分光光度法测定夏枯草中总皂苷的含量

'　　分光光度法测定夏枯草中总皂苷的含量【摘要】［目的］测定夏枯草药材中总皂苷的含量。［方法］甲醇超声提取夏枯草样品溶液，5％香草醛－冰醋酸显色，分光光度法测定样品中总皂苷含量。［结果］总皂苷在26.95～94.31μg范围内与吸光度呈良好的线性关系，回收率在97.0％～100.5％之间；三批夏枯草样品中总皂苷的含量在2.02%～2.56%之间。［结论］分光光度法测定夏枯草中总皂苷的含量，方法准确可靠、操作简便。【关键词】夏枯草;总皂苷;分光光度法;含量测定　　Abstract：［Objective］Tomeasurethecontentoftotalsaponinsinselfhealherb.［Method］Extractselfhealresolutioneasurecontentoftotalsaponinsinsampleetry.［Result］In26.95～94.31μg，thetotalsaponinhasgoodlinearrelationshippleshavesaponins2.02%～2.56%.［Conclusion］Spectrophotometrymeasuringsaponinsinselfhealiscorrect，reliableandeasyofoperation.　　Keyetry;contentmeasure 　　夏枯草为唇形科植物夏枯草（BrunellaecumfructuL.）的干燥果穗，具有清火、明目、散结、消肿之功效，用于目赤肿痛，头痛眩晕，瘰疬，乳痈肿痛，高血压，急性黄疸型传染性肝炎等病症［1］。夏枯草含有齐墩果酸等三萜类成分、β谷甾醇等甾体类成分、木犀草素等黄酮类成分、香豆素、苯丙素、有机酸、挥发油等成分，现代药理学研究表明，其具有降压、降糖、抗炎、免疫抑制、抗菌、抗病毒等作用［2］。本文采用紫外分光光度法测定夏枯草中总皂苷的含量，为夏枯草研究的进一步完善及质量控制提供实验依据。　　1实验材料　　1.1实验仪器与试剂　　3300pro紫外可见分光光度计，安玛西亚中国有限公司；水浴锅：上海；所用试剂均为分析纯；对照品：齐墩果酸（1107092－200304，供含量测定用，中国药品生物制品检定所）；夏枯草药材：取自本院药房，产地浙江。　　2实验方法与结果　　2.1对照品溶液的制备　　取齐墩果酸对照品适量，精密称定，置于25ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液（每ml相当于0.135mg齐墩果酸）。　　2.2供试品溶液的制备 　　夏枯草药材，粉碎，取药材粉末约0.5g，称定重量，置于50ml容量瓶中，加入甲醇50ml，称重，超声45min，取出，甲醇补足失重，过滤，取续滤液。　　2.3最大吸收波长的选择　　取适量供试品和对照品溶液，分别置具塞试管中，挥干溶剂，加入5％香草醛－冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴15min，取出置冰水浴冷却后加入5ml冰醋酸，摇匀，在400～700nm波长范围内扫描，结果表明，样品与对照品在550nm附近均有最大吸收峰，综合考虑，选择550nm作为测定波长。　　2.4标准曲线的制备　　分别取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置具塞试管中，挥干溶剂，精密加入5％香草醛－冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴15分钟，取出置冰水浴冷却后加入5ml冰醋酸，摇匀，在550nm处测定吸光度。回归方程为Y=0.008x-0.0146（r=0.9991），在26.95～94.31μg范围内总皂苷（以齐墩果酸计）与吸光度线性关系良好。　　2.5显色稳定性试验　　取供试品溶液0.2ml置具塞试管中，挥干溶剂，按标准曲线制备项的方法测定吸光度，连续测定2h，结果表明2h内稳定。 　　2.6精密度试验　　取同一供试品溶液0.2ml加入具塞试管中，挥干溶剂，按标准曲线制备项的方法测定吸光度，连续测定6次，吸光度依次为0.395、0.395、0.394、0.394、0.394、0.395，表明仪器精密度良好（RSD=0.17％）。　　2.7重复性试验　　分别取同一批夏枯草样品五份，按“供试品溶液制备”项下方法制成供试液，取0.2ml置具塞试管中，挥干溶剂，按照标准曲线制备项下的方法测定吸光度，计算样品中总皂苷的含量依次为2.59％、2.59％、2.50％、2.47％、2.49％，表明，重复性良好（RSD=2.28%）。　　2.8加样回收率试验　　取已知含量的同批样品，分别添加一定量的齐墩果酸对照品，按“供试品溶液制备”项下方法制成供试液，取供试液溶液适量加入具塞试管中，挥干溶剂，按照标准曲线制备项下方法测定吸光度，计算回收率，结果见表1，本实验方法回收率在97.0～100.5％之间，符合回收率要求（95％～105％）。表1总皂苷加样回收结果（略）　　回收率=（实测量样品中的量）/对照品加入量×100%　　2.9样品中总皂苷含量测定　　取不同批次夏枯草药材，按“供试品溶液制备” 项下方法制成供试液，取0.2ml置具塞试管中，挥干溶剂，按照标准曲线制备项下的方法测定吸光度，计算样品中总皂苷的含量，见表2。表2不同批夏枯草药材中总皂苷含量测定结果（略）　　3讨论夏枯草研究以药理学研究居多，其药学的研究主要以苯丙素、三萜类成分等的分离、纯化和结构鉴定以及齐墩果酸和熊果酸、咖啡酸和迷迭香酸等成分等的含量测定为主；总类成分的研究较少，仅限于总黄酮及多糖的分离纯化等工艺研究，而对另一类成分皂苷的研究则少之又少。夏枯草含有的以齐墩果酸和熊果酸为主的三萜皂苷类成分具有降压［3］等药理作用，这些成分含量的高低将直接影响夏枯草的生理活性。中药的疗效并不是单一成分引起的，可能是一组或是一群物质共同引起的药理作用。药效指导下的部位分离是中药新药研发的一条有效途径。本文建立了夏枯草中总皂苷的含量测定方法，为夏枯草有效部位的提取工艺研究及制剂的开发提供一个质量控制手段。本文仅测定了本院药房三批药材中总皂苷的含量，三批药材间皂苷的含量虽有差异但比较接近；不同产地夏枯草中总皂苷的含量及差异将在下一步实验中进行，以期为夏枯草药材的产地选择及质量控制提供另一衡量标准。 目前尚不能得到夏枯草皂苷的对照品，夏枯草中皂苷的苷元基本是齐墩果烷型，采用齐墩果酸作为标准对照品可行。【参考'