分光光度法间接测定白酒中甜蜜素

'分光光度法间接测定白酒中甜蜜素 分光光度法间接测定白酒中甜蜜素 分光光度法间接测定白酒中甜蜜素 分光光度法间接测定白酒中甜蜜素 分光光度法间接测定白酒中甜蜜素 分光光度法间接测定白酒中甜蜜素 中国卫生检验杂志2006年9月第16卷第9期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,Sep2006;Vol16No91073分光光度法问接测定白酒中甜蜜素黄会秋(浙江省平阳县疾病预防控制中心,浙江平阳325400)【化学测定方法】[摘要]目的:探讨研究一种适用于白酒样品中的甜蜜素测定方法.方法:用乙醚将甜蜜素从酸化后的样品中提取出来,挥去乙醚,通过测定其与亚硝酸酯化后生成的硫酸根含量间接测定甜蜜素.结果:线性范围0～0.35g/kg,方法最低检出限0.02g/kg,加标回收率为86.7%一105%,精密度RSD为8.58%(0.060g/L),3.75%(0.250g/L)与3.66%(0.500g/L).结论:方法成功应用于白酒样品的测定,结果满意.[关键词】分光光度法;白酒;甜蜜素[中图分类号]0657.3[文献标识码]A[文章编号]1004—8685(2006)o9—1073～02甜蜜素的化学名为环己基氨基磺酸钠,是目前较为常用的甜味剂,甜度为蔗糖的30～40倍,其测定多根据与亚硝酸作用后,生成环己醇亚硝酸酯,然后经气相色谱或高效液相色谱测定.白酒中由于含有环己醇及环己基等类似物质,与亚硝酸反应,也能生成环己醇亚硝酸酯,因此传统的色谱法不适用于白酒中的甜蜜素测定.鉴于此,邵铁锋等人用次氯酸钠将甜蜜素衍生化后,采用314nm的紫外高效液相色谱法测定酒中甜蜜素,而秦防等以液质联用法对黄酒中的甜蜜素测定做了研究,此外离子色谱法也可应用于白酒.本文采用乙醚将甜蜜素从酸化后样品中提取出来,挥去乙醚,室温下甜蜜素与亚硝酸酯化后,分光光度法测定由磺酸根转变而来的硫酸根含量,从而间接测定甜蜜素含量.1材料与方法1.1仪器752紫外光栅分光光度计(上海第三分析仪器厂).1.2试剂甜蜜素标准溶液(10mg/m1):自制,经高氯酸标定;亚硝酸钠(200g/L);铬酸钡悬浊液:称取6.5g铬酸钡,加入200m1乙酸一盐酸混合液中(5.0mol/L乙酸与0.10mol/L盐酸等体积混合)制成悬浊液,保存在聚乙烯瓶中;钙一氨溶液:称取0.4g氯化钙溶于200m16mol/L氨水中,密闭保存;乙醚,氯化钠,氨水,无水乙醇为分析纯;盐酸为优级纯;水电导率<2.5la,S/cm.1.3样品测定称取10.0g白酒样品置25m1比色管中,水浴去除酒精(大约余2—3m1),加入0.5m1盐酸(1+1)与1g氯化钠,摇匀后,加入25.0rnl乙醚,振摇1rain,分层后吸取15.0m1乙醚提取液过无水氯化钙滤入25Inl比色管,用少量乙醚(2m1左右)洗无水氯化钙,并人比色管,置40~C一45~C水浴挥干,加水至10m1刻度线,加入1.0ml亚硝酸钠(200g/L)与1.0ml盐酸(1+2),室温(20~C左右)放置10rain,加入0.50ml氨水(1+1),混匀,加入2.0ml铬酸钡悬浊液,混匀,[作者简介]黄会秋(1971一),男,主管技师,主要从事理化检验工作.3rain后加入2.0ml钙一氨溶液,混匀,加入8.0ml无水乙醇,加水至刻度,剧烈振摇1rain,过滤,弃去初滤液5—10m1,收集续滤液10m1左右,于420nm波长,以纯水为参比,用3cm比色皿,测定吸光度.同时吸取10.0m1水按法做空白试验.2结果与讨论2.1酯化条件2.1.1酯化时间各吸取0.500g/L甜蜜素标液2.0om1于8支25m1比色管中,加水至l0m1刻度线,加入1.0m1亚硝酸钠(200g/L)与1.0m1盐酸(1+2),分别酯化(室温20~C一22~C)1,3,5,7,10,15,20,30rain,按法检测,观察吸光度的变化情况,发现5rain后,己酯化完全,慎重起见,本法选择酯化时间为10rain.2.1.2亚硝酸钠的量各吸取0.500g/L甜蜜素标液2.0om1于5支25m1比色管中,加水至10m1刻度线,加入1.0m1盐酸(1+2),分别加入5个浓度系列的亚硝酸钠溶液(10,50,100,200,300g/L)1.0m1,按法检测,观察吸光度的变化情况,发现亚硝酸钠溶液达200g/L后,吸光度已至最高值,符合要求,遂采用.2.2酯化液的酸碱控制铬酸钡与硫酸盐在碱性条件下不易生成硫酸钡沉淀及铬酸根离子,在酸性条件下,除得到二者外,同时会部分溶解,生成微量的铬酸(H:cro4)及铬酸氢根离子(HCr04-),二者皆显黄绿色,如不调至适当的碱性,则会使检测结果偏高.由此可知,酯化液的酸碱度会对后续的测定有影响.本实验条件下,酯化液近中性,但为了尽量去除和掩盖这方面的影响,将文献中加入的铬酸钡悬浊液和钙氨溶液二者酸碱的量都提高1倍,具体做法是:铬酸钡悬浊液的酸浓度提高5倍,量从5.0ml降为2.0ml,钙氨溶液的实验用量从1.0ml增至2.0m1.2.3标准曲线与检出限取8支25m1比色管,分别加入甜蜜素标液(0.500g/L)0,0.20,0.40,0.70,1.O0,1.50,2.O0,4.O0m1,下同1.3”加水至10m1刻度线,……”,制得标准曲线A=0.319X甜(mg)+0.027.r=0.9994,据文献硫酸盐的最低检测限为1074中国卫生检验杂志2006年9月第16卷第9期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology.Sep2006;Vol16No95.0mg/L,经换算,本法甜蜜素的最低检出限为0.02g/L,线性范围为:0～0.35g/L.日常工作中,可通过增加或降低取样量与乙醚提取液相对 用量,来降低检测下限与扩大检测上限,满足实测需要.2.4方法精密度往空白酒样中添加适量甜蜜素标液,制得浓度分别为0.060g/L(1#),0.250g/L(2#)与0.500g/L(3#)的3个样品,按法各平行测定6次,考查方法精密度,具体见表1.RSD分别为8.58%(0.060g/L),3.75%(0.250g/L)与3.66%(0.500g/L).表1精密度试验2.5回收率试验由于实测4份样品皆无甜蜜素添加,便将市售甜蜜素随机称取0.02～0.3g加至500ml酒样中,制得4份试样.放置3d后,按法逐一测定甜蜜素含量,作为本底值,然后大致各按其0.5,1,2倍添加甜蜜素标液,做回收率试验,具体见表2.回收率在86.7%～105%之间.2.6干扰物质的处理本法干扰物质为样液中含有的s0:一,s0一等物质.so,一,s0;一酸化后,极性很强,不易被乙醚提取,但会被微溶于乙醚中的微量水所携带,可通过无水氯化钙去除.3小结本实验由于只需具备分光光度计即可,操作上没有太高表2回收率试验的难度,故而对大多数基层实验室在开展白酒中的甜蜜素检测方面无疑是一个较好的选择.另外,本法也可应用于其它食品的检测,但客观上,较之于色谱检测,在样品的预处理操作上略显繁琐,此乃不足之处.[参考文献】[1]GB/TS009.97—2003.食品中环己基氨基磺酸钠的测定[s].[2]张秀尧.反相高效液相色谱法测定食品中甜蜜素[J].理化检验一化学分册,2000,36(1O):451—452,454.[3]邵铁锋,李雪岷,陈勤伟.高效液相色谱法测定酒中甜蜜素[J].中国酿造,2004,(12):31—32.[4]秦晴,王林祥,陶冠军.液质联用法测定黄酒中糖精钠和甜蜜素[J].酿酒科技,2005,(9):84—86.[5]钟志雄,染春穗,姚敬.离子色谱法测定食品中的甜蜜素和本甲酸[J].中国卫生检验,2005,15(9):335—336.[6]生活饮用水卫生规范[S].2001.(收稿日期:2006—05—12)(上接第1055页)本法乙醇浓度2000mg/L以下线性良好,且具有较好的精密度和准确度,特别适合于血清乙醇浓度在500mg/L左右的个体血清中乙醇浓度的分析.乙醇易挥发,采血后应及时分离血清并测定.每次测定用新开瓶的校准物校正.[参考文献][1]伏建峰,史清海,路西春,等.乙醇脱氢酶法测定血浆乙醇[J].北方国防医学杂志,2005,26(5):345—347.[2]王向阳.乙醇氧化酶法测定血清中乙醇含量[J].临床检验杂志,2002,20(4):208—209.[3]JainNC.Di~*ctblood—injectionmethodforgaschromatographicdeter.ruinationofalcoholsandvolatilecompounds[J].ClinChem,1971,17(2):82—85.[4]EP6一AEvaluationofthelinearityofquantitativeanalyticalmethod.Wayne,PA:NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards,】999.[5]EP5一AEvaluationofprecisionperformanceofclinicalchemistryde?vices.Wayne,PA:NationalCommiueeforClinicalLaboratoryStand-ards,1999.[6]HadjiioannouTP,HadjiioannouSI,AveryJ,eta1.Automatedenzymicdeterminationofethanolinblood,serumandurinewithaminiaturecentrifugalanalyzer[J].ClinChem,1976,22(6):802—805,[7]JungG,FerardG.Enzyme—coupledmeasurementofethanolinwholebloodandplasmawithacentrifugalanalyzer[J].ClinChem,1978,24(6):873—876.[8]KapurB,IsraelY.Adipstickmethodologyforrapiddeterminationofalcoholinbloodfluids(abstracts)[J].ClinChem,1983,29(6):1178.[9]PreneipeL,IaceheaE,ManzatiC.Enzymaticethanolassay:aneweolorimetriemethodbasedonmeasurementofhydrogenperoxide[J].ClinChem,1987,33(4):486—489.(收稿t3期:2006—04—24)'