分光光度法测定蜂胶中总黄酮质量分数的不确定度评定

'122江西化工2006年第3期分光光度法测定蜂胶中总黄酮质量分数的不确定度评定单丽娜谭洪涛陈洪(江西省疾病预防控制中心)摘要:目的:应用测量不确定度评定理论，用分光光度法测定蜂胶中总黄酮质量分数的不确定度评定。方法:测量不确定度评定与表示(JJF1059-1999)结果:蜂胶中总黄酮质量分数为9.25%时，合成不确定度为0.18%，扩展不确定度为0.36%结论:本评定过程适用于分光光度法的不确定度评定。关键词:分光光度法蜂胶总黄酮不确定度评定由于化学分析通常涉及多种方法和多个步骤，因黄酮定量测定。而化学分析结果不可避免地存在不确定度。在ISO/2.实验方法:IEC导则25《校准和检测实验室能力的通用要求》中指取样0.1843g于50mL容量瓶中，以95%乙醇定容明，实验室的每个证书或报告，均必须包含有关评定或至刻度，混匀。取此液5.00mL慢慢地滴人聚酞胺树脂测试结果不确定度的说明。在质量管理和质量保证中层析柱，用70%乙醇洗脱，洗脱液用50mL容量瓶收集，对不确定度也极为重视。我们根据国家质量技术监督用70%乙醇定容至刻度，取此稀释液10.OOmL测定。局发布的质量技术规范JJF1059一1999《测量不确定度CXV1XV23.数学模型:X(%)x100评定与表示》〔‘〕对分光光度法测定蜂胶中总黄酮质量MXV3XVgx1000ml:样品测定液中总黄酮含量m:试样的质量VI:分数的不确定度进行了评估。现报告如下:样品溶解定容总体积v2:稀释液总体积，。:过柱体积1.原理、:测定液体积黄酮类化合物中的经基与铝盐进行络合反应，在碱性条件下生成络合物，用分光光度法于510nm波长4.实验数据下测定其吸光度，与芦丁标准品比较，进行待测物中总工作曲线标准品、(mg)0.1002000.3000.4000.500吸光值Y0.0551081600.2150.270Y=a.+bx0.0541081620.2150.2690.001000.0020.000一0.001一0.200一0.1000000.1000.200a=0.0005b=0.537r=0.9999X=0.300E(y;一夕)z=6x10-6S"(x;-x)2=0.10样品6次重复检测数据吸光值y’0.1850.1800.1850.1820.182待测液中黄酮量x"(mg)0.3440.3340.3440.3380.338y=0.184Y二0.34170%乙醇溶解并定容至刻度。取此液10.OOmL至5.数据输出100mL容量瓶中，以70%乙醇溶解并定容至刻度。0.341x50x506.1.1标准品纯度为95%，其不确定度为0.6%，则总黄酮(%)二x100=9.250.1843x5x10其相对不确定度为6.不确定度评定6叹0.6%0~一ureuw>)二仁二0.35%仁一6.1标准溶液味精密称取0.1000g标准品溶于100mL容量瓶中，以6.1.2称量:天平称量误差士0.0005g，按矩形分布， 2006年9月分光光度法测定蜂胶中总黄酮质量分数的不确定度评定123其相对不确定度为u1(}50“0.05/二0.029111LU2(,50)=0.038MLu3(,ao)二500.0005/x3x2.1x10一4/=0.0018mLu,i(,5a)=[0.0292+0.0382x100=0.29%urei(2)=一1.000+0.018"1""x100/50=0.10%6.1.3使用100mL容量瓶产生的不确定度6.3.3使用A级5mL单标线吸管产生的不确定度6.1.3.1A级100mL单标线容量瓶据《JJG196-u1(,5)=0.020/二0.012mL90)[2]其MPE为土0.1OmL，按矩形分布，取k=万，其标u2(,5)二0.004mL准不确定度0.10/,F3二0.058mLous(}5)二5x3x2.1x10一4/=0.00018mL6.1.3.2充满液体至容量瓶刻度，重复10次测定，其标准偏差0.042mLourel(v5)=[0.0122+0.0042+0.00182]1/2x100/5=0.26%6.1.3.3溶液温度因素引起的标准不确定度假设6.3.4使用A级lOmL单标线吸管产生的不确定度温度的波动范围为3"C，水的膨胀系数为2.1x10-4,按矩形分布，取k二石，其标准不确定度为100x3x2.1(同6.1.4)um(v10)二0.16%6.3.5样品测定过程相对标准不确x10一4/招=0.036mLo定度由以上三项合成得出相对标准不确定度ure1(v50)=[0.058%2+0.042%2+0.036"1"/2x100/u}。二[0.16%02+2X0.10%02+0.26%2+0.16%2]1/e=0.37%100二。.080%6.1.4使用A级lOmL单标线吸管产生的6.4分光光度计检定证书提供该仪器RSD为0.不确定度9%，则相对标准不确定度为ui(}io)=0.025/二0.014mLu2(.io)=0.006-Lu3(,,io)=u_。二0.9%/招=0.52%10、3x2.1x10一4/二0.0036mLu.,(=to)=[0.0142+0.6.5分光光度计的分辨率0.005A，则相对标准不确0062+0.00362]1S1100/10二0.16%定度为6.1.5标准溶液相对标准不确定度umi=[0.35%2+0.29%2+0.080%2+0.080%2+uro15=0.29x0.005x100/0.184=0.78%0.6.6样品重复性的不确定度按《JJF1059-1999》采016%2]"90.47%6.2工作曲线用极差法1SR1-+(X十_0_x)2u、“二bx二nu二R/C二(0.349一0.334)/2.53二0.0059(n二6c=二Y-(、一劝22.53)式中:Ure16=0.0059x100/0.341二1.7%2[y一(a+bxi)]27.合成不确定度SR二n一2Ucrel=[uU，re1l，l2+Ure12，十Ure13，十Ure4l2十。、。，+SR工作曲线标准偏差SR=0.0014uUrere巧l62]1/2b工作曲线斜率b二0.537=[0.47%2+0.0582+0.372+0.52%2+0.78%2万样品液浓度平均值刃=0.341+1.7%211/2二2%P二6，对样品进行6次测量;u。二2%x9.25%=0.18%n二5，工作曲线标样的点数;8.扩展不确定度评定又工作曲线上标样浓度平均值取包含因子k二2，则扩展不确定度为U=2x0.18%=0.36%-7(X。一X)2二0.1i.19.报告将上述各值代人公式得出:蜂胶中总黄酮测量结果U,。二0.0067总黄酮(%)=9.25士0.36k=26.3样品测定6.3.1取样参考文献0.0005硒一_.__[11JJF1059-1999测量不确定度评定与表示【S].国家质量技u.1(，，二二0.184犷x100=”·16%6.3.2使用A级50mL单标线容量瓶产生的不确定术监督局，1999度[21JJG196-90常用玻璃量器检定规程【S1.国家质量技术监督局.1990'