分光光度法测饮料中色素的含量的实验报告

'为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划分光光度法测饮料中色素的含量的实验报告　　实验方案报告　　实验课程：电子科技专业实验实验项目：分光光度法测量溶液色素含量班级：学号：姓名：实验方案报告成绩：教师签名：实验类型设计性?综合设计性?综合性?验证性?　　一、实验内容　　使用分光光度计测出溶液中柠檬黄、日落黄、和胭脂红(来自:写论文网:分光光度法测饮料中色素的含量的实验报告)的浓度。　　二、实验条件　　仪器：　　紫外可见分光光度计，电子天平；容量瓶、移液管、烧杯等玻璃仪器。试剂：　　柠檬黄、日落黄、胭脂红；乙酸铵；光学纯水；　　三、实验方案　　一、先各称取100mg的柠檬黄、日落黄、胭脂红，用三个100ml容量瓶配置成1mg/ml的母液，在分别将每种母液用量筒量取4ml、6ml、8ml、12ml、16ml到100ml容量瓶稀释成40ug/ml、60ug/ml、80ug/ml、120ug/ml、160ug/ml的子溶液，则有15瓶标准溶液。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　二、分别测量80ug/ml的柠檬黄、日落黄、胭脂红标准溶液的吸光度曲线，记录三者吸光度最大时的波长λ1、λ2、λ3。　　三、分别测量15瓶标准溶液和待测溶液在波长λ、λ　　1　　2　　、λ3时的吸光度。　　四、数据处理方法　　将所测得的数据用excel绘制出折线图，再绘制出趋势线，则趋势线的斜率即为该波长下物质的摩尔吸光系数?，如下图所示：　　n　　根据朗伯-比耳定律有：A?由测得数据可列方程组　　?　　i　　?ibC　　i　　A1??11bCA2??　　bC　　1　　??12bC??　　bC目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　2　　??13bC??　　bC　　3　　3　　　　A3??31bC　　1　　??32bC　　2　　??33bC　　3　　将b=1，A1=，A2=，A3=以及?的值代入方程组用软件可解得C1=，C2=，C3=；　　结论：该溶液由/ml的柠檬黄、/ml的日落黄和/ml的胭脂红组成。　　误差分析：　　1）仪器误差：仪器本身存在一定误差；　　2）操作误差：用天平、量筒、容量瓶量取时读数有一定误差，配置溶液以及最后测量时溶质残留造成一定误差。　　五、思考题　　1、分光光度计有哪些类型？分别有什么特点？目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　答：紫外可见分光光度计——应用广，灵敏度高，选择性好，成本低；　　红外分光光度计——适合任何状态样品，分析时间短，特征性强；原子分光光度计——灵敏度高，选择性好，速度快，应用广泛；荧光分光光度计——灵敏度高，定性更可靠，干扰因素较多。2、测定过程中产生误差的原因有哪些，并简要进行分析？　　答：用天平称取时，由于质量较轻，有一定误差；　　量筒以及容量瓶读数时凹液面对准刻度线，读数时存在一定误差；配置溶液以及最后测量过程中因为溶质残留造成一定误差。　　多元校正－分光光度法同时测定混合色素　　一、【实验目的】　　1.利用分光光度法测定胭脂红、柠檬黄、日落黄三种有机色素混合液的吸光度。2.利用多元校正法处理数据，计算RSD和RSE、RSDt。3.了解矢量数据的获取方法及其在多组分测定中的应用。　　4.了解计算机技术及化学计量学基本方法在波谱解析中的应用。二、【实验原理】1.实验背景：目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　食用合成色素是饮料等食品中的常用添加剂，但合成色素从合成工艺和结构上可能具有一定的毒性。因此，色素的种类、含量分析对食品工业具有重要意义。而胭脂红、柠檬黄、日落黄则是常见的食品着色剂。由于色素大多是有色有机物，对可见光有较强吸收，故采用分光光度法是测定色素。对于混合色素，需要将各组分分离后，才能进行定量测定。而化学计量学方法为混合色素不经分离，利用分光光度法进行准确地同时测定提供了可能。2.实验原理：　　①比尔定律：当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时,其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比.。　　公式：A=lg=Kbc②线性代数和矩阵：　　设有nc个组分同时存在，配制一组已知样本共ns个溶液，其浓度矩阵为Cnc　　×ns　　，在nw个波长下测得吸光度矩阵Anw×ns。根据朗伯—比耳定律有：　　Anw?ns?Knw?ncCnc?ns(1)　　其中Knw×nc为吸光度矩阵，根据最小二乘法原理可求出各组分的纯物种谱，即K矩阵：　　K?ACt(CCt)?1(2)　　式中t和-1分别表示该矩阵的转置和逆。对于一个或一组未知样，同样在nw个相同波长下测定后，可用最小二乘法根据下式求出未知物的浓度。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　C未知?(KtK)?1KtA未知(3)此计算过程由计算软件处理，最终可以获得实际操作中所配制的混合色素的物质组成、各色素的体积和偏差。三.【仪器与试剂】　　722分光光度仪、Agilent8453UV-VIS分光光度仪、50ml容量瓶6个、5ml移液管4支、移液枪4支　　胭脂红溶液、柠檬黄溶液、日落黄溶液、HCl溶液、蒸馏水　　四、【实验步骤】　　?按照各色素所加体积之和在14-16ml，最大体积和最小体积在3倍以上，每　　种色素加入体积有起伏，设计三种色素加入体积表格：第一次实验：第二次实验：　　?清洗容量瓶，开启仪器，洗洁精清洗比色皿。选取四组比色皿，以蒸馏水为参比，不断清洗至比色皿两两吸光度相差正负以内，并以偏离最大者作为水/参比比色皿。　　?取6个50ml容量瓶，按照表格设计配制溶液，然后加入5mlHCl，稀释至刻度，摇匀。任意选择几组采用移液枪，实验结果出来后比较移液管和移液枪的精准度。　　?做参比的比色皿装HCl溶液或者蒸馏水，每次测定三组溶液，每三组一轮，从390nm测到540nm，记录各组的吸光度。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　?输入数据，软件处理数据。分析自己的溶液体积实际值和理论值的误差，分析RSD和RSE，利用多元校正，分析实验误差原因。　　?将溶液用Agilent8453UV-VIS分光光度仪测定，分析RSE和RSD。　　五、【实验数据和图谱】理论实验评价：　　RSD％找出错误原因并重做。RSE一般2%以下为优秀，3%为良好，3%-6%为可以接受，超过太多且不能找出明显原因则需要重做.提高实验RSD：　　提高实验RSE：　　提高实验去除一组：　　第一次实验RSD：　　第一次实验RSE：　　安捷伦仪器测定数据图：　　由于第一次实验未来得及测安捷伦仪器，bbs上得到一份数据，得到相应的图谱和RSD：，RSE：、、。与手动仪器比较，RSD：，RSE：、、。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　从数据可以看出安捷伦仪器测量波长间隔为1nm，比分光光度计更为精确，测量更为自动化，也更为简便，时间更短。从图谱也可以看出，安捷伦仪器从300nm测到600nm，比分光光度计测量波长范围更广，但对于390nm一下的短波长光，会有一个变化和拱起，所以在利用多元法时只需要从390nm开始测定到540nm即可。如果只取390nm到540nm范围数据，发现安捷伦仪器和分光光度计测得的图像基本吻合。但从实验结果来看，两者有明显不同，RSD测量分别为和，由于读数全自动，RSD相差不多，但对于RSE来说，则安捷伦仪器则更能精确的反映配制溶液的差异。也就是说操作和读数相差不大时两者RSD往往差异不大，但对于RSE来说，体积的变化更为敏感，少量溶液配制失误RSE迅速增大，其检测意义的重要性不能忽视。所以不能只看RSD小就可以了，RSE小，且RSDt也是一个重要的参数。　　取390nm-540nm波长范围的图像：　　六、【结果分析和讨论】A平的计算：　　10)?RSDAexp(Aln(10))根据公式：RSDT?ln(　　把16×6个A取平均值后换算得到　　第一次实验：A平=；第二次实验：A平=，从而计算出RSDT：第一次实验RSDT=×10；第二次实验RSDT=×10　　RSD、RSE结果分析：　　第二次实验RSD=，相对于第一次实验RSD=有进步。原因主要是比色皿的清洁度，第一次洗了将近一个小时还是差异很大，第二次直接用超声波洗过的、别人用过的比色皿，四个比色皿基相差本都在0左右。而且这一次读数和旋旋钮时更为注意，推拉杆的时候，待位置卡准后，前后有两次读数，基本读数波动误差排除。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　而第二次实验RSE分别为：胭脂红%、日落黄%、柠檬黄%，相对一第一次实验：胭脂红%、日落黄%、柠檬黄%，有较大进步，但还是柠檬黄配制溶液时偏大。可能的原因是第二次实验基本都是用移液枪，更为便捷精确，但可能移液枪老化，容易按到底，同时移液枪外壁的溶液误差都会导致还是有较为明显的误差。　　七、【实验体会】　　经过两次实验的对比和查询资料，尤其是登陆bbs查看往届学长学姐的体会和总　　-4　　-3　　紫外分光光度法测定蛋白质含量　　一、实验目的　　1.学习紫外光度法测定蛋白质含量的原理；　　2.掌握紫外分光光度法测蛋白质含量的实验技术。二、实验原理　　1.测蛋白质含量的方法主要有：①测参数法：折射率、相对密度、紫外吸收等；②基于化学反应:定氮法、双缩脲法、Folin―酚试剂法等。本实验采用紫外分光光度法。　　2.蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环中含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280nm附近。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度服从朗伯―比尔定律。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　利用紫外吸收法测蛋白质含量的准确度较差，原因有二：①对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差，故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质；②样品中含有的嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。三、仪器与试剂　　TU―1901紫外可见分光光度计、标准蛋白质溶液·mL-1、%NaCl溶液、试样蛋白质溶液。　　10mL比色管、1cm石英比色皿、吸量管。四、实验步骤　　1.绘制吸收曲线　　用吸量管吸取·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以%NaCl溶液作参比溶液，在190~400nm间每隔5nm测一次吸光度Abs，记录数据并作图。　　2.绘制标准曲线　　用吸量管分别吸取、、、、·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以%NaCl溶液作参比溶液，在波长280nm处分别测其吸光度，记录数据并作图。　　3.样品测定目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　取适量浓度试样蛋白质溶液，在波长280nm处测其吸光度，重复三次。在已经得到标准曲线的情况下，为了使测量结果准确度高，待测溶液的浓度需在标准曲线的线性范围内，所以，先测定试样蛋白质原液的吸光度，估算浓度为mg·mL-1，再将原试液稀释至5倍，估算浓度为mg·mL-1，测吸光度，重复三次五、数据处理与结果分析　　图1吸收曲线　　在上图吸收曲线中可以看到有两处吸收峰，且在波长225nm处的吸收峰远大于280nm处，这是由于在波长250nm以下时，溶剂吸收较为严重，干扰较大，所以，蛋白的最大吸收波长应为280nm。　　图2标准曲线　　将试样所测得吸光度带入标准曲线中求蛋白质含量：　　稀释以后的蛋白质的浓度cx=()/　　原试样中蛋白质浓度c=(cx*10)/2　　单次测定的标准偏差:　　s=　　?(c　　i　　?1　　n　　i　　?c)2　　?　　n?1　　??=目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　2=　　?100%=%相对标准偏差：sr=?×100%=　　c目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。'