毕业设计（论文）--紫外分光光度法快速测定食品中三聚氰胺含量

'滨州学院本科毕业设计（论文）滨州学院毕业设计（论文）题目紫外分光光度法快速测定食品中三聚氰胺含量系（院）生命科学系专业生物科学　班级07级二班学生姓名高玉清　　学号2009030207　指导教师石东里　职称教授9滨州学院本科毕业设计（论文）二〇一一年六月十七日9 滨州学院本科毕业设计（论文）独创声明本人郑重声明：所呈交的毕业设计(论文)，是本人在指导老师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，成果不存在知识产权争议。尽我所知，除文中已经注明引用的内容外，本设计（论文）不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明。本声明的法律后果由本人承担。 作者签名:二〇一年月日 毕业设计（论文）使用授权声明本人完全了解滨州学院关于收集、保存、使用毕业设计（论文）的规定。本人愿意按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版，同意学校保存学位论文的印刷本和电子版，或采用影印、数字化或其它复制手段保存设计（论文）；同意学校在不以营利为目的的前提下，建立目录检索与阅览服务系统，公布设计（论文）的部分或全部内容，允许他人依法合理使用。（保密论文在解密后遵守此规定） 作者签名:二〇一年月日9 滨州学院本科毕业设计（论文）紫外分光光度法快速测定食品中三聚氰胺含量摘要以牛奶、奶粉等乳制品为研究对象，建立紫外分光光度法快速测定食品中三聚氰胺含量的方法。以三氯乙酸作为溶剂，用T6新世纪紫外分光光度计在波长为240nm下测定三聚氰胺的吸光度。实验结果表明：三聚氰胺在浓度范围为1.6～9.6μg/ml内线性关系良好；表观摩尔吸光系数为6.3×104L/(mol·cm)；回收率为98.3%～107.8%，相对标准误差小于1.7%。该方法准确、快速、简便,可用于测定实际样品，为三聚氰胺的检测提供了新方法。关键词：紫外分光光度计;食品;三聚氰胺9 滨州学院本科毕业设计（论文）RapidcontentdeterminationofmelamineinfoodpowerbyUV-spectrophotometerAbstractWithmilk,milkpowder,etcdairyforresearchobject,establishUVspectrophotometrydeterminethefoodmelaminecontentmethod.WiththeTrichloroaceticacidassolvent,thewaveofmelamineabsorbencyisdeterminedwithUV-T6innewcentury-spectrophotometerat240nm.Showthat:agoodlinearrelationshipexistswhentheconcentrationofmelaminefallswithintherangeof1.6–9.6μg/mL;Itsapparentmolarabsorptioncoeffienctsare6.3×104L/(mol•cm);Recoveryis98.3%~107.8%.Themethodisaccurate,rapid,simple,usedforrealsamplesfordeterminationofmelamine,providesanewmethodofdetection.Keywords:UVspectrophotometer;food;melamine9 滨州学院本科毕业设计（论文）目录引言1第一章材料与方法21.1试验材料21.2仪器设备21.3试验设计21.3.1溶液的配制21.3.2检测波长的选择31.3.3标准曲线的绘制31.3.4回收率试验41.3.5样品的测定5第二章结果与分析62.1结果62.2分析62.3提取溶剂的选择62.4结论7参考文献8谢辞99 滨州学院本科毕业设计（论文）引言三鹿牌婴幼儿奶粉违法添加三聚氰胺的事件，冲击了中国整个奶制品行业，严重损害了群众利益，造成了极其恶劣的社会影响。动物性食品及动物饲料中同样也存在三聚氰胺残留问题，三聚氰胺在动物源性食品中的潜在危害正引起全社会的关注。三聚氰胺（Melamine），是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，重要的氮杂环有机化工原料。简称三胺，又叫2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪、2，4，6-三氨基脲、蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺，分子式C3N3（NH2）3，分子量126.12。三聚氰胺为纯白色单斜棱晶体，无味，密度1.573g／cm3(16℃)。常压熔点354℃（分解）；快速加热升华，升华温度300℃。它溶于热水，微溶于冷水，极微溶于热乙醇，不溶于醚、苯和四氯化碳，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等，低毒。在一般情况下较稳定，但在高温下可能会分解放出氰化物。呈弱碱性（pKb=8），与盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氰胺盐。在中性或微碱性情况下，与甲醛缩合而成各种羟甲基三聚氰胺，但在微酸性中（pH值5.5～6.5）羟甲基的衍生物进行缩聚反应而生成树脂产物。遇强酸或强碱水溶液水解，胺基逐步被羟基取代，先生成三聚氰酸二酰胺，进一步水解生成三聚氰酸一酰胺，最后生成三聚氰酸。最主要的用途是作为生产三聚氰胺甲醛树脂（MF）的原料，是不允许添加到食品中的。不法商人利用其含氮量高(约66.7%)且无异味,价格低廉,用传统的凯氏定氮法无法区别是否是对动物机体有益的蛋白氮还是不能被利用的非蛋白氮,在加工食品或饲料中添加三聚氰胺能造成“高蛋白质含量”的假象。食品和饲料中掺入三聚氰胺会对人和动物健康产生巨大的危害。2004年和2007年,韩国、台湾和美国相继发生狗、猫等宠物因进食含有三聚氰胺的宠物饲料而导致肾功能衰竭甚至导致死亡的事[1-3]。研究显示,三聚氰胺主要引起肾脏衰竭。因此通过有效的技术手段,对食品中三聚氰胺残留进行检测,确保食品安全性具有十分重要意义。目前，国家质量标准规定了高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、9 滨州学院本科毕业设计（论文）液相色谱-质谱/质谱法三种方法为三聚氰胺的检测方法，其中高效液相色谱法为确证法。许多研究者采用了该法及其改进法测定食品中的三聚氰胺[4-6],也有采用反相高效液相色谱法[7]、质谱方法测定食品中的三聚氰胺的报道[8-10]，林立等[11]报道了离子色谱-紫外检测测定液态奶中的三聚氰胺。但这些方法操作需时较长,设备要求高。三聚氰胺结构中有不饱和共轭双键,可在紫外区产生较强的吸收,故可用紫外分光光度法快速测定其含量,且此法比高效液相色谱法更经济、省时和易于推广。本文以牛奶、奶粉等乳制品作为样品,以三氯乙酸和乙酸铅作为提取剂,用紫外分光光度法在检测波长为240nm处测定三聚氰胺的含量。第一章材料与方法1.1试验材料三聚氰胺标准样品；乙酸铅(分析纯)；三氯乙酸(分析纯)；实验用水为重蒸水。1.2仪器设备T6新世纪紫外-可见分光光度计，FA1004A型电子分析天平，烧杯，玻璃棒，离心机，移液管，10ml容量瓶，50ml容量瓶，吸耳球。1.3试验设计1.3.1溶液的配制三氯乙酸溶液的配制:准确称取10g三氯乙酸用重蒸水配制成1%的溶液,置于1l容量瓶中作为溶剂备用。三聚氰胺母液的配制:准确称取4mg三聚氰胺用配制好的1%的三氯乙酸溶液作为9 滨州学院本科毕业设计（论文）溶剂,配制浓度为0.08mg/ml的三聚氰胺溶液于50mL容量瓶中备用。1.3.2检测波长的选择用1%的三氯乙酸溶液作为空白对照,用T6新世纪紫外—可见分光光度计,将质量浓度分2.14,3.62,5.10,6.58μg/ml的三聚氰胺溶液,在波长200～400nm范围内扫描，发现三聚氰胺在236nm波长处有最大吸收,综合各方面条件及相关文献，选择240nm为测定三聚氰胺含量的适宜检测波长。1.3.3标准曲线的绘制分别吸取浓度为0.08mg/ml的母液0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2ml到10ml容量瓶中,用1%三氯乙酸溶液进行定容。在240nm的检测波长下测定其吸光度值A,然后以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制三聚氰胺标准曲线,并对其进行线性回归。实验中三聚氰胺浓度及其对应的吸光度值A数据见表1和图1。表1三聚氰胺浓度及其对应的吸光度值A数据三聚氰胺浓度（μg/ml）吸光度值A1.60.10393.20.18004.80.26206.40.33238.00.40859.60.4847斜率(k)=0.0475b=0.0293回归方程y=0.0475x+0.02939 滨州学院本科毕业设计（论文）图1三聚氰胺标准曲线图从表1和图1可知，回归方程为y=0.0475x+0.0293,表观摩尔吸光系为6.38×104L/(mol·cm),相关系数r=0.9997,实验结果表明,工作曲线在所选定的浓度范围内具有很好的线性关系。1.3.4回收率试验取适量三聚氰胺样品作为对照,用1%的三氯乙酸作为溶剂,在线性范围内配制高、中、低3个浓度的样品(每个浓度各有3个平行样,共9个样),定容,在240nm下分别测定其吸光度,测得的平均回收率为98.3%～107.8%，相对标准误差RSD小于1.7%。结果见表29 滨州学院本科毕业设计（论文）表2三聚氰胺回收率试验结果加入值（μg/ml)测定值（μg/ml)平均回收率/%RSD/%2.3622.1582.334107.81.72.2865.5635.7805.79498.91.25.6957.7327.8607.69198.30.47.751.3.5样品的测定称取约0.4g牛奶样品(精确至0.01g)于100ml烧杯中,加入配好的1%三氯乙酸50ml。用璃棒不停搅拌10min,使牛奶样品全部均匀散布在溶液中,加入2ml2%的乙酸铅溶液,静止沉降15min,取上清液在离心机中以5000r/min离心10分钟，然后取离心过的上清液过孔径0.45μm有机滤膜,供测试用。并将测定结果与高效液相色谱法进行比较,结果见表3。表3牛奶样品测定结果对比(μg/kg)牛奶样品123平均值本法647.33654.68657.56653.19色谱法687.6692.5691.4690.59 滨州学院本科毕业设计（论文）第二章结果与分析2.1结果结果见表3,可以看出,检测结果与高效液相色谱法基本吻合。2.2分析三聚氰胺回收率试验中的相关计算按如下公式计算：d=x-_x式中：d-偏差x-三聚氰胺回收的测定值_x-三聚氰胺回收测定值的平均值相对标准差（RSD%）=（S÷X）×100%r-相关系数r值在-1＜r＜1之间，即当0＜︱r︱＜1与A有关系，︱r︱越接近1，A与浓度的线性关系越好。2.3提取溶剂的选择三聚氰胺与酸反应生成三聚氰胺盐,而且酸性条件下有利于样品中蛋白质的变性,故宜采用酸性溶液提取三聚氰胺，如本实验中用到的三氯乙酸溶液。因为加入重金属盐类同样起沉淀蛋白的作用，此外提取溶剂中加入乙酸盐,可以与三氯乙酸形成缓冲盐而减少pH的波动变化,有利于待测物的稳定与提取效果,减少干扰如本实验室中用到的乙酸铅溶液。9 滨州学院本科毕业设计（论文）2.4结论实验表明,此检测方法操作准确，快速，简便,具有良好的准确性和回收率,检测限可达到1.0μg/kg,实验检测结果与高效液相色谱相比较二者基本吻合。实验所用仪器应用比较广泛,价格相对便宜,应用价值较高,可满足各行业实验室对三聚氰胺分析检测的要求。9 滨州学院本科毕业设计（论文）参考文献[1]BrownCA,JeongKS,PoppengaRH,etal1Outbreaksofrenalfailureassociatedwithmelamineandcyanuricacidindogsandcatsin2004and2007[J]1VetDiagnInvest,2007,19:525-5311.[2]ThompsonME,Lewin-SmithMR,KalasinskyVF,etal1Characterizationofmelamine-containingandcalciumoxalatecrystalsinthreedogswithsuspectedpetfood-inducednephrotoxicosis[J]1VetPathol,2008,45:417-4261.[3]CiancioloRE,BischoffK,EbelJG,etal1Clinicopathologic,histologic,andtoxicologicfindingsin70catsinadvertentlyexposedtopetfoodcontaminatedwithmelamineandcyanuricacid[J]1AmVetMedAssoc,2008,233:729-7371.[4]刘海日,池晓峰,彭茵,等.高效液相色谱法快速测定乳制品中三聚氰胺[J].中国卫生检验杂志,2009,19(5):975-976.[5]周建科,张明翠,宋歌,等.高效液相色谱法测定鸭肉中的三聚氰胺[J].分析试验室,2009,28(增刊):156-158.[6]张微,杨秀飚,黄定芳,等.改进乳制品中三聚氰胺液相色谱检验方法的研究[J].现代食品科技,2009,25(7):846-847.[7]侯升杰,王辉,丁明玉.反相高效液相色谱法同时分析三聚氰酸和三聚氰胺[J].中国科学(B辑:化学),2009,39(8):845-849.[8]李东刚,鞠福龙,刘晓玲,等.非衍生化—气相色谱串级质谱(GC-MS-MS)法测定豆粉中的三聚氰胺[J].大豆科技,2009(1):37-39.[9]陈冬东,彭涛,李晓娟,等.液相色谱—质谱/质谱法测定乳与乳制品中的三聚氰胺[J].中国食品卫生杂志,2009,21(3):253-255.[10]王太全,曾正宏,陈勇,等.气相色谱—质谱联用法测定鸡肉中三聚氰胺[J].中国家禽.2009,31(4):57-58.[11]林立,王海波,梁立娜,等.离子色谱—紫外检测测定液态奶中的三聚氰胺[J].食品科学,2009,30(14):240-242.9 滨州学院本科毕业设计（论文）谢辞首先非常感谢生命科学系领导和各位老师多年来对我的教育和培养。特别感谢论文指导老师石东里教授，在论文选题、技术路线设计、试验实施、论文撰写和定稿等过程中倾注了大量的时间和精力，给予悉心的指导和诲人不倦的教导。同时，论文的顺利完成也离不开其他老师、同学和朋友的关心和帮助。在整个论文的写作中，各位老师、同学和朋友积极地帮助我查资料和提供有利于写作的建议，在他们的帮助下，论文得以不断的完善，最终写完整个论文。总之，经过几个月的查资料、整理资料、写作论文，今天终于可以顺利完成毕业论文了。时光匆匆，两年的美好时光转眼过去，谢谢各位老师对我这两年的辛勤栽培，谢谢207宿舍各兄弟两年来的帮助和关怀，谢谢2007级本科二班所有同学给我的关爱和鼓励。谢谢你们！9'