九种燕窝中唾液酸含量的紫外可见分光光度法测定

'LISHIZHENMEDICINEANDMATEＲIAMEDICAＲESEAＲCH2013VOL．24NO．11时珍国医国药2013年第24卷第11期［13］诱导EAE的发生而后者介导免疫抑制。而Th2型细胞因子encephalomyelitisinIL－12receptor－β2－deficientmice:IL－12re-IL－4对Th17细胞分化起抑制作用［14］。sponsivenessisnotrequiredinthepathogenesisofinflammatorydemye-既往研究表明，左归丸可有效治疗大鼠EAE。本实验研究linationinthecentralnervoussystem［J］．Thejournalofimmunology，2003，170(4):2153．显示，左归丸可改善EAE小鼠神经功能评分及组织病理损伤，降［7］HarringtonLE，HattonＲD，ManganPＲ，etal．Interleukin17－produ-低EAE小鼠血清IL－6、IL－17含量，升高IL－4、TGF－β含量。cingCD4+effectorTcellsdevelopviaalineagedistinctfromtheT提示左归丸可通过抑制Th17细胞分化而起到抗炎治疗作用，进helpertype1and2lineages［J］．NatImmunol，2005，6(11):1123．而改善EAE神经功能评分。［8］ParkH，LiZ，YangXO，etal．AdistinctlineageofCD4Tcellsregulates综上所述，左归丸能够通过影响Th17细胞分化，起到抗炎治tissueinflammationbyproducinginterleukin17［J］．NatImmunol，疗作用，为左归丸在多发性硬化中的应用提供了新的理论依据。2005，6(11):1133．［9］KomiyamaY，NakaeS，MatsukiT，etal．IL－17playsanimportantrole参考文献:inthedevelopmentofexperimentalautoimmuneencephalomyelitis［J］．J［1］HolmyT．Immunopathogenesisofmultiplesclerosis:conceptsandcon-Immunol，2006，177(1):566．troversies［J］．ActaNeurolScandSuppl，2007，115(187):39．［10］WeaverCT．Th17:TheascentofaneweffectorT－cellsubset［J］．Eur［2］ZhouW，DowellDＲ，HuckabeeMM，etal．ProstaglandinI2signalingJImmunol，2009，39(3):634．drivesTh17differentiationandexacerbatesexperimentalautoimmune［11］ManganPＲ，HarringtonLE，O＇QuinnDB，etal．Transforminggrowthfac-encephalomyelitis［J］．PLoSOne，2012，7(5):e33518．tor－betainducesdevelopmentoftheT(H)17lineage［J］．Nature，［3］叶明，樊永平，王蕾．左归丸与左归丸对EAE大鼠淋巴细胞亚2006，441(7090):231．群和NK细胞的影响［J］．中华中医药杂志，2009，24(3):310．［12］OkudaY，SakodaS，BernardCC，etal．IL－6－deficientmiceareresis-［4］樊永平，宋丽君，叶明．左归丸和左归丸对自身免疫性脑脊髓炎itanttotheinducionofexperimentalautoimmuneencephalomyelitispro-大鼠中枢神经系统淋巴细胞亚群免疫组化表达的影响［J］．中国中vokedbymyelinoligodendrocyteglycoprotein［J］．IntImmunol，1998，医药信息杂志，2010，17(6):44．10:703．［5］ZhuYN，ZhongXG，FengJQ，etal．PeriplosideEinhibitsexperimental［13］ZhouL，LopesJ，ChongMetal．TGF－β－inducedFoxp3inhibitsallergicencephalomyelitisbysuppressinginterleukin12－dependentTh17celldifferentiationbyantagonizingＲOＲgammatfunction［J］．Na-CCＲ5expressionandinterferon－gamma－dependentCXCＲ3expres-ture，2008，453(7192):236．sioninTlymophocyte［J］．JPharmacolExpTher，2006，318(3):1153．［14］WahlSM，WenJ，MoutsopoulosN．TGF－beta:amobilepurveyorofim-［6］ZhangGX，GranB，YuS，etal．Inductionofexperimentalautoimmunemuneprivilege［J］．ImmunolＲev，2006，213(1):213．九种燕窝中唾液酸含量的紫外可见分光光度法测定11111，2*王羚郦，吴国洪，邱子博，麦玮倩，赖小平(1．广州中医药大学中药学院，广东广州510006;2．东莞广州中医药大学中医药数理工程研究院，广东东莞523808)摘要:目的测定九种燕窝中唾液酸含量，探索燕窝中唾液酸的范围值。方法利用燕窝中唾液酸与酸性茚三酮形成稳定－1的物质，在470nm处有最大吸收峰的特点进行测定。结果唾液酸浓度在0～70μg·ml范围内与吸光度呈良好的线性关系，测得血燕、白燕、黄燕唾液酸百分含量分别为11．0367%，6．8100%，10．1733%，但UV－Vis法测得值比HPLC法稍低。结论该方法精密度良好，重复性良好，回收率满意，但操作步骤繁琐，燕窝中唾液酸含量测定方法需进一步改善。关键词:燕窝;唾液酸;紫外可见分光光度法DOI标识:doi:10．3969/j．issn．1008-0805．2013．11．002中图分类号:Ｒ284．2文献标识码:A文章编号:1008-0805(2013)11-2571-02Thedeterminationofsialicacidinninekindsofediblebird＇snestbyUV－Visspectrome-try11111，2*WANGLing－li，WUGuo－hong，QIUZi－bo，MAIWei－qian，LAIXiao－ping(1．GuangzhouUniversityofChineseMedicine，Guangzhou510006，China;2．ＲesearchInstituteofMathematical收稿日期:2013-01-12;修订日期:2013-07-08基金项目:国家自然基金面上项目(No．81173498)作者简介:王羚郦(1981-)，女(汉族)，重庆人，现任广州中医药大学中药学院学副教授，博士学位，主要从事中药新药开发研究工作．*通讯作者简介:赖小平(1960-)，男(汉族)，广东饶平人，现任广州中医药大学中药学院院教授，博士研究生导师，博士学位，主要从事中药学研究工作．·2571· 时珍国医国药2013年第24卷第11期LISHIZHENMEDICINEANDMATEＲIAMEDICAＲESEAＲCH2013VOL．24NO．11EngineeringofGuangzhouUniversityofChineseMedicineinDongguan，Dongguan523808，China)Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentofsialicacidinninekindsofediblebird＇snestandstudythescopeofthecontentofsialicacidinediblebird＇snest．MethodsSialicacidandacidninhydrincouldformastablematerialwithamaximumabsorptionpeakcharacteristicsinthe470nm，whichcanbeusedtodeterminatethecontentofsialicacid．ＲesultsTheconcentrationofsialic－1acid(0～70μg·ml)hadagoodlinearrelationshipwiththeabsorbance．Andthecontentofsialicacidinblood，white，yellowediblebird＇snestwere11．0367%，6．8100%，10．1733%．Also，theresultsthatUV－VismeasuredwerelowerthanHPLC＇s．Con-clusionTheprecisionandrepeatabilityofthismethodaregood;therecoveryissatisfied．Buttheoperationstepswerecomplex．Sothedeterminationofcontentofsialicacidinediblebird＇snestneedsfurtherstudy．Keywords:Ediblebird＇snest;Sialicacid;UV－Vis－1燕窝为雨燕科(Apodidae)金丝燕属Collocalia的几种燕类分成1mg·ml的标准溶液，分别稀释成100，200，300，400，500，－1泌的唾液与其绒羽混合凝结于悬崖峭壁上的巢窝，具有养阴润600，700μg·ml;分别精密移取1ml，按“2．1”项下处理，照紫燥、补中益气、入胃补脾、化痰止咳等功效，具有促进细胞生长、加外可见分光光度法，在470nm波长处测定吸光度(A)，以A为纵强免疫力和抗流感病毒的作用。燕窝是名贵滋补珍品，市场上假坐标，浓度C为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为:A=冒伪劣产品很多，行业内没有统一的检验标准，使其真假难辨。0．0203C－0．0058，r=0．9990。结果表明，唾液酸浓度在0～70－1因此对其主要成分的含量分析，对质量标准的建立具有重要的研μg·ml范围内与吸光度呈良好的线性关系。究意义。燕窝富含蛋白质、糖类和矿物质，其主要成分是唾液酸－12．4精密度试验精密移取200μg·ml标准品溶液1ml，按［1～4］糖蛋白。唾液酸(SialicAcid．SA)是一族神经氨酸的衍生“2．1”项下方法进行处理，照紫外分光光度法，在470nm波长处物，是细胞膜上糖蛋白和糖脂的重要成分，目前主要采用HPLC测定吸光度，重复6次，结果的ＲSD为1．65%，表明该方法精密［5］法对其含量进行测定，而UV－Vis法相对较少。为了丰富UV度良好。－Vis对唾液酸含量测定的研究，并为建立燕窝的质量标准提供2．5重复性试验精密称取燕窝粗粉6份各50mg，按”2．2“项［6，7］研究基础，笔者参考有关资料，采用UV－Vis法对9种不同下方法进行处理，照紫外分光光度法，在470nm波长处测定吸光品种燕窝进行唾液酸的含量研究。度，重复6次，结果的ＲSD为1．79%，表明该方法重现性良好。1试药与仪器2．6稳定性试验取同一份供试品溶液，分别于0，15，30，60，1．1试药N－乙酰－神经氨酸(N－Acetyl－Neuraminic)标准品120，180min时测定其吸光度，其ＲSD为0．5%，表明该样品液在(纯度≥99%)，购自Sigma公司;硫酸氢钠，冰醋酸，乙酸锌，亚铁180min内稳定。氰化钾，茚三酮，均为分析纯;实验用水为怡宝牌纯净水。2．7回收率试验精密称取已知唾液酸含量的燕窝样品25mg，1．2仪器CP225D型sartonius十万分之一电子天平;BSA2245分别加入含0．8，1．0，1．2mg的唾液酸溶液，平行3次，按“2．2”－CW型万分之一电子天平;JJ500型电子天平;HH－ZK4型恒项下方法进行处理，照紫外可见分光光度法，在470nm波长处测温水浴锅;BlueStar紫外可见分光光度计、80－2医用台式低速离定吸光度，计算回收率。结果见表2。心机。表2加样回收试验结果1．3样品燕窝市售品和采集品，所有样品均经广州中医药大学加入量/回收量/回收率平均回收率ＲSD新药开发研究中心赖小平教授鉴定。见表1。序号mgmg(%)(%)(%)表1燕窝样品来源信息表10．8520．98115．4110．34．120．8520．91106．8序号名称产地(来源)30．8520．93108．71血燕，燕碎－41．0651．0598．4100．11．52血燕，燕条新加坡龙标燕窝私人有限公司51．0651．07100．73血燕，燕角，洞燕马来西亚沙巴州61．0651．08101．34白燕，燕碎，洞燕－71．2781．32103．6105．93．65白燕，燕盏，屋燕印尼苏门答腊岛棉兰81．2781．33103．86白燕，燕碎－91．2781．41110．37黄燕，燕盏，官燕新加坡龙标燕窝私人有限公司8黄燕，燕饼，官燕新加坡龙标燕窝私人有限公司2．8含量测定按上述方法，检测9种燕窝的唾液酸含量。结果9黄燕，燕盏，洞燕马来西亚沙巴州见表3。2方法与结果2．9对唾液酸含量测定结果的UV－Vis法和HPLC法比较分析2．1对照品溶液取唾液酸标准品溶液适量于10ml量瓶中，加结果见表4。结果表明，t－配对样品检验求得的t值分别为:血3ml冰醋酸和2ml酸性茚三酮试液，水浴，加热10min，速冷后燕1．064，黄燕1．483，白燕2．419均小于t0．05(3)=3．182，定容至刻度，即得。P＞0．05，UV－Vis法和HPLC法在α=0．05水平上存在不显著2．2供试品溶液精密称取燕窝粗粉50mg于25ml量瓶中，加性差异。入10ml50%冰醋酸溶液，水浴，加热1h，取出，放冷，定容至刻3讨论度，摇匀;加入0．5g乙酸锌和0．25g亚铁氰化钾使溶解，摇匀，针对燕窝中唾液酸含量测定研究，本文采用紫外可见分光光－1静置，取上层清夜约10ml，离心10min(3500r·min)，精密移度法测定燕窝中唾液酸的含量，并与实验室开展的HPLC法测定取上清液3ml于10ml量瓶中，按“2．1”项下方法进行制备，即燕窝中唾液酸的含量进行比较，为建立燕窝真伪鉴别质量标准提得。供一定的依据。2．3线性关系考察精密称取唾液酸标准品适量，加水溶解，使3．1水解条件燕窝中唾液酸的提取是其含量测定的关键步骤。·2572· LISHIZHENMEDICINEANDMATEＲIAMEDICAＲESEAＲCH2013VOL．24NO．11时珍国医国药2013年第24卷第11期［6，7］笔者参考相关文献，选择25%、50%、75%的醋酸溶液和0．5法测得值稍低，分析其原因可能是:①UV－Vis法在提取唾液酸－1mol·L硫酸氢钠溶液作为提取溶剂，分别水解10，20，40，60，的过程中需加入沉淀剂对样品进行纯化，以避免蛋白质与酸性茚－1120min;结果表明，50%醋酸溶液水解60min和0．5mol·L硫三酮试液反应，由于沉淀出来的物质较多，因此推测纯化过程部酸氢钠溶液水解40min对燕窝中唾液酸的提取效果最佳。综合分唾液酸被其吸附，以致唾液酸的含量偏低;②由于衍生化原理考虑，选取50%醋酸溶液作为提取溶剂以避免引入杂离子。不同，唾液酸与酸性茚三酮的显色反应可能存在动态平衡，限制了唾液酸的反应量。③纯化未完全，提取液中含有某些物质干扰表3含量测定结果酸性茚三酮和唾液酸的反应，造成结果偏低。在t－配对检验法UV－Vis法HPLC法品种序号对两种方法进行统计分析发现，UV－Vis法与HPLC法比较不存百分含量(%)ＲSD(%)百分含量(%)ＲSD(%)在显著性差异(P＞0．05)。血燕113．152．512．063．8211．391．415．080．53．4结论综上所述，本方法精密度良好，重复性良好，回收率满38．571．510．413．6意。测定结果准确稳定，方法可靠。同时可以作为燕窝真伪鉴别白燕44．862．45．480．4和唾液酸含量测定的方法。但是其同时也存在一定的局限性，如512．744．414．880．2步骤繁琐，可造成一定的误差。因此，笔者认为，建立燕窝的质量62．831．63．591．8标准，需继续探索专属性强，方法更简便，重现性好，结果准确的黄燕711．40．914．112．2方法。89．471．08．865．499．651．713．161．1参考文献:n=3［1］蒋华嵩．真假燕窝的鉴别［J］．中草药，2000，31(1):58．表4UV－Vis法与HPLC法比较［2］胡雅妮，李峰．燕窝的研究进展［J］．中国中药杂志，2003，28百分含量均值(%)(11):1003．品种偏差tPUV－Vis法HPLC法［3］任贻军，王振军，李万江．燕窝的鉴别研究概况［J］．云南中医学院血燕11．036712．51671．48001．0640．399学报，2009，32(8):64．白燕6．81007．9833－1．1733－2．4190．137［4］林洁茹，周华，赖小平．燕窝研究概述［J］．中药材，2006，29(1):黄燕10．173312．0433－1．8700－1．4830．27685．［5］王慧，倪坤仪，王玉．燕窝中唾液酸的含量测定［J］．药物分析3．2鉴别研究本文对伪品燕窝猪皮和银耳同法处理，结果发现杂志，2006，26(9):1251．两者在470nm处均无吸收峰，这点与正品燕窝有明显的差异，故［6］黄雪珍．分光光度法鉴别燕窝真伪及半定量测定燕窝的百分含量可用于真假燕窝的鉴别。［J］．海峡药学，2007，19(8):78．3．3与HPLC比较研究本实验室也完成了HPLC法测定唾液［7］黄华军，奚星林，陈文锐，等．分光光度法测定燕窝及其制品中燕窝酸的含量，通过比较两种方法发现，UV－Vis法测得值比HPLC含量［J］．广州食品工业科技，2003，19(3):68．QSＲＲ研究用于玫瑰花挥发性化学成分色谱保留值的预测陈艳，李靖(徐州工程学院化学化工学院，江苏徐州221111)摘要:目的研究玫瑰花挥发性化学成分的分子结构和其色谱保留值之间的定量构效关系。方法基于化学拓扑理论，计mv算40种玫瑰精数见不鲜中挥发性化合物的三类拓扑指数，Kier价分子连接性指(Xp)、分子形状指数(Km)和分子电性距离矢量(mj)。通边最佳子集回归，建立标题化合物定量结构－色谱保留时间相关(QSＲＲ)模型，得到最佳四元回归方0v2v程为:tＲ=3．206Xp－1．082Xp－0．62k4－0．828m1－3．799。结果所建模型具有较高的相关系数。结论通过Jackknife法和交互检验证明该模型具有总体稳健性和良好的预测能力，该法应用于玫瑰精油挥发性组分性质的研究取得了满意的结果。关键词:玫瑰花精油;挥发性成分;拓扑指数;色谱保留时间;构效关系DOI标识:doi:10．3969/j．issn．1008-0805．2013．11．003中图分类号:Ｒ284．1文献标识码:A文章编号:1008-0805(2013)11-2573-04收稿日期:2013-01-05;修订日期:2013-06-11基金项目:国家自然科学基金(No．21272095)作者简介:陈艳(1968-)，女(汉族)，苏州太仓人，现任徐州工程学院化学化工学院教授，硕士学位，主要从事污染物、药物和食品构效关系研究工作．·2573·'