环境生态学实验(四)

2021/8/11实验四紫外辐射对植物叶片叶绿素a、b含量及比例的影响环境生态学实验课程\n目录4实验目的1235实验原理材料、仪器及试剂实验方法结果计算\n1.实验目的比较经过紫外辐射的植物和对照组植物叶绿素总量及叶绿素a、b比值有何差异；掌握分光光度计的原理及使用方法。通过测定植物在人工模拟紫外辐射条件下叶绿素a、b含量变化及其比率的变化，以了解大气污染对植物的影响及其危害。\n通过植物形态与生理方面的变化来监测大气污染。\n2.实验原理★叶片是植物与外界进行气体交换的主要通道。★植物受紫外辐射时，植物叶片将在生理和形态上产生反应。\n形态方面：急性症状：叶片坏死、颜色由绿变黄、变白等；慢性伤害：叶片颜色由绿变棕黄、脱绿和早熟落叶等。\n生理生化方面：例如：叶绿素含量及叶绿素a/b；各种酶的活性；光合产物的运输；光合作用和呼吸作用的变化；代谢物中数量和质量的变化；……\n叶绿素a、b均不溶于水而溶于有机溶剂，具有一定的光学活性，表现出一定的吸收峰。叶绿素a、b在红光区的最大吸收峰分别为663nm和645nm，据朗伯－比尔定律：D＝kC求出叶绿素a、b及总量。D663=82.04Ca+9.27Cb…………………………………………………(1)D645=16.75Ca+45.6Cb…………………………………………………(2)解联立方程(1)、(2)则得：Ca(mg/L)=12.7D663-2.69D645…………………………………(3)Cb(mg/L)=22.9D645-4.68D663…………………………………(4)叶绿素总量C(mg/L)=Ca＋Cb=20.2D645＋8.02D663……(5)\n材料白菜、蚕豆、小麦叶片。仪器研钵、烧杯、漏斗、滤纸、棕色容量瓶、分光光度计、天平、剪刀、移液管。试剂丙酮。3.材料、仪器及试剂\n4.实验方法采集受过紫外辐射的植物叶片和正常叶片，进行叶绿素的测定。\n称取1g左右的鲜叶，剪碎，放入研钵中。加入10ml80%丙酮研磨成匀浆，再加10ml80%丙酮洗涤残渣中的色素，过滤。滤液定容到50ml的容量瓶中。4.实验方法\n用移液管取1ml提取液，在1cm比色皿中注入叶绿素提取液。另以80%的丙酮作为参比溶液。根据实验要求，选用相应的波长在分光光度计上测定光密度。4.实验方法\n5.结果与计算Ca(mg/L)=12.7D663-2.69D645Cb(mg/L)=22.9D645-4.68D663叶绿素总量C(mg/L)=Ca＋Cb=20.2D645＋8.02D663\n注意事项！进行紫外辐射处理叶片的时候，注意安全，避免用手直接接触叶片。提取叶绿素时要避光，以免叶绿素受光分解。\n注意事项！★使用分光光度计要用分辨率较高的分光光度计。分辨率低的测定波长的半波宽大，不足区分叶绿素a、b的吸收峰，造成读数偏低，a、b值偏小。★用分光光度法测定物质含量时，分光光度计的波长调节要准确，参比杯与测定杯的透光率要一致。\n注意事项！★稀释过程中应用丙酮进行稀释。★使用分光光度计时，在不同的波长下测量之前应对参比液进行重新调整。★要选择有代表性的成熟叶片，避免采集老叶、嫩叶及表面含有蜡质叶片，注意采集自己能够命名的植物叶片。\n思考题提取叶绿素为什么要用丙酮？能否用蓝光对叶绿素a、b进行定量分析，为什么？在磨碎过程中为什么加入少许碳酸钙？对色素提取液的稀释，能否用蒸馏水进行稀释？为什么？\nThankYou!