紫外分光光度法测定蛋白质含量.ppt

'紫外分光光度法测定蛋白质含量实验目的学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术。掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。 本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量。蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280nm附近（不同的蛋白质吸收波长略有差别）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度的关系服从朗伯-比耳定律。280nm275nm实验原理 实验预习预习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。预习紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验步骤。了解TU-1901紫外-可见分光光度计的主要构造。 TU-1901紫外-可见分光光度计，比色管，吸量管标准蛋白质溶液：5.00mg.mL-1溶液0.9%NaCl溶液，待测蛋白质溶液仪器与试剂 1.启动计算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器。2.在工作界面上选择测量项目（光谱扫描，光度测量），本实验选择光度测量，设置测量条件（测量波长等）。3.将空白放入测量池中，点击START扫描空白，点击ZERO校零。4.标准曲线的制作。基本操作 实验步骤1.标准曲线的制作：用吸量管分别吸取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL5.00mg.mL-1标准蛋白质溶液于5只10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液为参比，在280nm处分别测定各标准溶液的吸光度A280，记录所得读数。2.样品测定：取待测蛋白质溶液3mL，按上述方法测定280nm处的吸光度。平行测定三份。 1.以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。2.根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。数据处理 注意事项和问题1.紫外吸收法与Folin-酚比色法测定蛋白质含量相比，有何缺点及优点？2.若样品中含有核酸类杂质，应如何校正？'