.0mL、2.5mL、3.0mL、3.5mL、4.0mL、4.5和5.0mL支链淀粉标准贮备液，置于50mL容量瓶中。以下操作同（7.3.2）。以蒸馏水为空白，用1cm比色杯在λ2、λ4两波长下分别测定Aλ2、Aλ4，即得△A支=Aλ2-Aλ4，以△A支为纵坐标，支链淀粉浓度（mg/mL）为横坐标，制作双波长支链淀粉标准曲线。8结果计算每100克鲜食玉米籽粒中直链淀粉和支链淀粉的含量分别按式（1）和式（2）计算。C5010(1WW)Y112100………………………………………………………………（1）1M1000C5010(1WW)212Y100…………………………………………………………………（2）2M1000式中：Y1——试样中直链淀粉的含量，单位为克每百克（g/100g）；Y2——试样中支链淀粉的含量，单位为克每百克（g/100g）；C1——标准曲线查得的样品液中直链淀粉的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；C2——标准曲线查得的样品液中支链淀粉的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；M——测定用脱脂样品的质量，单位为克（g）；W1——试样中水分含量，单位为克每百克（g/100g）；W2——试样中粗脂肪含量，单位为克每百克（g/100g）；计算结果保留至小数点后2位。9方法测定低限和允许差9.1本方法对鲜食玉米籽粒中直链淀粉和支链淀粉的测定低限为0.1g/100g。9.2在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。3 DB32/T2265—2012附录A（资料性附录）直链淀粉与支链淀粉参比波长分析A.1直链淀粉与支链淀粉参比波长分析1.01直链淀粉吸收曲线2支链淀粉吸收曲线0.90.810.7Abs0.6/0.5吸光值0.40.320.20.1λ2λ1λ3λ40.0400450500550600650700750800波长/nm图A.1直链淀粉与支链淀粉参比波长分析4'