分光光度法测定海参多糖含量方法的改进

'维普资讯http://www.cqvip.com2008年8月云南化工Aug．2008第35卷第4期YunnanChemicalTechnologyV01．35．No．4分光光度法测定海参多糖含量方法的改进李燕妮，车业娜，刘国静(滨州医学院药学院，山东烟台264003)摘要：对天青l测定海参多糖的方法进行了改进，在前人研究的基础上优化了标准曲线，确定了该曲线的量程范围，使其具有专署性、精确性的同时，真正具备了可操作性。关键词：海参酸性粘多糖；天青I试剂中图分类号：TQ95文献标识码：A文章编号：1004—275X(2008)04-0027-02ImprovementontheDeterminationofPolysaccharidesfromSeaCucumberbySpectrophotometryLIYan·ni，CHEYe-na，LIUGuo-jing(DepartmentofPharmacy，BinzhouMedicalCollege，Yantai264003，China)Abstract：Detenninationofpobsaccharidesfromseacucumberbyazurol1wasimproved，andthestandardchivewereoptimized．Thedetectablerangewasdetermined，andthemethodwasselective，accurateandoperative．Keywords：seacucumberacidiemucopolysacchar．d；azurolIreagent；海参为棘皮动物门(Echindermata)海参纲条件。本文完善了此法，使其具有可操作性。(Holothuri—oidea)盾手目(Aspidochirota)的动物。l实验部分海参作为药用最早记载于《本草从新》，其味鲜美，特别是海参中多糖类成分具有提高机体免疫功能1．1主要试剂和仪器和抗癌等作用。：但由于海参多糖的结构复杂，海参多糖标准溶液：精密称取海参多糖标准糖基只是其分子的一部分，因此要对不同的多糖品以水配制成0．26mg／mL溶液。天青I试液：取进行确切的定量分析，还有一定难度。常用的分天青I试剂0．5g，以水稀释至500mL，放置一星光光度法测量多糖含量易受到其他杂质干扰，所期。过滤除去不溶物，得天青I储备液，冷藏保以到现在为止还没有一种比较满意的测量方法。存。临用时取储备液1mL加水至加20mL。海参天青I试剂法测定海参多糖含量的原理是利用天多糖样品：本实验室自制。GS54型紫外可见分光青I试剂与海参多糖特异性结合呈蓝紫色，在光度计。515nm波长处测定吸光值?此法可以精确地测定1．2实验步骤海参多糖的含量，检出限为5g，并且专署性极1)标准曲线绘制强。天青I试剂法简洁灵敏，但是有较多的限制精密量取海参多糖标准溶液10．0、20．0、收稿日期：2008-05—15基金项目：滨州医学院科研启动基金项目(BY2005KYQD28)作者简介：李燕妮(1980一)，女，山西临汾人，硕士，主要从事天然物质的分离提取。 维普资讯http://www.cqvip.com·28·云南化工2008年第4期30．0、40．0、50．0ixL分别加水至50L，依次加人量瓶中以水定容，摇匀，得样品液。量取25L样天青I试液5．0mL，混匀后10rain内于515nm波品液，加入天青I试液5．0mL，混匀后10min内于长处测定吸光值，以水为空白对照，绘制标准曲515nm波长处测定吸光值，以水作为空白对照。线，经整理后结果如下：如果样品的吸光值在量程范围内，则参照标准曲=0．0448x+0．2501，R=0．9986线计算多糖含量；否则将稀释样品的浓度作适当式中：y为吸光值(A)；为多糖质量浓度(Ixg／mL)调整，以使吸光值最终落在量程范围内。2)测定方法量程的确定2．3加标回收实验精密量取海参多糖标准溶液20．0、40．0、分别取海参多糖标准溶液50L，连续测定560．0、80．0、100．0、120．0、140．0L，依次加入天青次，结果为：此方法精密度RSD值1．5％，回收率I试液5．0mL，混匀后10min内于515nm波长处范围是(96．0±2．0)％。测定吸光值，以水为空白对照，绘制吸光度曲线。2．4稳定性实验结果见图1。取质量浓度为0．11mg／mL的自制海参多糖样品溶液1．00mL，加人天青I试液50mL，混匀后平均分成1O份，每隔1h测定1次含量，结果含量O．6的RSD值0．58％，表明此方法的成色物质在10hO．5内稳定。3结论0．2O．1天青I试剂测定海参多糖含量方法在量程范O围内线性关系良好，较其他分光光度法能够较好2040608OlO0l20140多糖溶液的体积／uL地避免杂质的影响。须要注意的是：其一，多糖溶液在进行测定之前必须先除盐，并且调整样品溶液的pH值至中性。金属离子的存在或酸碱会严重地干扰测定。图1多糖浓度与吸光值的关系其二，测定时的天青I试液在515nm处吸收Fl毋●re1il~lationb．嗍concentrate0fp0Iysjcla喇eandabsorption值应为0．25-t-O．01，必要时用水或储备液进行调由图1可知，在一定的天青I试液浓度下，随整。天青I试液的浓度不能太大或太小：如果浓着多糖加入量的增大，吸光值会达到饱和，其变化度太大，其本身的吸光值就超过最佳测量范围，增脱离线性范围。所以此方法的测定量程为多糖20加系统误差；如果浓度过小，则导致量程减小，也～8OL，质量浓度为0．26mg／mL，即含5．2～会增加系统误差。因此经过使用不同浓度的天青20．8g多糖，相对应的吸光值为0．29～0．44。I试剂进行实验，确定天青I试液在515nm处吸2样品分析收值为0．25±0．01为宜。2．1多糖样品的提取将刺参匀浆，加入蛋白酶完全水解，离心后浓参考文献：缩，用Sevage法去除蛋白质后离心。得到的上清[1]樊绘曾，陈菊娣，林克忠．刺参酸性粘多糖的理化性质、毒性液双氧水脱色后用乙醇沉淀多糖，经凝胶柱纯化及抗肿瘤研究[J]．药学学报，1980，15(5)：263-269．后冷藏备用。[2]马同江，周清凯，蔡云见．海参的药理作用及应用[J]．海洋药物，1982，2(2)：9一l3．2．2样品含量测定[3]曹慧丽，王珍，武桂玲．海参口服液中海参多糖的测定[J]职精密量取供试多糖样品1．0mL置于10mL容业与健康，2004，2(20)：52-52．'