分光光度法实验报告

'为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划分光光度法实验报告　　广西师范学院化学系　　化学实验报告册　　课程名称：分析化学实验　　班级：高分班学号：姓名：组别：　　XX年至XX年第一学年第二学期　　广西师范学院化学实验报告　　实验六分光光度法测溴酚蓝的电离平衡常数　　王思雨PB　　中国科学技术大学生命科学院　　摘要本实验中我们通过使用722型分光光度计测量出了溴酚蓝　　(Bromphenalblue)的最大吸收波长，并了解了溶液浓度对?max的影响　　以及酸度对的影响和用缓冲溶液调节溶液酸度的方法。　　关键词分光光度计溴酚蓝电离平衡常数　　1．前言　　本实验用分光光度法测定弱电解质溴酚蓝的电离平衡常数。溴酚　　蓝是一种酸碱指示剂，本身带有颜色且在有机溶剂中电离度很小，所目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　以用一般的化学分析法或其他物理化学方法很难测定其电离平衡常　　数。而分光光度法可以利用不同波长对其组分的不同吸收来确定体系　　中组分的含量，从而求算溴酚蓝的电离平衡常数。　　溴酚蓝在有机溶剂中存在着以下的电离平衡：　　HAH++A－　　[H?][A?]其平衡常数为：Ka?(6－2)[HA]　　溶液的颜色是由显色物质HA与A－引起的，其变色范围PH在　　～之间，当PH?时，溶液的颜色主要由HA引起的，呈黄　　色；在PH≥时，溶液的颜色主要由A－引起，呈蓝色。实验证明，对蓝色产生最大吸收的单色光的波长对黄色不产生吸收，在其最大吸　　收波长时黄色消光为0或很小。用对A－产生最大吸收波长的单色光　　测定电离后的混合溶液的消光，可求出A－的浓度。令A－在显色物质　　中所占的分数为X，则HA所占的摩尔分数为1－X，所以X[A?](6－3)1?X　　X或者写成：lg?PH?lgKa(6－4)1?XKa?目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　根据上式可知，只要测定溶液的PH值及溶液中的[HA]和[A－]，　　就可以计算出电离平衡常数Ka。　　在极酸条件下，HA未电离，此时体系的颜色完全由HA引起，溶　　液呈黄色。设此时体系的消光度为D1；在极碱条件下，HA完全电离，　　此时体系的颜色完全由A－引起，此时的消光度为D2，D为两种极端条　　件之间的诸溶液的消光度，它随着溶液的PH而变化，则有：　　D=(1－X)D1+XD2　　推出：X?　　代入式中得：lg　　(6－5)　　D?D1在测定D1、D2后，再测一系列PH下的溶液的光密度，以lgD2?DD?D1?PH?PKaD2?DD?D1D2?D　　对PH作图应为一直线，由其在横轴上的截距可求出PKa，从而可得　　该物质的电离平衡常数。　　2.实验部分　　(一)仪器与试剂　　药品：目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　5×10-5mol·dm-3的溴酚蓝溶液·dm-3的HCl溶液　　1mol·dm-3的HCl溶液mol·dm-3NaOH溶液　　mol·dm-3NaOH溶液mol·dm-3邻苯二甲酸氢钾溶液仪器：　　722型分光光度计(上海第三分析仪器厂)1台　　银河CS501恒温槽1台　　inoLab740PH计1台　　10mL移液管3支　　25移液管1支　　50mL移液管1支　　100mL容量瓶7个　　(二)实验过程　　1、打开超级恒温水浴使之恒温在25℃，打开分光光度计，预热　　仪器，同时掀开样品室盖。　　2、确定溶液的最大吸收波长。　　用10mL移液管准确移取5×10-5mol·dm-3的溶液　　20mL，置于一个洗干净的100mL的容量瓶中，并用50ml的移液管　　准确加入mol·dm-3的邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液，加H2O稀　　释到刻度，得×10-5mol·dm-3的溶液。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　取１cm厚度的比色皿两只，分别用H2O，×10-5mol·dm-3的溶液洗净，再分别装入2/3体积的H2O，×10-5mol·dm-3的溶液，把比色皿两光面擦干，正确插入光度计恒温比色槽中，用蒸馏水作空白溶液，用以校正仪器。放在靠内的一个槽内便于测量。　　开启仪器，测出最大的吸收光波长。　　3、各个不同酸度的溴酚蓝溶液配置。　　取7只100mL的干净容量瓶，分别加入20mL5×10-5mol·dm-3　　的溶液，再分别加入mol·dm-3邻苯二甲酸氢钾溶液。加入的HCl和NaOH的量以书中表为准，再加稀释至刻度。可分别得到不同PH值下的溶液。　　4、将上述七种不同酸度的溴酚蓝溶液用酸度计测量相应的pH值。　　5、不同酸度下，溴酚蓝溶液吸光度D的测定。　　将波长固定在?max处，把已经恒温的溶液逐一以蒸馏水作　　参比，测量其吸光度，可得一系列的D值。　　取两只100mL容量瓶，分别加入20mL5×10-5mol·dm-3　　的溶液。在另一支容量瓶中加入mol·dm-3　　的NaOH溶液稀释到刻度，得的极碱溶液，在另一目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　支容量瓶中加入1mol·dm-3的HCl溶液10mL，稀释至刻　　度，得的极酸溶液。　　在分光光度计上迅速测量极酸溶液、极碱溶液的吸光度D1　　和D2。　　3．结果与讨论　　实验结果：　　PKa=，Ka=?10?5,相对误差为%　　实验是应从浓度低的开始测量，我在测量中先测了4号，然后依次为3,2,1号。之后是5号，然后依次6,7号。　　结果分析：　　本次实验的误差较大，这是实验的严密性以及仪器的精密性所决定的，误差有如下主要　　1、在测量溶液吸光度时，读数会有较小的波动，这是仪器的精确度所限制的，因为仪器所发出的单色光会随电源电流的波动而有微小变化。PH计使用时并不在恒温槽内，与分光仪的温度有一定差别，但是因为当天的气温较高，使得恒温槽内温度与室温相同，故造成的误差应当比较小。　　2、人为误差主要体现在移取溶液，清洗润洗各种仪器上，这些可以通过熟能生巧和认真对待实验操作等方法减小误差。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　3、因为pH计的测定时间较长，使得药剂不能做到现配现用，造成一定误差，不过对实验的影响应该不大。　　4、pH计校准时精度不够，也会带来一定的误差。　　5、在使用PH计时发现PH计上读数是不断变化的，我认为这是由于PH计极其灵敏，而测量的体系并不是密闭的，因此由于酸的挥发以及碱与空气中二氧化碳相互作用引起PH的持续变化。而且书中在极酸极碱的PH值测定时也强调指出应迅速测量，也可证明这个观点。所以测量时应该在PH计读数刚开始发生反复时进行。　　参考文献　　[1]崔献英柯燕雄单绍纯物理化学实验中国科学技术大学出版社XX　　[2]武汉大学编分析化学高等教育出版社　　SpectrophotometricDeterminationofBPB　　ionizationequilibriumconstants　　WangSiyuPB　　Departmentoflifescience,UniversityofScience&　　TechnologyofChina　　AbstractInthisexperimentwemeasuredthemaximumabsorptionwavelengthofBPB(Bromphenalblue)bytheuseof目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　722-spectrophotometerWestudiedtheeffectonthemaximumabsorptionwavelengthmadebythesolutionconcentrationandtheimpactonthebytheacidityandalsogettheknowledgeofthewaytousebuffersolutiontoregulatetheacid.　　KeywordsSpectrophotometerBromphenalblueIonizationequilibriumconstants　　实验处理附件　　数据记录　　恒温槽温度初温：℃；末温：℃；极酸和极碱情况下溶液的吸光度D1：-；D2：；　　最大吸收波长?max：；　　不同PH值时溶液的吸光度：　　紫外分光光度法测定蛋白质含量　　一、实验目的　　1.学习紫外光度法测定蛋白质含量的原理；　　2.掌握紫外分光光度法测蛋白质含量的实验技术。二、实验原理　　1.测蛋白质含量的方法主要有：①测参数法：折射率、相对密度、紫外吸收等；②基于化学反应:定氮法、双缩脲法、Folin―酚试剂法等。本实验采用紫外分光光度法。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　2.蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环中含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280nm附近。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度服从朗伯―比尔定律。　　利用紫外吸收法测蛋白质含量的准确度较差，原因有二：①对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差，故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质；②样品中含有的嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。三、仪器与试剂　　TU―1901紫外可见分光光度计、标准蛋白质溶液·mL-1、%NaCl溶液、试样蛋白质溶液。　　10mL比色管、1cm石英比色皿、吸量管。四、实验步骤　　1.绘制吸收曲线　　用吸量管吸取·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以%NaCl溶液作参比溶液，在190~400nm间每隔5nm测一次吸光度Abs，记录数据并作图。　　2.绘制标准曲线　　用吸量管分别吸取、、、、·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以%NaCl溶液作参比溶液，在波长280nm处分别测其吸光度，记录数据并作图。　　3.样品测定目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　取适量浓度试样蛋白质溶液，在波长280nm处测其吸光度，重复三次。在已经得到标准曲线的情况下，为了使测量结果准确度高，待测溶液的浓度需在标准曲线的线性范围内，所以，先测定试样蛋白质原液的吸光度，估算浓度为mg·mL-1，再将原试液稀释至5倍，估算浓度为mg·mL-1，测吸光度，重复三次五、数据处理与结果分析　　图1吸收曲线　　在上图吸收曲线中可以看到有两处吸收峰，且在波长225nm处的吸收峰远大于280nm处，这是由于在波长250nm以下时，溶剂吸收较为严重，干扰较大，所以，蛋白的最大吸收波长应为280nm。　　图2标准曲线　　将试样所测得吸光度带入标准曲线中求蛋白质含量：　　稀释以后的蛋白质的浓度cx=()/　　原试样中蛋白质浓度c=(cx*10)/2　　单次测定的标准偏差:　　s=　　?(c　　i　　?1　　n　　i目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　?c)2　　?　　n?1　　??=　　2=　　?100%=%相对标准偏差：sr=?×100%=　　c目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。'