紫外分光光度法应用举例

'紫外分光光度法应用举例岛津uv-2401紫外分光光度计操作程序v操作方法1.1开启计算机、主机和仪器初始化。1.1.1 打开主机电源，计算机电源。1.1.2 进入Windows桌面，双击“Shimadzu",再双击“UV-2401”，即进入UV-2401操作屏幕。仪器开始逐项自检，全部通过后，屏幕显示应用窗口。自检通过后有蜂鸣声提示。自检全部完成后，方可继续操作。在自检时，如各项检查均正常，界面在各项检查项后均显示为绿色图标；如存在故障，则该检查项后显示红色图标，此时应排除故障后，方能进行测定。v1.2  光谱扫描操作1.2.1 选择主菜单“Acquire Mode"下子菜单“Spectrum"项，选择主菜单“Configure"项下子菜单“Parameters"项，设置扫描参数：扫描速度，波长范围，测量方式，狭缝宽度，采样间隔。按“OK”完成参数设定，回到测定界面。1.2.2 参比池和样品池均盛以空白溶液，置于样品室内，关上样品室门。1.2.3 选择“Baseline”，开始进行扫描，基线校正完毕后，样品池换上供试品溶液1.2.4 按“start”开始扫描，扫描结束，出现文件名对话框，选择“save”保存或“discard”删除数据。如测多份样品，更换样品溶液后点击“start”即可。1.2.5 检测峰，选择“manipulate”下“peakpick”，选择“output”下“savetable”保存数据为文本文档。 1.2.6 将光谱图、文本文档（上述保存的文档）、测定参数等打印在一起。选择“Presentation”菜单下“plot”，在A、B、C、D项后选择要打印内容及文件名，然后在1、2、3、4位置排好版，按“print”即可。1.3  定量测定操作1.3.1 选择“Acquire Mode”项下“Quantitative”项，设置定量测定参数：定量方法，波长，记录范围，狭缝宽度，重复次数，浓度范围。按“OK”完成参数设定，回到测定界面。1.3.2 参比池和样品池均盛以空白溶液，置于样品室内，关上样品室门。选择“Auto Zero”，仪器自动调零。1.3.3 将标准品加入比色皿中，置于样品室内，选择“Standard”，选择“Read”，出现“Edit Standard”对话框，输入标准品溶液浓度，依次测定一系列标准品的浓度，建立工作曲线。1.3.4 将样品加入比色皿中，置于样品室内，选择“Unknown”，选择“Read”，计算机自动计算出样品数据。1.3.5 测定结束时，从“File”菜单中选择“Save as”输入文件名。1.3.6 单击“Exit”，退出主屏幕。v2.  使用注意事项2.1 仪器的光学系统是仪器的心态部分，切勿轻易拆卸，要保持内部干燥、绝缘良好。2.2 样品室应保持干燥，防止试样交叉污染。试样不宜长时间放置在样品室。挥发性试样应在吸收池上加盖。2.3  待测溶液应呈澄清状，不得有沉淀、分层或为悬浮液，否则影响测定结果。实验紫外分光光度法测定水中总酚的含量v酚类是工业废水中一种有害物质，如果流入江河，会使水质受到污染，因此在检验饮用水的卫生质量时，需对水中酚含置进行测定。v－、目的与要求v1．掌握紫外分光光度法测定酚的原理和方法。v2．进一步熟悉紫外分光光度计的基本操作技术。v二、方法原理v具有苯环结构的化合物在紫外光区均有较强的特征吸收峰，在苯环上的第一类取代基（致活基团）使吸收更强，而苯酚在270nm处有特征吸收峰，其吸收程度与苯酚的含置成正比，因此可用紫外分光光度法，根据Lambert－Beer定律直接测定水中总酚的含量。vA=ε·b·cv三、仪器与试剂v1．紫外分光光度计；v2．石英比色皿（lcm）；v3．苯酚标准溶液，250mg·L-l：准确称取0.0250g苯酚于250mL烧杯中，加去离子水20mL使之溶解，移入100mL容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。v四、内容与步骤v1．标准系列溶液的配制取5支25mL容量瓶，分别加人1.00，2.00,3.00，4.00和5.00mL的苯酚标准溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀待测。 v2．吸收曲线的测量取上述标准系列溶液中任一溶液，用lcm石英比色皿，以蒸馏水为参比溶液，在220～350nm波长范围内，每5nm测量一次吸光度。v3．标准曲线的制作v在苯酚的最大吸收波长（λmax）下，用1cm石英比色皿，以蒸馏水为参比溶液，测量标准系列溶液的吸光度。v4．水样的测定v在与测量标准系列溶液相同的条件下，测量水样的吸光度。五、数据记录与处理v1．列表记录不同波长下同一标准溶液的吸光度值，以吸光度为纵坐标，波长为横坐标绘制吸收曲线，找出λmax,计算其εmax。2．列表记录标准系列溶液与水样的吸光度，以吸光度为纵坐标，标准系列溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线；根据水样的吸光度从图中查找出其相当于标准溶液的浓度，并算出水样中苯酚的含量（'