GBT 18932.6-2002 蜂蜜中甘油含量的测定方法 紫外分光光度法

'ICS67.180.10X31中华人民共和国国家标准GB/T18932.6-2002蜂蜜中甘油含量的测定方法紫外分光光度法Methodforthedeterminationofglycerolcontentsinhoney-UVspectrophotometricmethod2002一12一30发布2003一06一01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 GB/T18932.6-2002前言GB/T18932-2002分为12个部分，本部分为第6部分。GB/T18932的本部分等同采用德国罗氏公司《食品中甘油含量的测定方法—紫外分光光度法》。考虑到我国标准本身的特点及汉语的表达习惯，为使该标准既与国际标准接轨，又适合我国的国情，为此，对《食品中甘油含量的测定方法—紫外分光光度法》的个别内容作了编辑性修改本部分遵循GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写规则》和GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分:化学分析方法》的编写规则。本部分的附录A为资料性附录本部分由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。本部分由中华全国供销合作总社归口。本部分起草单位:中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。本部分参加起草单位:国家蜂产品质量监督检验中心。本部分主要起草人:庞国芳、李学民、曹彦忠、范春林、张进杰、林忠、李子健。本部分系首次发布的国家标准。 GB/T18932.6-2002蜂蜜中甘油含量的测定方法紫外分光光度法范围G13/T18932的本部分规定了蜂蜜中甘油含量紫外分光光度测定方法。本部分适用于蜂蜜中甘油含量的测定本部分甘油的方法检出限为20mg/kg,2规范性引用文件下列文件中的条款通过GB/T18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T6379-1986测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性(neqISO5725:1981)G13/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法(neqISO3696:1987)3原理甘油在甘油激酶催化作用下，与腺昔-5’一三磷酸盐反应生成卜甘油一3-磷酸盐和腺昔一5’一二磷酸盐而生成的腺昔-5’一二磷酸盐在丙酮酸盐激酶的存在下，又与磷酸烯醇丙酮酸盐反应，再转化成腺昔-5’一三磷酸盐和丙酮酸盐。丙酮酸盐在L一乳酸盐脱氢酶的作用下，被烟酞胺腺嗓吟二核昔酸还原为L-乳酸盐。通过在340nm测定烟酞胺腺嗦吟二核昔酸消耗量，计算出甘油含量。4试剂和材料4.1溶液一1;2.0g辅酶和甘氨酸缓冲溶液的混合物.pH=7.4。其中缓冲溶液中含有烟酞胺腺嗦岭二核昔酸，7mg;腺昔一5’一三磷酸盐,22mg;磷酸烯醇丙酮酸盐,11mg;硫酸镁;稳定剂。贮存在4℃冰箱里。使用前在室温下放置1h，加人11mL水，使之完全溶解，摇匀。4.2溶液一n:。4mL的悬浊液。含有丙酮酸盐激酶,240U;L-乳酸盐脱氢酶,220Ua贮存在4℃冰箱里。使用前在室温下放置1h.4.3溶液爪:甘油激酶悬浊液，34Ua贮存在4℃冰箱里。使用前在室温下放置1h,4.4甘油标准溶液:394mg/L贮存在4℃冰箱里。使用前在室温下放置Ih。仅作为测定质量监控用，测定值与给定值允许差为5%04.5水为G13/T6682-1992规定的二级水。仪器5.1紫外分光光度计。5.2比色皿:1cm光路。 GB/T18932.6-20025.3天平:感量。.1mg.5.4微量注射器:100IL.试样制备与保存6.1试样的制备对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。分出。.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并标明标记。6.2试样的保存将试样于常温下保存。分析步骤7.1试样测定液的制备称取1g试样，精确到1mg，置于100mL三角瓶中，加水(4.5)使试样完全溶解，定容至20mL7.2测定7.2.1紫外分光光度计测定条件a)波长:340nm;b)温度:200C-250C;c)参比物:空气;d)光源:氖灯。7.2.2紫外分光光度法测定取三个比色皿，分别用于空白溶液、试样测定液和标准溶液的测定。a)对盛空白溶液、试样测定液和标准溶液的比色皿中分别加人1ml溶液一1(4.1);b)对盛空白溶液的比色皿中加人2mL水;对盛试样测定液的比色皿中加人2ml试样测定液(7.1);对盛标准溶液的比色皿中加人0.10mL标准溶液(4.4)和1.9ml水;c)对盛空白溶液、试样测定液和标准溶液的比色皿中分别加人。.010mL溶液一n(4.2);d)将比色皿内溶液充分混合，待反应10min后，用紫外分光光度计在340nm的波长处连续测定空白溶液、试样测定液和标准溶液的吸光度各10次，分别计算各自吸光度的平均值A,;e)对盛空白溶液、试样测定液和标准溶液的比色皿中分别加人。.010mL溶液一IR(4.3);f)操作步骤同d)，分别计算各自吸光度的平均值A;;9)本方法的添加回收率数据参见附录A7.3平行试验按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。结果计算根据上面的测定，分别求出空白溶液和试样测定液两次测定吸光度的差值(A,-A2)，用试样测定液吸光度的差值减去空白溶液吸光度的差值，求出△八，即:,}IA=(A，一Az珠品一(A一Az)2}},················。一(1)蜂蜜中甘油的含量按式(2)计算:C=440XdA········，······⋯⋯(2)式中:C—试样中甘油含量，单位为毫克每千克(mg/kg);pA—由式(1)计算求出; GB/T18932.6-2002440—由甘油相关的物理常数计算得出。9精密度GB/T18932的本部分精密度数据是按照GB/T6379-1986的规定，通过15个实验室对四个添加水平的试样所做的试验中确定的。获得重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算。9.1重复性在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(:)，本部分的重复性限按方程式(3)计算:蜂蜜中甘油的含量在20mg/kg-394mg/kg范围:烤r二1.1401lgin一1.5949···············⋯⋯(3)式中:。—两次测定值的平均值，单位为毫克每千克(mg/kg),如果两次测定值的差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2再现性在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，本部分再现性限按方程式(4)计算:蜂蜜中甘油的含量在20mg/kg--394mg/kg范围:一lgR二1.0529lgrn一1.2138式中:。—两次测定值的平均值，单位为毫克每千克(mg/kg), GB/T18932.6-2002附录A(资料性附录)回收率本方法中甘油添加浓度及回收率的试验数据:在添加量为20mg/kg时，平均回收率为97.2%;在添加量为100mg/kg时，平均回收率为97.8%;在添加量为200mg/kg时，平均回收率为97.9%;在添加量为394mg/kg时，平均回收率为98.3%e'