分光光度法共同测定芦荟中微量铁和锌_潘仲巍

'DOI:10.16125/j.cnki.1009-8224.2012.02.005第３０卷第２期泉州师范学院学报Ｖｏｌ．３０Ｎｏ．２２０１２年３月ＪｏｕｒｎａｌｏｆＱｕａｎｚｈｏｕＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＭａｒ．２０１２分光光度法共同测定芦荟中微量铁和锌潘仲巍１，２，肖春妹１，杨小玲１（１．泉州师范学院化学与生命科学学院，福建泉州３６２０００；２．中国科学院青海盐湖研究所，青海西宁８１０００８）摘要：建立测定芦荟中两种重要微量元素铁和锌含量的分光光度方法，考察了同一个芦荟样品中共同测定铁和锌的分光光度条件以及其他共存元素对测定的影响，确定了最佳测定条件．在最佳测定条件下，铁和锌的线性范围、回归方程、相对标准偏差、检测限和回收率分别为０．０８～１．５０μｇ／ｍＬ、０．０１～０．５０μｇ／ｍＬ；Ｙ＝０．０１９５３＋０．１７９６４Ｘ（ｒ＝０．９９９９４）、Ｙ＝０．００８８９＋０．５６１３８Ｘ（ｒ＝０．９９７３７）；４．３７％、２．９０％；０．０３μｇ／ｍＬ、０．００８μｇ／ｍＬ；９９．０％～１０９．０％、９８．０％～１０６．８％．分光光度法简便、快速、应用广泛，能够进行多元素的共同测定．关键词：芦荟；铁；锌；分光光度法①中图分类号：Ｏ６５７．３２文献标识码：Ａ文章编号：１００９－８２２４（２０１２）０２－００３２－０４［１］芦荟是百合科多年生肉质多浆植物，具有泻下、治疗创伤和抗癌等多种药用价值．芦荟中除含有多种有［２－５］机有效成分外，还含有多种无机微量元素，铁和锌便是其中极为重要的人体所必需的两种微量元素．［６］分光光度法是一种价格低廉、操作方便、灵敏度高、适合微量组分分析的方法．尽管已有分光光度法单［７］［８］［９］独测定芦荟中微量铁和微量锌的报道，也有原子吸收测定芦荟中多种金属元素的报道．但未见有对芦荟样品中共同进行分光光度测定两种以上金属元素的报道．本文以干燥芦荟为样品，样品经消化处理后用邻二氮菲（ＰＬ）分光光度法测定铁含量的同时用１－（２－吡啶偶氮）－２－萘酚（ＰＡＮ）分光光度法测定锌含量．１实验部分１．１材料和试剂芦荟原料采于泉州师范学院校内，用清水漂洗干净后用蒸馏水漂洗一次后于９０℃鼓风后放入烘箱恒温烘干至恒重，研细，置于干燥器中保存备用．铁标准溶液以硫酸铁铵（ＮＨ４Ｆｅ（ＳＯ４）２·１２Ｈ２Ｏ，ＧＲ）按常法配制，贮备液１ｍｇ／ｍＬ，操作液２μｇ／ｍＬ；０．１５％ＰＬ、１０％盐酸羟胺用时新鲜配制；锌标准溶液以高纯锌粉按常法配制，贮备液５００μｇ／ｍＬ，操作液１μｇ／ｍＬ；０．１％ＰＡＮ乙醇溶液保存在棕色瓶中；２０ｇ／Ｌ十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）水溶液；其余所用试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水．１．２仪器Ｖ－１８００型可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；ｐＨＳ－３Ｃ型酸度计（上海理达仪器厂）；ＧＺＸ－９２４０ＭＢＥ数显鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；ＤＲＴ－ＴＷ型调温电热套（郑州长城科工贸有限公司）．１．３实验步骤１．３．１铁和锌的测定方法铁的测定方法：在２５ｍＬ具塞比色管中加入一定量的铁操作液或样品溶液，分别加入一定量的１０％盐酸羟胺、ｐＨ４．８６的ＨＡｃ－ＮａＡｃ缓冲溶液及０．１５％ＰＬ，摇匀，用水稀释至刻度，静置１０ｍｉｎ后在分光光度计上５１０ｎｍ处以试剂参比，测定吸光度．①收稿日期：２０１１－１０－２１作者简介：潘仲巍（１９６５—），男，福建南安人，教授，博士，从事分离科学和化学材料研究．基金项目：福建省教育厅Ａ类科技计划项目（ＪＡ１０２３８）；福建省教育厅校企合作项目（ＪＡ１１２１７） 第２期潘仲巍，等：分光光度法共同测定芦荟中微量铁和锌３３锌的测定方法：在２５ｍＬ具塞比色管中加入一定量的锌操作液或样品溶液，依次加入一定量的２０ｇ／ＬＳＤＳ、ｐＨ７．９６的ＫＨ２ＰＯ４－ＮａＯＨ缓冲溶液和０．１％ＰＡＮ，充分摇匀，用水稀释至刻度，摇匀放置１０ｍｉｎ后在分光光度计上５５０ｎｍ处以试剂参比，测定吸光度．１．３．２芦荟样品制备称取研细芦荟１．００００ｇ左右，置于１００ｍＬ烧杯中，加入４ｍｏｌ／Ｌ的ＨＮＯ３溶液２０ｍＬ，放置２４ｈ以上，低温加热至近干，以除去有机物，再加入１０ｍＬ０．５ｍｏｌ／Ｌ的ＨＣｌＯ４溶液溶解其中的盐类，静置１２ｈ后，仍采用低温加热至ＨＣｌＯ４完全挥发，冷却，加入适量蒸馏水至烧杯中，将其定量转移至１００ｍＬ容量瓶中，用水稀至刻度，作为初样品．取５０ｍＬ初样品用ＮａＯＨ调节ｐＨ至微碱性，用快速滤纸过滤后用蒸馏水洗涤，将滤液和洗涤液合并，转移至１００ｍＬ容量瓶中，用水稀释至刻度，按ＰＡＮ光度法测定锌．取剩余５０ｍＬ初样品用ＮａＯＨ调节ｐＨ在２～４，用快速滤纸过滤后用蒸馏水洗涤，将滤液和洗涤液合并，转移至１００ｍＬ容量瓶中，用水稀释至刻度，按ＰＬ光度法测定铁．２结果与讨论２＋２＋２．１Ｆｅ－ＰＬ络合物和Ｚｎ－ＰＡＮ络合物的吸收光谱图１是Ｆｅ２＋２＋２＋２＋］＝１／ｍＬ，－ＰＬ络合物和Ｚｎ－ＰＡＮ络合物的吸收光谱．图中Ｆｅ－ＰＬ形成条件：［Ｆｅμｇ－２２＋２＋］＝０．４／ｍＬ，ｐＨ４．８６，０．４％盐酸羟胺，［ＰＬ］＝１．２×１０％，试剂参比；Ｚｎ－ＰＡＮ形成条件：［Ｚｎμｇ－３ｐＨ７．９６，１．６ｇ／ＬＳＤＳ，［ＰＡＮ］＝１．２×１０％，试剂参比．由图可见，Ｆｅ２＋－ＰＬ络合物的最大吸收波长为５１０２＋ｎｍ；Ｚｎ－ＰＡＮ络合物的最大吸收波长为５５０ｎｍ．因此，本实验选择５１０ｎｍ为Ｆｅ２＋的测定波长；５５０ｎｍ为２＋的测定波长．Ｚｎ２＋、Ｚｎ２＋测定条件的优化２．２Ｆｅ为保证吸光度的测定相对误差较小，在固定［Ｆｅ２＋］为１／ｍＬ的情况下，选择Ｆｅ２＋的最佳测定条μｇ件．实验表明，在ＨＡｃ－ＮａＡｃ或ＫＨ２ＰＯ４－ＮａＯＨ缓冲体系中，当ｐＨ在２～１０范围内，Ｆｅ２＋－ＰＬ络合物吸光度最大且保持稳定．在芦荟样品的测定时选择ｐＨ４．８６的ＨＡｃ－ＮａＡｃ缓冲溶液．体系中盐酸羟胺浓度大于０．４％时，Ｆｅ２＋－ＰＬ络合物吸光度最大且保持恒定，选择０．λ／ｎｍ３＋的最佳用量．当ＰＬ浓度大４％盐酸羟胺作为还原Ｆｅ图１Ｆｅ２＋２＋－ＰＬ络合物和Ｚｎ－ＰＡＮ络合物的吸收光谱于１．１×１０－２２＋％时，Ｆｅ－ＰＬ络合物吸光度最大且恒定，本实验选择１．２×１０－２２＋的最佳条件为：ｐＨ４．８６的ＨＡｃ－ＮａＡｃ缓冲溶液、％作为ＰＬ最佳浓度．所以，测定Ｆｅ－２２＋的工作曲线回归方程为Ｙ０．４％盐酸羟胺、１．２×１０％ＰＬ．在上述最佳条件下，５１０ｎｍ波长下，得到测定Ｆｅ２＋在０．０８～１．５０μｇ／ｍＬ范围内符合比尔定＝０．０１９５３＋０．１７９６４Ｘ，相关系数ｒ＝０．９９９９４．实验表明，Ｆｅ律，检测限为０．０３μｇ／ｍＬ．为保证吸光度的测定相对误差较小，在固定［Ｚｎ２＋］为０．４／ｍＬ的情况下，选择Ｚｎ２＋的最佳测定条件．μｇ实验表明，以ＫＨ作为缓冲溶液，ｐＨ７．２０～９．０９范围内，Ｚｎ２＋２ＰＯ４－ＮａＯＨ－ＰＡＮ络合物吸光度最大且保持稳定，选择ｐＨ７．９６作为测定Ｚｎ２＋的最佳酸度．表面活性剂加入到分析体系中具有增溶、增敏的作用，因而得到［１０－１１］２＋了广泛应用．本实验以ＳＤＳ为表面活性剂，当其他条件固定，在０．４μｇ／ｍＬＺｎｇ溶液中含有１．６ｇ／Ｌ２＋ＳＤＳ时，Ｚｎ－ＰＡＮ络合物吸光度由原来的０．１８７增大到０．２５７且保持恒定，选择１．６ｇ／ＬＳＤＳ作为表面活性剂最佳用量．实验表明，测定Ｚｎ２＋－３ｇ时，ＰＡＮ浓度过大容易产生沉淀．当ＰＡＮ浓度大于１．３×１０％时，测定体系中产生沉淀，Ｚｎ２＋－３ｇ－ＰＡＮ络合物不稳定且溶液颜色发生变化；当ＰＡＮ浓度为１．２×１０％时，测定体系稳定、吸光度保持恒定．在样品测定时选择１．２×１０－３２＋的最佳条件％ＰＡＮ作为最佳浓度．因此，确定测定Ｚｎ为：ｐＨ７．９６的ＫＨ缓冲溶液、１．６ｇ／Ｌ的ＳＤＳ溶液和１．２×１０－３２ＰＯ４－ＮａＯＨ％ＰＡＮ．在以上最佳条件下，５５０２＋的工作曲线回归方程为Ｙ＝０．００８８９＋０．５６１３８Ｘ，相关系数ｒ＝０．９９７３７．实验表ｎｍ波长下得到测定Ｚｎ明，Ｚｎ２＋在０．０１～０．５０μｇ／ｍＬ范围内符合比尔定律，检测限为０．００８μｇ／ｍＬ． ３４泉州师范学院学报２０１２年３月２．３共存离子对测定铁和锌的影响芦荟中除铁、锌外，还存在钾、钙、钠、镁、铝、钡、铜、镍、锰、铅、镉和锶等金属离子和阴离子．实验对１８种可能的共存离子的干扰试验结果表明：对１μｇ／ｍＬＦｅ２＋在吸光度变化的相对误差不超过±５％情况下，共存离子最大允许量如下所示（如下括号中数字为该种离子的允许量，单位μｇ／ｍＬ；分子式为加入该种离子的化合物形式）：Ｋ＋（１２０，ＫＩ）、Ｃａ２＋（４０，ＣａＣｌ）、Ｎａ＋（１６０，ＮａＣｌ）、Ｍｇ２＋（８０，ＭｇＣｌ）、Ａｌ３＋（４，Ａｌ（ＳＯ））、２２２４３２＋（４，ＢａＣｌ）、Ｃｕ２＋（０．２，Ｃｕ（ＮＯ））、Ｎｉ＋（０．０８，ＮｉＳＯ）、Ｍｎ（ＶＩＩ）（１．０，ＫＭｎＯ）、Ｚｎ２＋（２０，ＺｎＣｌ）、Ｂａ２３２４４２２＋（４０，Ｐｂ（ＮＯ））、Ｃｄ２＋（４０，Ｃｄ（ＮＯ））、Ｓｒ２＋（２０，Ｓｒ（ＮＯ））、ＮＨ４＋（４０，ＮＨ）、Ｃｌ－（１６０，ＮａＣｌ）、Ｐｂ３２３２３２４Ｃｌ－（１６０，ＮａＩ）、ＳＯ２－（２０，Ｎａ）、ＮＯ－（１８，ＮａＮＯ）．锌离子的干扰试验是以０．４／ｍＬＺｎ２＋进行实验，当吸Ｉ４２ＳＯ４３３μｇ光度变化相对误差小于±５％时，可允许共存离子的量分别为（如下括号中数字为该种离子的允许量，单位／ｍＬ；分子式为加入该种离子的化合物形式）：Ｋ＋（４０，ＫＩ）、Ｃａ２＋（８，ＣａＣｌ）、Ｎａ＋（４８，ＮａＣｌ）、μｇ２２＋（３２，ＭｇＣｌ）、Ａｌ３＋（１．２，Ａｌ（ＳＯ））、Ｂａ２＋（１．２，ＢａＣｌ）、Ｃｕ２＋（０．０５，Ｃｕ（ＮＯ））、Ｎｉ＋（０．０４，ＮｉＳＯ）、Ｍｇ２２４３２３２４３＋（４．８，Ｆｅ（ＳＯ））、Ｐｂ２＋（１２，Ｐｂ（ＮＯ））、Ｃｄ２＋（８，Ｃｄ（ＮＯ））、Ｓｒ２＋（４．８，Ｍｎ（ＶＩＩ）（０．３，ＫＭｎＯ４）、Ｆｅ２４３３２３２＋（１６，ＮＨ）、Ｃｌ－（５０，ＮａＣｌ）、Ｉ－（５０，ＮａＩ）、ＳＯ２－（８，Ｎａ）、ＮＯ－（７．２，ＮａＮＯ）．可见，上述Ｓｒ（ＮＯ３）２）、ＮＨ４４Ｃｌ４２ＳＯ４３３可能的共存离子不干扰铁和锌的测定，考虑到芦荟样品经过ＨＮＯ３和ＨＣｌＯ４消化后，除上述可能共存离子［８］外，其他可能共存离子的含量极其微量，故无需进行掩蔽或特殊分离，即可直接采用分光光度法进行铁和锌的测定．２．４样品分析样品中铁和锌的测定结果见表１—２．表１芦荟中铁含量的测定每克干芦荟每克干芦荟中［７，１２－１３］／测得浓度／浓度平均值／文献值样品号·ｍＬ－１·ｍＬ－１ＲＳＤ中铁含量／平均铁含量／·ｇ－１μｇμｇ·ｇ－１·ｇ－１μｇμｇμｇ１０．１９７８１９７．７９２０．１９２３１９２．２６３０．１９７８１９７．７９０．１９０４４．３７％１９０．４２８～２６３４０．１８６７１８６．７４５０．１７５７１７５．６９６０．１９２３１９２．２６表２芦荟中锌含量的测定每克干芦荟中每克干芦荟中［８，１３］／测得浓度／浓度平均值／文献值样品号·ｍＬ－１·ｍＬ－１ＲＳＤ铁含量／平均锌含量／·ｇ－１μｇμｇ·ｇ－１·ｇ－１μｇμｇμｇ１０．０３９７３３９．７３２０．０４２５４４２．５４３０．０３９８２３９．８２０．０４０５３２．９０％４０．５３１６．９～１４６４０．０３９３８３９．３８５０．０４０５４４０．５４６０．０４１１６４１．１６由表１—２可见，每克干芦荟中平均铁和锌含量分别为１９０．４２μｇ和４０．５３μｇ，与文献值吻合，测定铁和锌的相对标准偏差分别为４．３７％和２．９０％．表３—４是按０．５∶１、１∶１和１．５∶１的比例进行芦荟中铁和锌的加标回收实验．表３芦荟中铁的加标回收率样品中铁含量／加标量／测得量／样品号·ｍＬ－１·ｍＬ－１·ｍＬ－１回收率／％μｇμｇμｇ０．０８００．２８０７１０６．０１０．１９５９０．１６００．３６３５１０４．８０．２４００．４５７５１０９．００．０８００．２６４１９９．０２０．１８４９０．１６００．３５２５１０４．８０．２４００．４３５４１０４．４ 第２期潘仲巍，等：分光光度法共同测定芦荟中微量铁和锌３５表４芦荟中锌的加标回收率样品中锌含量／加标量／测得量／样品号·ｍＬ－１·ｍＬ－１·ｍＬ－１回收率／％μｇμｇμｇ０．０２００．０５７１９９８．０１０．０３７６００．０４００．０８０３２１０６．８０．０６００．０９９９３１０３．９０．０２００．０６２５３１０３．９２０．０４１７５０．０４００．０８３９０１０５．４０．０６００．１０５３０１０５．９由表３—４可见，铁回收率为９９．０％～１０９．０％，锌回收率为９８．０～１０６．８％．所以，本文报道的方法具有较好的准确度和精密度．参考文献：［１］江苏新医学院．中药大辞典（上册）［Ｍ］．上海：上海人民出版社，１９７７．［２］万金志，乔悦昕．芦荟的化学成分及其研究［Ｊ］．中草药，１９９９（２）：１５１－１５３．［３］易若望，吴俊．芦荟的化学成分、药理作用及临床应用［Ｊ］．食品与药品，２００６，８（４）：７０－７２．［４］桂留中．锌的药理作用及其临床应用［Ｊ］．中国医药学杂志，１９８３，３（９）：２３－２５．［５］许加生．铁与人体健康［Ｊ］．微量元素与健康研究，２００４，２１（５）：６２－６３．［６］胡之德，赵正风．分光光度分析法［Ｍ］．宁夏：宁夏人民出版社，１９８７．［７］姚军，张力．芦荟中微量铁的测定［Ｊ］．内蒙古民族大学学报：自然科学版，２００４，１９（１）：３４－３５．［８］邓斌，蒋刚彪，陈六平．分光光度法测定芦荟中微量元素锌［Ｊ］．分析实验室，２００８，２７：１６０－１６３．［９］杨屹，侯翔燕，王书俊，等．微波消解－ＡＡＳ法测芦荟中微量金属元素锌、锰、镉、铅［Ｊ］．光谱学与光谱分析，２００４，２４（１２）：１６７２－１６７５．［１０］ＣＨＥＳＴＥＲＪＥ，ＤＡＧＮＡＬＬＲＭ，ＷＥＳＴＴＳ．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｔｅｒｎａｒｙｃｏｍｐｌｅｘｅｓ－ＶＩＩＩ：Ａｎｉｍｐｒｏｖｅｄｒｅａｇｅｎｔｓｙｓｔｅｍｆｏｒｔｈｅｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆａｌｕｍｉｎｉｕｍ［Ｊ］．Ｔａｌａｎｔａ，１９７０，１７（１）：１３－１９．［１１］郑国熙．胶束增溶分光光度法反应机理的探讨［Ｍ］．北京：地质出版社，１９８０．［１２］刘立行，张伟．火焰原子吸收法快速测定芦荟中的钙铁元素［Ｊ］．天津师范大学学报：自然科学版，２００５，２５（３）：１１－１６．［１３］狄之光，宋薇，钱春燕．ＩＣＰ－ＡＥＳ测定芦荟中的微量元素［Ｊ］．微量元素与健康研究，２００４，２１（５）：４５－４７．ＣｏｎｊｕｎｃｔＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＭｉｃｒｏＩｒｏｎａｎｄＺｉｎｃｉｎＡｌｏｅｂｙＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ１，２，ＸＩＡＯＣｈｕｎ－ｍｅｉ１，ＹＡＮＧＸｉａｏ－ｌｉｎｇ１ＰＡＮＺｈｏｎｇ－ｗｅｉ（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｅｍｉｃａｌａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＱｕａｎｚｈｏｕＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｊｉａｎ３６２０００，Ｃｈｉｎａ；（２．ＱｉｎｇｈａｉＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳａｌｔＬａｋｅｓ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｑｉｎｇｈａｉ８１０００８；Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｏｎｊｕｎｃｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｗｏｉｍｐｏｒｔａｎｔｔｒａｃｅｅｌｅｍｅｎｔ－ｉｒｏｎａｎｄｚｉｎｃｉｎＡｌｏｅｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ．ＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄｅｆｆｅｃｔｓｏｆｏｔｈｅｒｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔｅｌｅｍｅｎｔｓｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｉｒｏｎａｎｄｚｉｎｃｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄａｔｉｄｅｎｔｉｃａｌＡｌｏｅｓａｍｐｌｅ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌａｎａｌｙｔｉｃａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｉｒｏｎａｎｄｚｉｎｃｗｅｒｅｒｅｇｕｌａｒｉｚｅｄ．Ａｔｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅ，ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｅｑｕａｔｉｏｎ，ｒｅｌａｔｉｖｅｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎ，ｌｉｍｉｔｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｆｏｒｉｒｏｎａｎｄｚｉｎｃｗｅｒｅ０．０８～１．５０／ｍＬ，０．０１～０．５０／ｍＬ；Ｙ＝０．０１９２＋０．００７２４Ｘ（ｒ＝０．９９９５６），Ｙ＝０．００８８９＋０．０２２６Ｘ（ｒ＝μｇμｇ０．９９７７）；４．３７％，２．９０％；０．０３μｇ／ｍＬ，０．００８μｇ／ｍＬ；９９．０％～１０８．９％，９８．０％～１０６．８％；ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｊｕｎｃｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｙｉｎｇｅｌｅｍｅｎｔｓｃａｎｂｅｃａｒｒｉｅｄｂｙｔｈｅｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄａｎｄｗｉｄｅｓｐｒｅａｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ａｌｏｅ；ｉｒｏｎ；ｚｉｎｃ；ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ 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